一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及乳酸菌剂技术领域，特别涉及一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法，该制备方法包括以下步骤：将乳酸杆菌接种于改良MRS培养基中活化培养，将培养液转接并平铺至细胞培养板中静置培养，获得被膜态菌液；将所述被膜态菌液制成犬用生物被膜态乳酸菌剂。本发明专利技术所述制备方法制得的被膜态乳酸菌剂可以显著提高犬类平均日增重，降低料重比，对犬肠道菌群具有明显调节作用。

A kind of biofilm lactobacillus for dogs and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法
本专利技术涉及乳酸菌剂
，尤其涉及一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法。
技术介绍
犬是最早驯化的动物之一，是目前世界上最为流行的伴侣动物。其在世界范围的喂养规模都极其巨大。如此大规模的饲养是由于犬类具有很大的价值，例如其智力水平较高、具有社会性行为、拥有比人类更发达的感觉器官、在人类社会扮演多种角色、常被训练为工作犬等。因此，犬类的健康受到越来越多的关注。犬类的健康很大程度上依赖于它们的胃肠道微生物，其肠道微生物群落组成和活性与一些疾病相关。这种微生物生态系统在多种方面发挥作用，如影响营养物质的吸收代谢，宿主的营养和保护功能。胃肠道菌群的任何紊乱都可能导致多种疾病的发生，例如腹泻、过敏、肥胖和压力综合征。为了平衡菌群结构和对抗感染，不同的治疗方法都在发展，其中益生菌疗法受到很大的关注。生物被膜是指细菌粘附于接触表面，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂质蛋白等，将其自身包绕其中而形成的大量细菌聚集膜样物。在自然状态下的微生物常以生物被膜态的形式生存，具有传统培养状态不可比拟的优势。目前，关于有害微生物生物被膜的研究比较多，有关益生菌尤其是乳酸菌生物被膜的研究却极为少见，适用于犬类，可有效提高犬类平均日增重，且对犬肠道菌群具有明显调节作用的生物被膜还未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法。本专利技术提供的生物被膜态乳酸菌剂可有效提高犬类平均日增重，对犬肠道菌群具有明显调节作用。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供了一种犬用生物被膜态乳酸菌剂的制备方法，包括以下步骤：将乳酸杆菌接种于改良MRS培养基中活化培养，将培养液转接并平铺至细胞培养板中静置培养，获得被膜态菌液；将所述被膜态菌液制成犬用生物被膜态乳酸菌剂；所述改良MRS培养基包括液体改良MRS培养基和固体改良MRS培养基，所述液体改良MRS培养基由以下组分组成：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，牛肉浸膏10g/L，K2HPO4·3H2O2g/L，乙酸钠5g/L，吐温801g/L，MnSO4·4H2O0.25g/L，0.1％～1％信号因子AI-2；所述固体改良MRS培养基由以上组分和琼脂16g/L组成。一些实施方案中，所述乳酸杆菌为LactobacillusplantarumLR-1。一些具体实施方案中，所述液体改良MRS培养基由以下组分组成：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，牛肉浸膏10g/L，K2HPO4·3H2O2g/L，乙酸钠5g/L，吐温801g/L，MnSO4·4H2O0.25g/L，0.5％信号因子AI-2；所述固体改良MRS培养基由以上组分和琼脂16g/L组成。一些实施方案中，所述活化培养具体为将乳酸杆菌接种于固体改良MRS培养基中划线培养，然后取单菌落于液体改良MRS培养基中进行培养。一些实施方案中，所述划线培养为三区划线培养。一些实施方案中，所述转接具体为：向所述培养液中按照体积比为1:100加入所述液体改良MRS培养基。一些实施方案中，所述静置培养的温度为30℃～37℃，所述静置培养至活菌数≥1×108CFU/mL。一些具体实施例中，所述静置培养的温度为30℃，所述静置培养至活菌数为1×108CFU/mL。一些实施方案中，所述将被膜态菌液制成犬用生物被膜态乳酸菌剂具体为：取所述被膜态菌液经冷冻离心、富集、重悬、冷冻干燥后，制得犬用生物被膜态乳酸菌剂。进一步，所述冷冻离心的温度为4～8℃，时间为5～10min，转速为4000～6000g。一些具体实施方案中，所述冷冻离心的温度为4℃，时间为5min，转速为5000g。一些实施方案中，所述重悬用脱脂乳粉进行。一些具体实施方案中，所述脱脂乳粉与富集后的被膜态菌液的体积比为1:10。一些实施方案中，所述重悬后的活菌数≥1×109CFU/mL。一些具体实施方案中，所述重悬后的活菌数为1×109CFU/mL。