一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株内生解淀粉芽孢杆菌JL‑B05及其应用，属于微生物技术领域。内生解淀粉芽孢杆菌JL‑B05分类命名为解淀粉芽孢杆菌（

An Endophytic Bacillus amylolyticus jl-b05 and its application

【技术实现步骤摘要】
一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05及其应用。
技术介绍
食用菌（Ediblefungi）是一种可供人类食用的大型真菌的统称，或是形成可食用子实体的大型真菌，俗称蘑菇。食用菌具有高蛋白、低脂肪，含人体所需多种氨基酸和微量元素，兼有荤食和素食的优势，同时在作为人类主粮、保健和药用方面前景广泛。食用菌如同我们所熟知的栽培植物一样，都要求适宜的生长环境，在其所能适应的环境条件下才能正常生长发育。如果在食用菌生长发育过程中遭受到了其它生物的侵害或遇到不良环境条件，就会发生病害，其生长发育就会受到影响，发病较轻时影响食用菌的外观口感等，发病严重时则造成食用菌彻底死亡。从食用菌病理性危害发病的原因来看可分成两大类:侵染性病害和非侵染性病害。非侵染性病害是在其生长发育所需要的条件不适宜或生长过程中遭受有害物质影响，并无病原物的侵染，不会在食用菌之间相互传染更不会造成大片污染。对食用菌造成严重影响的是侵染性病害，即因为别的生物寄生或侵染而引发的病害。我国食用菌产业发展的较早，在最近30年发展迅速，食用菌产业进入了产业转型的关键时期，在食用菌栽培过程中，由于病虫的危害导致减产10%-30%，严重的情况下甚至会颗粒无收。近年来研究发现有关食用菌侵染性真菌病害的病原物包括链孢霉（Fusarium）、疣孢霉(Mycogone)形成的病害表现常见的有蘑菇褐腐病、湿泡病、白腐病等；轮枝霉（Verticillium）形成的病害常见的有蘑菇褐斑病、蘑菇干泡病等；树枝状轮枝孢霉（Dactliumdenoides）形成的病害常见的有蘑菇软腐病、蛛网病等。食用菌竞争性真菌病害的病原物包括有毛霉(Mucor)、青霉（Penicillium）、木霉（Trichoderma）、曲霉（Aspergillus）、根霉（Rhizopus）等。侵染性细菌病害的主要病原物包括有欧文氏菌（Erwinia）和假单胞杆菌（Pseudomonas），形成的病害常见的有蘑菇细菌性斑点病、蘑菇细菌凹点病、蘑菇干腐病等。食用菌病害的防治是食用菌生产成败的关键，目前主要的防治方法有抗病菌株的筛选、化学防治、物理防治及生物防治。最常见的方法就是化学防治，但长时间使用单一的化学药剂会使病原菌的抗性增强，防治效果下降，而且药品的残留量大会对人的身体健康造成威胁，也会导致严重的环境污染。生物防治则具有许多优点，因此近些年来受到了世界各地的普遍重视。其中生物防治所用的微生物菌剂能够促进作物生长，增强抗病性，提高产量，改善品质，在许多农作物生产上已取得较好的应用效果。微生物菌剂具有无毒、安全、高效的特点，符合发展生态农业的方向。但微生物菌剂在食用菌栽培中的应用还很少，因此，针对食用菌病害开展生物防治，探索微生物菌剂在食用菌病害防治上的应用是确保食用菌产业良性、健康发展的重要方向之一，应加以大力鼓励与支持。植物内生细菌生活史的一定阶段或全部阶段均生活在健康植物的各种组织和器官内部,并且与植物建立了和谐联合关系。植物内生菌能够引起广泛关注主要是由于它能够产生多种多样的具有农药活性的次生代谢产物，研究表明，含有内生菌的植物宿主一般都具有生长快、抗逆境、抗病害等优势。对作物生长发育、抵抗疾病以及不良环境具有广泛的生物学作用，是非常难得的天然生物资源，在农业生产中具有良好的研究和开发潜力。人们已经从富贵竹、辣椒、柑橘、杨树、烟草、铁皮石斛等多种植物中分离到多种内生细菌，针对植物组织内生且对植物病原菌具有较强拮抗效果的功能细菌也进行了相应的研究，Sheng等从植物体内分离到能降解有机污染物或具有重金属抗性的内生细菌。何红等也证明分离自辣椒的内生芽孢杆菌对辣椒炭疽病菌有拮抗活性。用植物内生的枯草芽孢杆菌处理辣椒苗，然后再接种病原菌，能够将发病率降低到81.49%-93.34%。但目前对食用菌主要病原物具有较强拮抗效果生防功能内生细菌方面尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对食用菌生防菌稀缺的问题，提供一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）JL-B05，已于2019年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.18998，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的菌落特征及菌体形态为：将JL-B05在NA平板培养基上培养24h后形成菌落颜色为白色，无光泽，菌落呈圆形、边缘不整齐，菌落4-5mm；菌体杆状，革兰氏染色阳性，有芽孢，无荚膜。所述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的生理生化特征：JL-B05接触酶反应呈阳性，V．P测定呈阳性，甲基红测定呈阴性，葡萄糖产酸试验阴性，葡萄糖产气试验阴性，柠檬酸盐试验阴性，硝酸盐还原反应呈阳性，淀粉水解呈阴性，需氧性测定呈阳性，吲哚试验呈阴性，丙二酸呈阴性，产H2S试验呈阳性。将所述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，结果表明:JL-B05与Bacillusamyloliquefaciens同处于一个分支上，其16SrDNA序列与Bacillusamyloliquefaciens（KM117160）的相似度达100%。结合菌落形态，生理生化特征和16SrDNA序列分析，鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）。所述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05对食用菌病原菌具有强的拮抗效果，能有效地抑制食用菌病原菌菌丝生长及孢子萌发，内生解淀粉芽孢杆菌挥发性物质对病原菌菌丝生长具有较强的抑制作用。上述一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05在食用菌病原菌防治中的应用。一种含上述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的生物制剂。一种含上述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05过滤液的生物制剂；所述过滤液的制备方法为：取内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，用无菌接种环挑取单菌落，接种于装液量为100mL的LB液体培养基的250mL三角瓶中，在28℃，180r/min的条件下培养3d，4℃，10000r/min离心15min得上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤后，制所过滤液。一种含上述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05灭菌液的生物制剂；所述灭菌液的制备方法为：取内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，用无菌接种环挑取单菌落，接种于装液量为100mL的LB液体培养基的250mL三角瓶中，在28℃，180r/min的条件下培养3d，菌液放入高压灭菌锅，121℃条件下灭菌30min，制得灭菌液。上述含内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，或内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05过滤液，或内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05灭菌液的生物制剂在食用菌病原菌防治中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术的内生解淀粉芽孢杆菌JL-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，其特征在于：所述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的分类命名为解淀粉芽孢杆菌（

【技术特征摘要】
1.一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，其特征在于：所述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）JL-B05，已于2019年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.18998。


2.如权利要求1所述一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05在食用菌病原菌防治中的应用。


3.一种含如权利要求1所述一株内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05的生物制剂。


4.一种含上述内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05过滤液的生物制剂；所述过滤液的制备方法为：取内生解淀粉芽孢杆菌JL-B05，用无菌接种环挑取单...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁宗胜，刘芳，谢宝贵，张国防，
申请(专利权)人：闽江学院，
类型：发明
国别省市：福建;35