复合益生菌剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种复合益生菌剂，属于兽用益生菌领域，它含鸡源乳酸肠球菌AR≥8.0×10

Compound probiotics and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
复合益生菌剂及其制备方法与应用
本专利技术属于兽用益生菌领域，具体涉及一种复合益生菌剂及其制备方法与应用。
技术介绍
近年来，由于消费者对食品安全的关注度不断提升，国家对兽用抗生素的监管也愈发严格，药物饲料添加剂将在2020年全部退出。农业农村部公布关于2018-2021年开展兽用抗菌药使用减量化行动试点工作的通知，明确了养殖端限抗、禁抗的时间表。面对国家出台的“限抗”、“禁抗”政策，开发替代抗生素部分功能的产品，具有较大的市场需求，尤其是以益生菌及其代谢产物为主的微生态制剂具有较好的开发潜力和广阔的应用前景。进一步地，开发功能性益生菌及其代谢产物替代部分抗生素功能，贯彻落实国家政策，可为畜牧业助力，为食品安全保驾护航。目前，应用较广泛的改善鸡输卵管炎的产品多是抗生素、中药制剂以及一些调节肠道的芽孢杆菌制剂，虽然这些产品也能够达到改善鸡输卵管炎的目的，但仍存在以下不足：其一，抗生素类药物因长期使用，造成细菌的耐药性增强，残留，影响食品安全等问题，已限制使用；其二，中药制剂以及一些调节肠道的芽孢杆菌制剂针对鸡输卵管的改善效果不佳。因此，现有的改善鸡输卵管炎的产品安全性差、改善效果不好，进而造成鸡产蛋期因输卵管炎导致的蛋品质下降、产蛋率下降以及产蛋高峰期缩短等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的，是要提供一种复合益生菌剂及其制备方法与应用，以解决鸡产蛋期因输卵管炎导致的蛋品质下降、产蛋率下降以及产蛋高峰期缩短等问题；本专利技术的另一个目的，是要提供上述复合益生菌剂的一种制备方法；本专利技术的还有一个目的，是要提供上述复合益生菌剂的一种应用。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：本专利技术所用到的屎肠球菌S2通常购自山东蔚蓝生物科技有限公司；乳酸片球菌通常购自山东宝来利来生物工程股份有限公司。上述屎肠球菌S2和乳酸片球菌为公众容易得到的普通菌种，其在国内外商业上能够买到。一种复合益生菌剂，它中含鸡源乳酸肠球菌AR≥8.0×1010CFU/mL，屎肠球菌S2≥1.0×1010CFU/mL，乳酸片球菌≥1.0×1010CFU/mL。本专利技术还提供了上述复合益生菌剂的一种制备方法，它是由体积份数5-8份鸡源乳酸肠球菌AR发酵产物的菌液、体积份数1-3份屎肠球菌S2发酵产物的菌液和体积份数1-2份乳酸片球菌发酵产物的菌液复配而成。作为本专利技术的一种限定，各菌液是由相应的菌泥复溶制得，即：鸡源乳酸肠球菌AR发酵产物的菌液是由鸡源乳酸肠球菌AR发酵产物的菌泥复溶制得；屎肠球菌S2发酵产物的菌液是由屎肠球菌S2发酵产物的菌泥复溶制得；乳酸片球菌发酵产物的菌液是由乳酸片球菌发酵产物的菌泥复溶制得。作为本专利技术的进一步限定，所述复溶是以原发酵液或生理盐水为溶剂溶解菌泥，所得菌液的体积为菌泥体积的比10-30倍。作为本专利技术的进一步限定，菌泥的制备过程均包括依次进行的以下步骤：步骤1）制备活化菌种：取菌种接种至培养基A上，置于细菌培养箱中30-38℃培养24-48h，制得活化菌种；步骤2）制备纯化菌种：取活化菌种接种到培养基B，置于细菌培养摇床中培养，取OD600为1.5-4.0时的菌种，即为纯化菌种，经火焰保护，接入不同的种子罐；步骤3）制备发酵液：根据需求量进行至少一级发酵，制得发酵液；步骤4）制备菌泥：取发酵液离心，制得菌泥。作为本专利技术的更进一步限定，培养基A的主要成分为蛋白胨5.0-14.0g/L、牛肉浸粉1.0-6.0g/L、酵母浸粉1.0-5.0g/L、葡萄糖6.0-25.0g/L、磷酸氢二钾0.5-2.5g/L、柠檬酸三铵1.0-5.0g/L、醋酸钠1.0-6.0g/L、七水硫酸镁0.05-0.3g/L、一水硫酸锰0.01-1g/L、吐温-800.5-2.0g/L、明胶0.5-2.0g/L、番茄汁0.3-2.0g/L、琼脂粉13.0-17.0g/L；调节培养基A的pH值至5.8-6.2。作为本专利技术的更进一步限定，培养基B的主要成分为蛋白胨5.0-14.0g/L、牛肉浸粉1.0-6.0g/L、酵母浸粉1.0-5.0g/L、葡萄糖6-25.0g/L、磷酸氢二钾0.5-2.5g/L、柠檬酸三铵1.0-3.5g/L、醋酸钠1.0-6.0g/L、七水硫酸镁0.05-0.3g/L、一水硫酸锰0.01-0.1g/L、吐温-800.5-2.0g/L、明胶0.5-2.0g/L、番茄汁0.3-2.0g/L；调节培养基B的pH值至5.8-6.2。作为本专利技术的更进一步限定，步骤3）中，一级发酵的条件为：在35-42℃、溶氧DO≥15%条件下，在发酵培养基C上培养6-8h，当分光光度计600nm波长时的吸光值OD600在2.5-3.5之间时，移种至二级种子罐或OD600＞3.5时停罐；当进行二级发酵或若干级发酵时，二级发酵或若干级发酵的条件为：在35-42℃，溶氧DO≥15%，pH5.5-7.0，转速80-120rpm，风量2-5m³/h，罐压0.03-0.07MPa条件下，在发酵培养基C上培养15-18h，当pH回升差值达到0.1时，移种至下一级种子罐或停罐；发酵培养基C的主要成分为蔗糖20-35g/L、麦芽糊精10-25g/L、酵母浸粉10-30g/L、1，4-丁二醇1.0-5.0g/L、蛋白胨4.0-12.0g/L、结晶乙酸钠3.0-9.0g/L、柠檬酸铵0.5-3.0g/L、磷酸氢二钾1.0-3.0g/L、七水硫酸镁0.1-0.7g/L、一水硫酸锰0.01-0.1g/L、吐温-800.5-1.5g/L、司班-800.5-1.5g/L；调节发酵培养基的pH值至6.3-6.7。作为本专利技术的更进一步限定，步骤2）中，取活化菌种接种至培养基B，在35-42℃、150-200rpm条件下，培养14-18h。本专利技术还提供了上述复合益生菌剂的一种应用，所述复合益生菌用于改善鸡输卵管炎。上述的应用，通过将复合益生菌剂以无菌生理盐水稀释后，投入饮水或者拌料给蛋鸡饲喂，连用3-5天实现鸡输卵管炎的改善。具体方法为，将复合益生菌剂以1L无菌生理盐水稀释后，当投入饮水使用时，需先控水，集中2-3h内饮完；当拌料使用时，需当天拌料当天使用完。优选上午8点之前使用。该复合益生菌剂需4-8℃冷藏保存。鸡源乳酸肠球菌AR的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年09月10日，保藏编号为CGMCCNo.18483，拉丁文名称为Enterococcuslactis。鸡源乳酸肠球菌AR为革兰氏染色阳性椭球形细菌，发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、甘露醇，不发酵木糖，不产生硫化氢，不液化明胶，不利用枸橼酸，尿素酶为阴性。在MRS、TSA、BHI和LB培养基上生长良好，菌落大小为1-3mm。耐酸性较强（在pH=3.0的条件下可以正常生长），生长速率高，产酸速度快（含葡萄糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合益生菌剂，其特征在于，所述复合益生菌剂中含鸡源乳酸肠球菌AR≥8.0×10