一些实施方案中，所述冷冻干燥的温度为-80℃，冷冻干燥的时间为36～48h。本专利技术还提供了由以上制备方法制备得到的犬用生物被膜态乳酸菌剂。一些具体实施方案中，所述犬用生物被膜态乳酸菌剂的剂型为冻干粉。本专利技术提供一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法，所述犬用生物被膜态乳酸菌剂的制备方法包括以下步骤：将乳酸杆菌接种于固体改良MRS培养基中划线培养，取单菌落于液体改良MRS培养基中进行培养，然后将培养液转接并平铺至细胞培养板中静置培养，获得被膜态菌液；取所述被膜态菌液冷冻离心、富集、重悬、冷冻干燥，获得犬用生物被膜态乳酸菌剂。本专利技术采用特定工艺结合改良MRS培养基对乳酸杆菌进行培养，制得的被膜态乳酸菌剂可以显著提高犬类平均日增重，降低料重比，对犬肠道菌群具有明显调节作用附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示实施例3中犬血液IgG含量；图2示实施例3中犬血液sIgA；图3示实施例3中犬血液IL-6含量；图4示实施例3中犬血液TNF-α含量；图5示实施例3中犬血液SOD含量；图6示实施例3中犬血液丙二醛含量；图7示实施例4中犬粪便微生物菌群在门水平的表现情况；图8示实施例4中犬粪便微生物菌群在纲水平的表现情况；图9示实施例4中犬粪便微生物菌群在属水平的表现情况。具体实施方式本专利技术公开了一种犬用生物被膜态乳酸菌剂及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本专利技术。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本专利技术的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本专利技术将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1植物乳杆菌LR-1活化及生物被膜态冻干菌粉的制备配制液体改良MRS培养基、固体改良MRS培养基、0.85％生理盐水，灭菌相应物品、烘干、无菌操作台灭菌。液体改良MRS培养基由以下组分组成：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，MgSO4·7H2O0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种犬用生物被膜态乳酸菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n将乳酸杆菌接种于改良MRS培养基中活化培养，将培养液转接并平铺至细胞培养板中静置培养，获得被膜态菌液；将所述被膜态菌液制成犬用生物被膜态乳酸菌剂；/n所述改良MRS培养基包括液体改良MRS培养基和固体改良MRS培养基，所述液体改良MRS培养基由以下组分组成：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，MgSO

【技术特征摘要】
1.一种犬用生物被膜态乳酸菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将乳酸杆菌接种于改良MRS培养基中活化培养，将培养液转接并平铺至细胞培养板中静置培养，获得被膜态菌液；将所述被膜态菌液制成犬用生物被膜态乳酸菌剂；
所述改良MRS培养基包括液体改良MRS培养基和固体改良MRS培养基，所述液体改良MRS培养基由以下组分组成：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，牛肉浸膏10g/L，K2HPO4·3H2O2g/L，乙酸钠5g/L，吐温801g/L，MnSO4·4H2O0.25g/L，0.1％～1％信号因子AI-2；所述固体改良MRS培养基由以上组分和琼脂16g/L组成。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乳酸杆菌为LactobacillusplantarumLR-1。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液体MRS培养基由以下组分组成：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，柠檬酸二铵2g/L，葡萄糖20g/L，MgSO4·7H2O0.58g/L，牛肉浸膏10g/L，K2HPO4·3H2O2g/L，乙酸钠5g/L，吐温801g/L，MnSO4·4H2O0.25g/L，0.1％～1％信号因子AI-2；所述固体改良MRS培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈则东，朱建平，刘蕾，马艳梅，卢炜，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32