一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法技术

本发明专利技术涉及一种克唑替尼生产过程中的分离测定方法。一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法，采用高效液相色谱仪进行分析，以乙腈和0.1％三氟乙酸水溶液作为流动相，色谱柱温度为20～30℃；以二极管阵列或紫外为检测器，检测波长为254nm；采用反相高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A为体积百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液，流动相B为甲醇或乙腈，流动相流速为0.9～1.1mL/min；进样量为10μL；杂质计算：以主成分参比对照法计算杂质的含量，杂质总和＝∑(已知杂质+未知杂质)。本发明专利技术不仅可以有效地解决其质量控制问题，而且也可以有效地检测克唑替尼的成品质量，减少生产成本和时间的浪费，适用于克唑替尼的过程控制。

A method for the separation and determination of related substances in the preparation of clozatinib

【技术实现步骤摘要】
一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法
本专利技术涉及制药行业，尤其涉及一种克唑替尼生产过程中的分离测定方法。
技术介绍
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，已经成为我国乃至全球范围致死率最高的肿瘤，发病率逐年增高，其中非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最主要的类型。克唑替尼是治疗非小细胞肺癌的靶向药之一，它卓越的疗效也成为最受关注的治疗手段，于2011年8月26日获FDA批准在美国上市，用于治疗变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性的局部晚期或转移性的非小细胞肺癌(NSCLC)的小分子激酶抑制剂。克唑替尼分子量为450.34，分子式为C21H22Cl2FN5O，化学名称为(R)-3-(1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基)-5-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺，CAS号是877399-52-5，结构式：其合成工艺中利用(R)-5-溴-3-(1-(2，6-二氯-3-氟苯基)乙氧基)吡啶-2-胺与(R)-叔丁基4-(4-(6-氨基-5-(1-(2，6-二氯-3-氟苯基)乙氧基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸酯在Pd(dppf)2Cl2催化下，合成了Boc-克唑替尼，随后以乙醇为溶剂，加入浓盐酸脱除Boc，制得克唑替尼盐酸盐，然后用氢氧化钠水溶液将体系调至碱性得到克唑替尼，合成路线为：该合成路线的主要杂质为原料CT-03，即(R)-5-bromo-3-(1-(2,6-dichloro-3-fluorophenyl)ethoxy)pyridin-2-amine，和中间体CT-02，即(R)-tert-butyl4-(4-(6-amino-5-(1-(2,6-dichloro-3-fluorophenyl)ethoxy)pyridin-3-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate。作为靶向药物，其纯度是药物生效的一个很重要的因素，大量的杂质可能干扰靶向作用，使得药物效用降低。目前，文献《高效液相色谱法测定克唑替尼的含量和光学纯度》，詹长娟,王华,吴鹏程，《现代化工》，2016能够对克唑替尼含量进行检测，但是该方法克唑替尼峰前拖尾，不具有良好的对称性，且没有对克唑替尼可能存在的有关物质进行说明；文献《质谱联用法测定人血浆中克唑替尼的浓度》，毕国放，郝光涛，陈学义，《中国临床药理学杂志》，2016无法对原料药研究提供数据支持。克唑替尼作为作为ALK阳性患者的一线用药，有着重要作用，但是克唑替尼有关物质的分析方法目前尚无文献报道。
技术实现思路
本专利技术旨在克服上述现有技术的缺陷，提供了一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法。本专利技术不仅可以有效地解决其质量控制问题，而且也可以有效地预测克唑替尼的成品质量，减少生产成本和时间的浪费，适用于克唑替尼的过程控制。本专利技术是这样的实现的：一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法，采用高效液相色谱仪进行分析，以乙腈和0.1％三氟乙酸水溶液作为流动相，在波长254nm下进行梯度洗脱：具体包括下列步骤：配制空白溶液或者稀释液的步骤，将流动相A和流动相B按照体积比80：20配制；配置对照品储备液的步骤，称取克唑替尼对照品，精密称定于容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度的浓度为1.0mg/mL；配置克唑替尼样品溶液的步骤，称取克唑替尼样品，精密称定于容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度的浓度为0.5mg/mL；配制杂质储备溶液的步骤，分别精密称取CT-01、CT-02、CT-03到容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得杂质CT-01浓度为100μg/mL，杂质CT-02浓度为100μg/mL，杂质CT-03浓度为100μg/mL；配制分离度溶液的步骤，称取克唑替尼对照品，精密称定于容量瓶中，先加少于一半的稀释液溶解再加入杂质储备溶液，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度为0.5mg/mL，杂质CT-02浓度为0.5μg/mL，杂质CT-03浓度为0.5μg/mL；采用高效液相色谱仪，色谱柱温度为20～30℃；以二极管阵列或紫外为检测器，检测波长为254nm；采用反相高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A是体积百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液，流动相B为甲醇或乙腈，流动相流速为0.9～1.1mL/min；进样量为10μL；杂质计算：以主成分参比对照法计算杂质的含量，杂质总和＝∑(已知杂质+未知杂质)。