用荧光素酶活体整株检测转基因植株法及在转基因玉米中的应用制造技术

本发明专利技术属分子生物学及基因工程技术领域，为解决目前转基因植物检测中用一系列操作复杂、耗时、高成本体外分子检测的技术。提供一种用荧光素酶报告分子活体整株检测转基因玉米的方法，荧光素酶报告基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。用超声波介导花粉的转化方法将荧光素酶基因导入到玉米中去，用植物活体成像技术活体、整株、实时检测转基因玉米中的荧光素酶的荧光信号,通过信噪比的引入和应用可鉴定高表达的转基因植株。直观、准确、实时、低成本地淘汰大量非转基因和表达不强的植株或株系,为植物功能基因组学研究中转基因植株的鉴定提供了操作简单、准确、快速、低成本的鉴定方法。

Detection of transgenic plants with luciferase in vivo and its application in transgenic maize

【技术实现步骤摘要】
用荧光素酶活体整株检测转基因植株法及在转基因玉米中的应用
本专利技术属于分子生物学及基因工程
，具体涉及一种采用荧光素酶作报告分子活体整株检测转基因植株法及在检测转基因玉米中的应用。
技术介绍
近年来，基因组学及生物信息学的迅猛发展加快了人们从农作物中获得基因的数量和速度。虽然可以用多种分子生物学的方法对这些基因进行体外功能研究，但通过转基因作物进行的生物学功能验证才是最直接的证明。由于目前农作物遗传转化效率不高，因此，需要获得很大数目的当代受检植株，并且对转基因植株后代植株检测的数量更大。通常转基因植株的鉴定一般经PCR和Southern杂交、RT-PCR和Northern杂交以及Western杂交过程后，证明目标基因是否整合在受体基因组上、是否转录以及是否表达产生功能蛋白，最后从表型进行鉴定。这样的程序存在操作复杂、对仪器设备要求较高、成本高、时间长的问题，并且仅仅是在定性水平上证明是转基因植株，而不能分析转基因植株目的蛋白的表达量。然而，对目的基因的功能研究恰恰需要高表达目的蛋白的转化植株。长期以来，获得高表达目的蛋白的转基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.两种荧光素酶报告基因重组载体，其特征在于：所述荧光素酶报告基因Luc的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示；所述荧光素酶报告基因重组载体由启动子35S和Ubiquitin分别驱动荧光素酶报告基因Luc的表达；所述重组表达载体分别命名为：pMD18T-35s-Luc-Nos和pMD18T-Ub-Luc-Nos。/n

【技术特征摘要】
1.两种荧光素酶报告基因重组载体，其特征在于：所述荧光素酶报告基因Luc的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.1所示；所述荧光素酶报告基因重组载体由启动子35S和Ubiquitin分别驱动荧光素酶报告基因Luc的表达；所述重组表达载体分别命名为：pMD18T-35s-Luc-Nos和pMD18T-Ub-Luc-Nos。


2.根据权利要求1所述的荧光素酶报告基因重组载体，其特征在于：所述35S启动子的序列如序列表中SEQIDNo：2所示；所述Ubiquitin启动子的序列如序列表中SEQIDNo：3所示。


3.一种包含权利要求1或2所述的荧光素酶报告基因重组载体的宿主细胞。


4.根据权利要求3所述宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌Top10细胞。


5.权利要求1或2所述的荧光素酶报告基因重组载体在转基因玉米检测中的应用。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述应用的具体方法为：将权利要求1所述的荧光素酶报告基因重组载体用超声波介导花粉的方法转化玉米获得种子，获得的种子经植物活体成像系统检测后及PCR复检获得转基因阳性植株；转基因阳性植株自交，再经植物活体成像系统检测及PCR复检获...

【专利技术属性】
技术研发人员：白建荣，闫蕾，李锐，常利芳，郝曜山，杨瑞娟，康晨，
申请(专利权)人：山西省农业科学院作物科学研究所，山西省农业科学院生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：山西;14