一种糖基化蜂王浆抗氧化肽及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将蜂王浆蛋白肽与糖混合，得到混合溶液备用；步骤二、将步骤一中的混合溶液在4℃放置8~12h，使其完全水合；步骤三、将步骤二中水合后的蛋白肽，在60℃水浴反应70~75h得到糖基化蜂王浆抗氧化肽。本发明专利技术将酶解后的蜂王浆蛋白肽进行糖基化改性，可以提高蜂王浆蛋白肽的抗氧化活性、溶解度和在肠胃中的抗氧化活性都得到提高，其中分子量＜10KDa的酶解液与麦芽糊精糖基化产物在肠胃中的抗氧化活性提高了4~6倍。

A glycosylated antioxidant peptide of royal jelly and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种糖基化蜂王浆抗氧化肽及其制备方法
本专利技术涉及蜂王浆领域，尤其是一种糖基化蜂王浆抗氧化肽及其制备方法。
技术介绍
蜂王浆又名蜂王乳、蜂皇浆等，由5～15日龄工蜂舌腺和上颚腺分泌，呈乳白色或淡黄色，是一种专门用来喂养蜂王及3日龄幼蜂的特殊浆状物质。新鲜蜂王浆中水分含量占62.5%～70.0%，干物质含量占30.0%～37.5%，蛋白质在其干重中所占比例最高，另外还含有脂类、糖类、游离氨基酸、维生素、矿物质、活性蛋白酶等物质，具有延缓衰老、增强机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗高血压等多项生理保健功效。蜂王浆中的蛋白质和肉类中的完全性蛋白质的不同之处是：不含中性脂肪，不仅含有10种必需氨基酸，还含有12种非必需氨基酸，因此是人类滋补的良好食物。自由基衰老学说认为，人类的衰老是因为人体过多地产生与积累自由基，只有清除这些过多的自由基健康才能有保障。但是张红城及张娟、孙晓军等人分别研究常温下、4℃、-20℃下储存的蜂王浆，结果表明：随着温度升高及贮存时间的延长，蜂王浆的稳定性渐渐变差，水溶性蛋白含量也逐渐下降；特别是其中含量较高且与其生理功效关系密切的蛋白质在储藏的过程中很容易发生变化，从而影响了蜂王浆生理功效的发挥并使其营养价值降低。针对上述问题，CN201810257281.7公开了抗氧化活性新疆黑蜂蜂王浆谷蛋白酶解产物的制备方法，包括如下步骤：(1)制备新疆黑蜂蜂王浆冻干粉；(2)脱脂和制备蜂王浆主蛋白；(3)制备球蛋白及获得醇溶性蛋白制备原料；(4)制备醇溶性蛋白及获得谷蛋白制备原料；(5)制备谷蛋白；(6)制备新疆黑蜂蜂王浆谷蛋白酶解产物；(7)分离谷蛋白酶解产物中不同分子量肽段。该专利中发现抑制亚油酸能力和总抗氧化氧化能力大小顺序为：3kD以下肽段的酶解产物＞3-10kD肽段的酶解产物＞10kD以上肽段的酶解产物。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的在于：针对上述存在的问题，提供一种糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，提高了蜂王浆的抗氧化活性和溶解度。本专利技术采用的技术方案如下：一种糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将蜂王浆蛋白肽与糖混合，得到混合溶液备用；步骤二、将步骤一中的混合溶液在4℃放置8~12h，使其完全水合；步骤三、将步骤二中水合后的蛋白肽，在60℃水浴反应70~75h得到糖基化蜂王浆抗氧化肽。由于采用上述技术方案，将酶解后的蜂王浆蛋白肽进行糖基化改性，可以提高蜂王浆蛋白肽的抗氧化活性、溶解度和在肠胃中的抗氧化活性都得到提高。进一步的，所述糖为蔗糖、葡萄糖、壳聚糖、麦芽糊精或乳糖。进一步的，所述步骤一种蜂王浆蛋白肽的浓度为。进一步的，所述步骤一中所述蜂王浆蛋白肽与糖按照质量比1:0.8~1.2混合。进一步的，所述步骤一中的蜂王浆蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：1.超声处理：将蜂王浆水溶液进行超声处理，备用；超声波辅助技术应用于原料处理，可破坏细胞壁和细胞膜的结构，加速内容物的流出，提高原料的加工效率，使蛋白质酶解更加彻底。同时，超声波处理蛋白，可改变其结构（如自由巯基含量减少，α-螺旋向β-折叠转化等），提高其乳化能力、溶解性、起泡性等。（2）蛋白酶酶解：向步骤（1）超声处理后的蜂王浆水溶液中加入蛋白酶进行酶解反应得到蜂王浆酶解液，备用；（3）灭酶处理：将步骤（2）中酶解后的蜂王浆酶解液进行灭酶处理，然后将灭酶后的蜂王浆快速冷却至室温然后进行离心，提取上清液即蜂王浆蛋白肽。进一步的，还包括步骤（4），所述步骤（4）为将步骤（3）得到的灭酶后的蜂王浆蛋白肽再重复步骤（2）和步骤（3）。进一步的，所述步骤（2）和步骤（4）中的蛋白酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解复合酶、胰蛋白酶中的一种，所述步骤（2）与步骤（4）中添加的蛋白酶不同。