一种改良的体外诱导耐药方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种改良的体外诱导耐药方法，涉及生物医学技术领域，该方法包括如下步骤：步骤一、对亲本细胞采用第一浓度依次进行给药诱导和停药复苏两个过程，得到第一阶段的相对耐药细胞；步骤二、以第一阶段的相对耐药细胞作为亲本细胞采用第二浓度重复步骤一的给药诱导和停药复苏过程，得到第二阶段的相对耐药细胞，依次经过多个阶段的给药诱导和停药复苏过程获得高度耐药的耐药细胞株；其中，各个阶段的给药诱导的浓度是逐渐递增的；前一个阶段的相对耐药细胞作为后一个阶段的亲本细胞。本发明专利技术方法具有更高的筛选效率，能减少诱导周期，能使耐药性得到更好的传递，最终获得更高的耐药性。

An improved method of inducing drug resistance in vitro

【技术实现步骤摘要】
一种改良的体外诱导耐药方法
本专利技术实施例涉及生物医学
，具体涉及一种改良的体外诱导耐药方法。
技术介绍
药物的耐药性是治疗过程中经常碰见的一个难题，而成功地构建符合标准的耐药模型是进行耐药逆转研究的前提和基础工作。目前主要的体外诱导耐药的方式有两种：间歇刺激法与梯度递增法。但这两种方法各有优劣，间歇刺激法是一种大剂量间断给药的方式，这种方式虽然更能反映临床实况，但最终建立的耐药株的耐药性却不高，同时还存在另一个问题，在诱导过程中因大剂量的给药方式，诱导失败率较高。梯度递增法是目前应用较为广泛的方法，能有效的建立稳定和高度耐药的模型，但却有着诱导周期长，筛选效率低的缺点。因此需要对这两种诱导方法进行改进，以期获得更加有效的体外诱导耐药方法。
技术实现思路
为此，本专利技术实施例提供一种改良的体外诱导耐药方法，以解决现有体外诱导耐药方式存在的建立的耐药株耐药性不高、诱导失败率较高、诱导周期长、筛选效率低等问题。为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：根据本专利技术实施例的第一方面，一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改良的体外诱导耐药方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n步骤一、对亲本细胞采用第一浓度进行给药诱导，直至75％-85％的亲本细胞发生死亡；将给药诱导后留存的细胞进行停药复苏，直至单克隆耐药群落形成且发生融合；对发生融合后的细胞依次重复进行所述给药诱导和所述停药复苏过程1-2次，得到第一阶段的相对耐药细胞；/n步骤二、以第一阶段的相对耐药细胞作为亲本细胞，采用第二浓度，重复步骤一的给药诱导和停药复苏过程，得到第二阶段的相对耐药细胞；经过多个阶段的给药诱导和停药复苏过程，最终通过耐药指数的检测，获得高度耐药的耐药细胞株；其中，各个阶段的给药诱导的浓度是逐渐递增的；前一个阶段的相对耐药...

【技术特征摘要】
1.一种改良的体外诱导耐药方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤一、对亲本细胞采用第一浓度进行给药诱导，直至75％-85％的亲本细胞发生死亡；将给药诱导后留存的细胞进行停药复苏，直至单克隆耐药群落形成且发生融合；对发生融合后的细胞依次重复进行所述给药诱导和所述停药复苏过程1-2次，得到第一阶段的相对耐药细胞；
步骤二、以第一阶段的相对耐药细胞作为亲本细胞，采用第二浓度，重复步骤一的给药诱导和停药复苏过程，得到第二阶段的相对耐药细胞；经过多个阶段的给药诱导和停药复苏过程，最终通过耐药指数的检测，获得高度耐药的耐药细胞株；其中，各个阶段的给药诱导的浓度是逐渐递增的；前一个阶段的相对耐药细胞作为后一个阶段的亲本细胞。


2.如权利要求1所述的一种改良的体外诱导耐药方法，其特征在于，步骤一中，所述亲本细胞为人乳腺癌MDA-MB-231细胞，所述给药诱导的诱导药物为阿霉素。


3.如权利要求2所述的一种改良的体外诱导耐药方法，其特征在于，步骤一中，所述给药诱导的具体条件为：将亲本细胞接种于含10％胎牛血清和第一浓度诱导药物的Leibovitz’sL15培养基中，置于37℃、5％CO2、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐伟，牟坤，黄明华，郭嘉，张惠婷，王德鹏，
申请(专利权)人：山东大学，牟坤，
类型：发明
国别省市：山东;37