一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法技术

本发明专利技术公开了一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法，以丹红杨嫩叶作为基因受体材料进行农杆菌介导，从而获得转基因植株。主要步骤包括：丹红杨嫩叶的获得、农杆菌培养、农杆菌侵染、丹红杨不定芽的筛选及分化、植株再生与炼苗移栽。该方法操作简单、可靠性高，为现代生物技术应用于丹红杨品种改良开辟新的途径。

A method of genetic transformation and transgenic plant regeneration of red poplar

【技术实现步骤摘要】
一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法
本专利技术属于生物技术和现代农业
，涉及植物组织培养和遗传转化方法，具体为一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法。
技术介绍
丹红杨是中国林科院培育成功的新一代速生抗虫杨良种，其母本为美洲黑杨50号，父本为美洲黑杨36号，1991年人工控制授粉获得种子，经过苗期初选后，1994年在河南焦作营造家系林，1999年在苏北、豫北焦作市营造区试林，2001年选育成功，2003年底通过国家良种认定，2004年初被授予新品种保护权。丹红杨在焦作丹红杨种苗基地试验3年，经实地观测，丹红杨具有以下突出特点：(一)生长快。基地试验林3年生胸径达到19.7厘米，比中林46大3.8厘米，比107大3.3厘米，比2025大3.5厘米，相应的材积分别大67.3％、59.7％、62.8％。焦作丹红杨种苗基地6年生丹红杨比107材积大49.4％(丹红杨平均胸径34厘米，平均单株材积0.78m3，107平均胸径24.5厘米，平均单株材积0.3370m3，丹红杨材积大79.4％)。r>(二)干形通直圆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)用无菌苗培养基培养丹红杨幼苗获得叶片，培养温度25℃，每天光照16小时；/n2)将含有双元植物表达载体PCAMBIA2300-PtCLE的农杆菌EHA105单克隆于含卡那霉素和利福平的YM培养基上划线培养，将农杆菌菌体置于液体培养基中，加入乙酰丁香酮制得侵染液；/n3)将叶片横向剪2-3刀，剪开的幅度为叶片的三分之二宽度，添加侵染液进行浸染，用滤纸吸干叶片上残留的侵染液，叶片移至共培养基上培养；/n4)将叶片转入筛选培养基培养，将生成的不定芽移入壮苗培养基继续培养；/n5)选取健壮的不定芽，移入生根培养基，根系形成...

【技术特征摘要】
1.一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用无菌苗培养基培养丹红杨幼苗获得叶片，培养温度25℃，每天光照16小时；
2)将含有双元植物表达载体PCAMBIA2300-PtCLE的农杆菌EHA105单克隆于含卡那霉素和利福平的YM培养基上划线培养，将农杆菌菌体置于液体培养基中，加入乙酰丁香酮制得侵染液；
3)将叶片横向剪2-3刀，剪开的幅度为叶片的三分之二宽度，添加侵染液进行浸染，用滤纸吸干叶片上残留的侵染液，叶片移至共培养基上培养；
4)将叶片转入筛选培养基培养，将生成的不定芽移入壮苗培养基继续培养；
5)选取健壮的不定芽，移入生根培养基，根系形成后将幼苗移入生长培养基，待根系发达，苗长到6cm以上时进行移栽；
所述的液体培养基为：WPM+6BA0.1mg/L+TDZ0.001mg/L+KT1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH5.8。
所述的共培养基为：WPM+6BA0.1mg/L+TDZ0.001mg/L+KT1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+乙酰丁香酮100μmol/L，pH5.8。
所述的筛选培养基为：WPM+6BA0.1mg/L+TDZ0.001mg/L+KT1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+卡那霉素20mg/L+头孢霉素300mg/L，pH5.8。


2.根据权利要求1所述的一种丹红杨遗传转化及转基因植株再生的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：卓仁英，乔桂荣，邱文敏，蒋晶，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33