【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分析荧光免疫斑点测定的方法和系统
本公开总体上涉及研究技术，诸如测定；并且更具体地，涉及用于分析荧光免疫斑点(FluoroSpot)测定的方法和系统本公开还涉及一种计算机可实现的程序，其可操作以在前述设备上执行前述方法。
技术介绍
典型地，诸如测定的研究过程用于医学、分子生物学等等领域。例如，测定广泛地用于免疫学以确定细胞响应于疫苗、传染病、过敏原等的活化率。将抗体作为主要组成部分的测定典型地被称为免疫测定。免疫测定的示例包括，但不限于，酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫斑点(ELISPOT)测定、荧光免疫斑点测定。一般地，免疫测定包括对液体样本中的分析物进行检测和量化或者监测观察中的细胞分泌的分析物(例如，细胞因子和免疫球蛋白)。例如，在荧光免疫斑点测定中，可以将特定于细胞因子的捕获抗体添加到其中具有孔的测定板。此后，可以在存在或不存在活化刺激物的情况下将细胞添加到孔，并且可以培养测定板以允许细胞进行细胞因子分泌。分泌的细胞因子可以由在孔的底部处的固定的特定于细胞因子的捕获抗体捕获。此后，可以移除细胞，并...
【技术保护点】
1.一种用于分析荧光免疫斑点测定的方法(300)，所述方法包括：/n(i)用至少一种激发光照射具有多个孔的测定板的孔，其中在给定的时间，仅由一种激发光照射所述测定板的所述孔；/n(ii)针对所述至少一种激发光中的每一者，以原始图像格式捕获所述孔的至少一个图像，/n(iii)针对所述至少一种激发光中的每一者，生成所述孔中的分析物释放分布的模型，其中针对给定的激发生成所述孔中的所述分析物释放分布的模型/n(a)将针对所述给定的激发光的所述孔的捕获的至少一个图像去卷积以估计预扩散分析物分布；以及/n(b)基于所述预扩散分析物分布中的局部极大值来检测至少一个潜在分析物释放位点；以及...
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
【国外来华专利技术】20170629 SE 1730177-11.一种用于分析荧光免疫斑点测定的方法(300)，所述方法包括：
(i)用至少一种激发光照射具有多个孔的测定板的孔，其中在给定的时间，仅由一种激发光照射所述测定板的所述孔；
(ii)针对所述至少一种激发光中的每一者，以原始图像格式捕获所述孔的至少一个图像，
(iii)针对所述至少一种激发光中的每一者，生成所述孔中的分析物释放分布的模型，其中针对给定的激发生成所述孔中的所述分析物释放分布的模型
(a)将针对所述给定的激发光的所述孔的捕获的至少一个图像去卷积以估计预扩散分析物分布；以及
(b)基于所述预扩散分析物分布中的局部极大值来检测至少一个潜在分析物释放位点；以及
(iv)将多个共同位置的荧光免疫斑点聚类为多分泌物荧光免疫斑点，其中针对分析物释放分布的所有生成的模型执行所述聚类，并且其中所述聚类确定至少一个多分泌物荧光免疫斑点，
其特征在于，针对所述至少一种激发光中的每一者生成所述孔中的所述分析物释放分布的模型包括：基于检测到的至少一个潜在释放位点来优化所述预扩散分析物分布；以及修改所述孔中的所述分析物释放分布的模型以分析其中的至少一个荧光免疫斑点。
2.根据权利要求1所述的方法(300)，其中用于照射所述测定板的所述孔的所述至少一种激发光取决于所述孔的在空间上限定的区域中的所述至少一种荧光团检测到的分析物。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法(300)，其中所述孔的所述至少一个图像指示在空间上定位的分析物来源和在时间上定位的分析物来源。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法(300)，其中将所述孔的所述捕获的至少一个图像去卷积包括实施以下项中的至少一项：稀疏促进的正则化、乘法更新规则、正向-反向近端梯度算法。
5.根据权利要求1所述的方法(300)，其中所述方法还包括：
-生成与所述测定板的X-Y平面相关联的X-Y平台；以及
-基于所述生成的X-Y平台来获得所述至少一个在空间上限定的荧光免疫斑点处的所述荧光强度。
6.根据权利要求5所述的方法(300)，其中通过采用校准算法来生成所述X-Y平台。
7.根据权利要求1所述的方法(300)，其中所述方法还包括识别所述孔的中心以用于确定所述在空间上限定的荧光免疫斑点。
8.根据权利要求1所述的方法(300)，其中基于所述检测到的至少一个潜在分析物释放位点来优化所述预扩散分析物分布被迭代地实施至少一次，并且包括采用以下各项中的至少一项：交替方向法、乘法更新规则、正向-反向近端梯度算法。