【技术特征摘要】
1.一种复合益生菌剂，其特征在于，所述复合益生菌剂中含鸡源乳酸肠球菌AR≥8.0×1010CFU/mL，屎肠球菌S2≥1.0×1010CFU/mL，乳酸片球菌≥1.0×1010CFU/mL。


2.权利要求1所述的复合益生菌剂的一种制备方法，其特征在于，它是由体积份数5-8份鸡源乳酸肠球菌AR发酵产物的菌液、体积份数1-3份屎肠球菌S2发酵产物的菌液和体积份数1-2份乳酸片球菌发酵产物的菌液复配而成。


3.根据权利要求2所述的复合益生菌剂的制备方法，其特征在于，各菌液是由相应的菌泥复溶制得。


4.根据权利要求3所述的复合益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述复溶是以原发酵液或生理盐水为溶剂溶解菌泥，所得菌液的体积为菌泥体积的10-30倍。


5.根据权利要求3所述的复合益生菌剂的制备方法，其特征在于，菌泥的制备过程均包括依次进行的以下步骤：
步骤1）制备活化菌种：
取菌种接种至培养基A上，于30-38℃培养24-48h，制得活化菌种；
步骤2）制备纯化菌种：
取活化菌种接种到培养基B，培养，取OD600为1.5-4.0时的菌种，即为纯化菌种，经火焰保护，接入不同的种子罐；
步骤3）制备发酵液：
根据需求量进行至少一级发酵，制得发酵液；
步骤4）制备菌泥：
取发酵液离心，制得菌泥。


6.根据权利要求5所述的复合益生菌剂的制备方法，其特征在于，培养基A的主要成分为蛋白胨5.0-14.0g/L、牛肉浸粉1.0-6.0g/L、酵母浸粉1.0-5.0g/L、葡萄糖6.0-25.0g/L、磷酸氢二钾0.5-2.5g/L、柠檬酸三铵1.0-5.0g/L、醋酸钠1.0-6.0g/L、七水硫酸镁0.05-0.3g/L、一水硫酸锰0.01-1g/L、吐温-800.5-2.0g/L、明胶0.5-2.0g/L、番茄汁0.3-2.0g/L、琼脂粉13.0-17.0g/L；调节培养基A的pH值至5.8-6.2。


7.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨锴，陈淑芳，牛志勇，石虎，
申请(专利权)人：河北科星药业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13