所述的种分离测定克唑替尼有关物质的方法，所述的色谱柱为Kromasil100-5-C18柱，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。所述的种分离测定克唑替尼有关物质的方法，所述的流动相的梯度设置为：初始的时候，流动相A和流动相B的体积比为80：20；7分钟时，流动相A和流动相B的体积比为40∶60；15分钟时，流动相A和流动相B的体积比为40∶60；20分钟时，流动相A和流动相B的体积比为20∶80；25分钟时，流动相A和流动相B的体积比为20∶80。本专利技术分析速度快、分离效果好、而且成本低廉，对克唑替尼原料药有关物质进行了测定和检查。本专利技术的方法专属性、定量限、检测限、线性范围以及重复性较高，对克唑替尼中试合成进行反应情况进行监控，同时对可能存在的杂质进行质量控制。本专利技术的方法方便快捷，结果准确可靠，并同时提高了有关物质的定量分析的灵敏度。本专利技术和已有技术相比，其区分度更高，对称性好。本专利技术的方法，省时省力，精密度高，含量测定结果准确。另外，经过了严格的方法验证，满足研发和生产的需要，为克唑替尼在国内早日上市提供了必要的技术支持。附图说明图1是CT-01、CT-02、CT-03全波长扫描图。图2是空白溶液的液相色谱图。图3是分离度溶液液相色谱图。图4是无降解处理克唑替尼样品溶液液相色谱图。图5是0.5mol/LHCl降解处理克唑替尼样品溶液液相色谱图。图6是0.5mol/LNaOH降解处理克唑替尼样品溶液液相色谱图。图7是氧化降解处理克唑替尼供试品溶液液相色谱图。图8是高温、强光、高湿(样品粉末)降解处理克唑替尼样品溶液液相色谱图。图9是高温、强光、高湿(样品溶液)降解处理克唑替尼样品溶液液相色谱图。具体实施方式本专利技术是这样的实现的：一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法，采用高效液相色谱仪进行分析，以乙腈和0.1％三氟乙酸水溶液作为流动相，色谱柱温度为20～30℃；以二极管阵列或紫外为检测器，检测波长为254nm；采用反相高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A为体积百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液，流动相B为甲醇或乙腈，流动相流速为0.9～1.1mL/min；进样量为10μL；杂质计算：以主成分参比对照法计算杂质的含量，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法，其特征在于：具体包括下列步骤：/n1)配制空白溶液或者稀释液的步骤，将流动相A和流动相B按照体积比80：20配制；/n2)配置对照品储备液的步骤，称取克唑替尼对照品，精密称定于容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度的浓度为1.0mg/mL；/n3)配置克唑替尼样品溶液的步骤，称取克唑替尼样品，精密称定于容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度的浓度为0.5mg/mL；/n4)配制杂质储备溶液的步骤，分别精密称取CT-01、CT-02、CT-03到容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得杂质CT-01浓度为100μg/mL，杂质CT-02浓度为100μg/mL，杂质CT-03浓度为100μg/mL；/n5)配制分离度溶液的步骤，称取克唑替尼对照品，精密称定于容量瓶中，先加少于一半的稀释液溶解再加入杂质储备溶液，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度为0.5mg/mL，杂质CT-02浓度为0.5μg/mL，杂质CT-03浓度为0.5μg/mL；/n6)采用高效液相色谱仪，色谱柱温度为20～30℃；以二极管阵列或紫外为检测器，检测波长为254nm；采用反相高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A是体积百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液，流动相B为甲醇或乙腈，流动相流速为0.9～1.1mL/min；进样量为10μL；/n7)杂质计算：以主成分参比对照法计算杂质的含量，/n杂质总和＝∑(已知杂质+未知杂质)。/n...

【技术特征摘要】
1.一种分离测定克唑替尼制备过程中有关物质的方法，其特征在于：具体包括下列步骤：
1)配制空白溶液或者稀释液的步骤，将流动相A和流动相B按照体积比80：20配制；
2)配置对照品储备液的步骤，称取克唑替尼对照品，精密称定于容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度的浓度为1.0mg/mL；
3)配置克唑替尼样品溶液的步骤，称取克唑替尼样品，精密称定于容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度的浓度为0.5mg/mL；
4)配制杂质储备溶液的步骤，分别精密称取CT-01、CT-02、CT-03到容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得杂质CT-01浓度为100μg/mL，杂质CT-02浓度为100μg/mL，杂质CT-03浓度为100μg/mL；
5)配制分离度溶液的步骤，称取克唑替尼对照品，精密称定于容量瓶中，先加少于一半的稀释液溶解再加入杂质储备溶液，用稀释液稀释至刻度，混匀，使得克唑替尼浓度为0.5mg/mL，杂质CT-02浓度为0.5μg/mL，杂质CT-03浓度为0.5μg/mL；
6)采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勤勤，王亚萍，于万盛，张荣，周艺军，彭邱君，路燕，
申请(专利权)人：上海柏狮生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31