【技术实现步骤摘要】
一种检测GPVI基因启动子区甲基化水平的引物及其检测方法
本专利技术涉及生物基因检测
具体地说是一种检测GPVI基因启动子区甲基化水平的引物及其检测方法。
技术介绍
血小板过度活化会引起不必要的血小板聚集，最终导致血栓形成，引发心血管疾病。近年来，很多研究显示冠心病发生发展过程中与基因表观遗传学DNA甲基化模式絮乱有密切关系。因此，研究DNA甲基化在冠心病发病过程中的作用机制，可为冠心病的诊断和治疗提供新思路。在血小板参与冠心病发生发展过程中，血小板膜上的受体起着关键作用。糖蛋白VI(glycoproteinVI，GPVI)是血小板膜上众多受体之一，也是目前研发新型抗血栓药物的热门靶点。人GPVI基因定位于染色体19q13.4-42，DNA片段长度约为23000bp，基因组结构由8个外显子和7个内含子构成，为I型跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族的一员。GPVI只在血小板及血小板前体细胞--骨髓中的巨核细胞上表达，它是胶原的主要受体，介导血小板与胶原的黏附，并把这一黏附信号通过与其相连的FcRγ链“自外而内”传递...
【技术保护点】
1.一种检测GPVI基因启动子区甲基化水平的引物，其特征在于，包括重亚硫酸盐转化后GPVI基因启动子区的扩增引物对和测序引物GPVI-S；/n所述扩增引物对包括上游引物GPVI-F和下游引物GPVI-R，所述上游引物GPVI-F的序列为5′-ATTAGGGAGTTTATGGGAGTACGG-3′，所述下游引物GPVI-R的序列为：5′-Biotin-ATTCCTCAACCCTATCCTAAACTCTAT-3′；/n所述测序引物GPVI-S的序列为：5′-AATATAGATTAGGTTTTAGTAGG-3′。/n
【技术特征摘要】
1.一种检测GPVI基因启动子区甲基化水平的引物，其特征在于，包括重亚硫酸盐转化后GPVI基因启动子区的扩增引物对和测序引物GPVI-S；
所述扩增引物对包括上游引物GPVI-F和下游引物GPVI-R，所述上游引物GPVI-F的序列为5′-ATTAGGGAGTTTATGGGAGTACGG-3′，所述下游引物GPVI-R的序列为：5′-Biotin-ATTCCTCAACCCTATCCTAAACTCTAT-3′；
所述测序引物GPVI-S的序列为：5′-AATATAGATTAGGTTTTAGTAGG-3′。
2.一种检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，使用权利要求1所述的扩增引物对，对重亚硫酸盐转化后人血液GPVI基因启动子区进行扩增，并使用所述测序引物GPVI-S对所检测的基因区域的5个CpG位点的甲基化比例进行检测，通过检测得到的甲基化率，测定GPVI基因在血液中的表达水平。
3.根据权利要求2所述的检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)血液样本采集；
(2)白细胞分离；
(3)基因组DNA提取；
(4)重亚硫酸盐转化；
(5)GPVI基因启动子区PCR扩增反应；
(6)琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物；
(7)焦磷酸测序反应和结果分析。
4.根据权利要求3所述的检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，使用EDTA抗凝管采集人静脉血2ml。
5.根据权利要求3所述的检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，在步骤(2)中，使用Ficoll密度梯度法分离人静脉血中的白细胞。
6.根据权利要求3所述的检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用Biospin全血基因组DNA提取试剂盒提取白细胞基因组DNA。
7.根据权利要求3所述的检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，在步骤(4)中，使用EZDNA甲基化全套试剂盒-gold中的重亚硫酸盐处理步骤(3)中基因组DNA样本。
8.根据权利要求3所述的检测GPVI基因启动子区甲基化水平的检测方法，其特征在于，在步骤(5)中，重亚硫酸盐转化后GPVI基...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴鸿，韩勇军，高水波，王振涛，雷震，王新洲，高海霞，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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