由于蛋白酶对肽键作用具有一定专一性，单一蛋白酶水解时只能从某几个固定的氨基酸残基进行水解，水解程度有限；其中动物蛋白水解复合酶是一种复合内切酶，其酶切位点为Ala-、Leu-、Val-和Tyr-；碱性蛋白酶具有一定特异性，能作用于Ala、Phe、Leu和Ile参与形成的多种肽键；木瓜蛋白酶是具有广泛特异性的蛋白酶，酶切位点主要为Arg-、Lys-、Phe-和X-，胰蛋白酶是一种Ser内切蛋白酶，水解R1为Arg或Lys残基侧链的肽键。复合酶解法能强化水解度，得到更低分子量的水解产物。进一步的，所述蛋白酶的添加量为5000~7000U/g，酶解时间为1~1.5h。进一步的，所述步骤（2）中的酶解液还经过超滤膜，所述压力为0.2~0.5MPa，温度为40~55℃，所述超滤膜的分子截留量为10~50KDa。进一步的，步骤（2）中灭酶处理为：将步骤（1）酶解完成的蜂王浆立即进行10min沸水浴，即完成进行灭酶。综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：1.将酶解后的蜂王浆蛋白肽进行糖基化改性，可以提高蜂王浆蛋白肽的抗氧化活性、溶解度和在肠胃中的抗氧化活性都得到提高，其中分子量＜10KDa的酶解液与麦芽糊精糖基化产物在肠胃中的抗氧化活性提高了4~6倍。2.本专利技术采用的蜂王浆蛋白肽的制备方法将蛋白肽水解度提高了3~5倍，肽得率为8.7%~11.8%，同时提高了不同分子量蛋白肽中谷胱甘肽的浓度，提高了分子量＞10KDa蛋白肽的抗氧化活性。附图说明本专利技术将通过例子并参照附图的方式说明，其中：图1为不同种类蛋白肽的酶解效果；图2是不同组合酶的酶解水解度及肽得率；图3是不同组合酶的酶解液抗氧化活性；图4是不同分子量段蜂王浆蛋白肽谷胱甘肽浓度；图5是不同分子量段蜂王浆蛋白肽抗氧化活性；图6是不同糖的糖基化聚丙烯酰胺凝胶电泳图；图7是不同糖糖基化产物抗氧化活性；图8是不同糖糖基化产物溶液性；图9是糖基化产物体外模拟胃肠消化测定结果，附图说明：A-MW＜10KDa，B-10KDa＜MW＜30KDa，C-30KDa＜MW＜50KDa。具体实施方式本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。本说明书（包括任何附加权利要求、摘要）中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。下列实施例中使用的蛋白酶分别为诺维信动物蛋白水解复合酶，诺维信中性蛋白酶，诺维信碱性蛋白酶，诺维信木瓜蛋白酶，诺维信胰蛋白酶。实施例1向按照体积比1:2配置得到蜂王浆水溶液，然后向蜂王浆水溶液中加入6000U/g的复合蛋白酶，酶解反应1h，得到蜂王浆抗氧化蛋白肽。实施例2向按照体积比1:2配置得到蜂王浆水溶液，然后向蜂王浆水溶液中加入6000U本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一、将蜂王浆蛋白肽与糖混合，得到混合溶液备用；/n步骤二、将步骤一中的混合溶液在4℃放置8~12h，使其完全水合；/n步骤三、将步骤二中水合后的蛋白肽，在60℃水浴反应70~75h得到糖基化蜂王浆抗氧化肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将蜂王浆蛋白肽与糖混合，得到混合溶液备用；
步骤二、将步骤一中的混合溶液在4℃放置8~12h，使其完全水合；
步骤三、将步骤二中水合后的蛋白肽，在60℃水浴反应70~75h得到糖基化蜂王浆抗氧化肽。


2.根据权利要求1所述的糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述糖为蔗糖、葡萄糖、壳聚糖、麦芽糊精或乳糖。


3.根据权利要求1所述的糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述步骤一种蜂王浆蛋白肽的谷胱甘肽浓度为100~1000mg/mL。


4.根据权利要求1所述的糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述步骤一中所述蜂王浆蛋白肽与糖按照质量比1:0.8~1.2混合。


5.根据权利要求1所述的糖基化蜂王浆抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的蜂王浆蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
超声处理：将蜂王浆水溶液进行超声处理，备用；
蛋白酶酶解：向步骤（1）超声处理后的蜂王浆水溶液中加入蛋白酶进行酶解反应得到蜂王浆酶解液，备用；
灭酶处理：将步骤（2）中酶解后的蜂王浆酶解液进行灭...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯毅楠，赵存朝，和绍禹，
申请(专利权)人：云南天卉蜂业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53