9.根据权利要求8中任一项所述的方法(300)，其中修改所述孔中的所述分析物释放分布的模型是基于至少一个用户可选择的参数，其中所述至少一个参数选自包括以下项的组：荧光免疫斑点/荧光强度、荧光免疫斑点大小、估计的分析物释放量、荧光免疫斑点颜色、所述孔中的感兴趣区域。
10.根据权利要求9所述的方法(500)，其中所述方法还包括获得所述至少一个在空间上限定的荧光免疫斑点处的所述荧光强度。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法(300)，其中将所述多个共同位置的荧光免疫斑点聚类采用基于距离的分层聚类算法。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法(300)，其还包括显示所述孔中的分析物释放分布的合成模型，其中所述合成模型包括所述检测到的至少一个荧光免疫斑点，并且其中不同地呈现单分泌物荧光免疫斑点和多分泌物荧光免疫斑点。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法(300)，其中通过成像来执行捕获所述孔的至少一个图像。
14.根据权利要求13所述的方法(300)，其中通过使用以下各项中的至少一项来执行成像：高动态范围成像装置、低动态范围成像装置、数字相机。
15.一种用于分析荧光免疫斑点测定的系统(100)，所述系统(100)包括：
(i)光源布置(102)，其被配置为生成至少一种激发光，其中在给定的时间，所述光源布置(102)仅生成一种激发光；
(ii)准直(112)布置，其定位在生成的激发光的光路上，其中所述准直布置(112)被配置为使所述生成的激发光准直；
(iii)多波段分束器(116)，其定位在准直的激发光的光路上，所述多波段分束器(116)由支撑布置(118)支撑，其中所述多波段分束器被配置为
(a)将所述准直的激发光反射到测定板(120)上，以照射具有多个孔的测定板(120)的孔(200)；
(b)从所述测定板(120)接收所述激发光的反射和发射光；以及
(c)反射被反射的激发光的一部分，同时将所述被反射的激发光的剩余部分和所述发射光传输到滤光布置(122)；
(iv)所述滤光布置(122)，其包括滤光轮(124)和至少一个发射滤光片(126，128)，其中所述滤光轮(124)被配置为在其中容纳所述至少一个发射滤光片(126，128)，并且其中所述至少一个发射滤光片(126，128)被配置为
(d)去除从所述多波段分束器(116)接收到的所述被反射的激发光的所述剩余部分；以及
(e)对所述发射光进行滤光，同时将所述发射光传输到光学布置(130)；
(v)所述光学布置(130)，其被配置为将经滤光的发射光引导到成像装置(132)上；
(vi)所述成像装置(132)，其被配置为针对所述至少一种激发光中的每一者以原始图像格式捕获所述孔(200)的至少一个图像；以及
(vii)处理模块，其耦合到所述成像装置(132)，其中所述处理模块被配置为
(f)针对所述至少一种激发光中的每一者，生成所述孔(200)中的分析物释放分布的模型；以及
(g)将多个共同位置的荧光免疫斑点(202A至202D)聚类为多分泌物荧光免疫斑点，其中针对分析物释放分布的所有生成的模型执行所述聚类，并且其中所述聚类确定至少一个多分泌物荧光免疫斑点。
16.根据权利要求15所述的系统(100)，其中所述系统(100)还包括定位在所述准直的激发光的光路上的至少一个激发滤光片(114)，并且其中所述至少一个激发滤光片(114)被配置为对所述准直的激发光进行滤光。
17.根据权利要求15或16中任一项所述的系统(100)，其中所述光源布置(102)包括定位在致动器布置(110)上的至少一个光源，其中通过以下各项中的至少一项来实施所述至少一个光源：发光二极管、卤素光源、氙光源、激光源。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的系统(100)，其中通过以下各项中的至少一项来实施所述多波段分束器(116)：透明镜、半透明镜、棱镜、二向色镜。
19.根据权利要求15至18中任一项所述的系统(100)，其中所述光学布置(130)包括以下各项中的至少一项：远心透镜、微距透镜。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的系统(100)，其中所述支撑布置(118)是滤光片立方体。
技术研发人员：克里斯蒂安·斯梅德曼，约金·贾尔登，丹尼尔·佩利康，波尔·德尔阿吉拉普拉，克拉斯·马格努森，
申请(专利权)人：迈博太科产品公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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