一种检测抗苗勒管激素含量的酶联免疫试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种检测抗苗勒管激素含量的双抗夹心酶联免疫试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括由捕获抗体包被的酶标板、样本稀释液、标准品、生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶标记的亲和素、浓缩洗涤液、底物溶液和终止液；其中，所述捕获抗体为鼠抗人AMH抗体；所述样本稀释液为1×PBS+1％BSA+0.05％Tween‑20+0.1％Proclin300；所述标准品为人AMH冻干标准品；所述检测抗体为抗人AMH抗体；所述浓缩洗涤液为含有25×PBS+1.25％Tween20+2.5％Proclin300的25×PBST，其pH为7.6；所述底物溶液为TMB显色底物溶液；所述终止液为2M硫酸。本发明专利技术所述试剂盒及其检测方法减少了人力及设备成本，减少了原料、样本使用量以及降低了成本，从而提高了使用效率。

An enzyme-linked immunosorbent kit for the detection of anti Mullerian hormone and its detection method

【技术实现步骤摘要】
一种检测抗苗勒管激素含量的酶联免疫试剂盒及其检测方法
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种检测抗苗勒管激素含量的酶联免疫试剂盒及其检测方法。
技术介绍
抗苗勒管激素又被称苗勒管为抑制素(Muellerian-inhibitingfactor，Anti-MuellerianhormoneAMH)，其属于转化生长因子β(TGF-β)超家族成员，是一种由二硫键连接的多肽激素。人类AMH基因位于19号染色体短臂，含有5个外显子，编码560个氨基酸的蛋白前体，其羧基端为活性作用端，由二硫键连接而成，分子量为140kDa的二聚糖蛋白。AMH是由两个分子量为70kDa的单体通过二硫键连接而成的同源二聚体糖蛋白，AMH的激活需要水解释放出羧基末端二聚体，才具有促进苗勒管退化的生物活性并能抑制某些肿瘤的生长与分化。AMH与抑制素(Inhibins)、激活素(Activins)、生长分化因子(GDFS)等共同构成转化生长因子(TGF-β)超家族。AMH能够抑制颗粒细胞增殖和卵泡成熟，降低卵泡对卵泡刺激素(FSH)的敏感性，抑制卵泡生长和优势卵泡的选择，从而减慢本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测抗苗勒管激素含量的双抗夹心酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括由捕获抗体包被的酶标板、样本稀释液、标准品、生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶标记的亲和素、浓缩洗涤液、底物溶液和终止液；/n其中，所述捕获抗体为鼠抗人AMH抗体；/n所述样本稀释液为1×PBS+1％BSA+0.05％Tween-20+0.1％Proclin300；/n所述标准品为人AMH冻干标准品；/n所述检测抗体为抗人AMH抗体；/n所述浓缩洗涤液为含有25×PBS+1.25％Tween20+2.5％Proclin300的25×PBST，其pH为7.6；/n所述底物溶液为TMB显色底物溶液；/n所述终止液为2M硫酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测抗苗勒管激素含量的双抗夹心酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括由捕获抗体包被的酶标板、样本稀释液、标准品、生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶标记的亲和素、浓缩洗涤液、底物溶液和终止液；
其中，所述捕获抗体为鼠抗人AMH抗体；
所述样本稀释液为1×PBS+1％BSA+0.05％Tween-20+0.1％Proclin300；
所述标准品为人AMH冻干标准品；
所述检测抗体为抗人AMH抗体；
所述浓缩洗涤液为含有25×PBS+1.25％Tween20+2.5％Proclin300的25×PBST，其pH为7.6；
所述底物溶液为TMB显色底物溶液；
所述终止液为2M硫酸。


2.根据权利要求1所述的检测抗苗勒管激素含量的双抗夹心酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述由捕获抗体包被的酶标板的制备方法包括以下步骤：
(1)将鼠抗人AMH抗体用缓冲液稀释至1～4ug/mL后包被酶标板，每孔为100ug/mL；其中所述缓冲液选自pH为9.6的碳酸盐缓冲液和/或pH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液；
其中，所述碳酸盐缓冲液的制备步骤为：将2.352gNaHCO3和2.332gNa2CO3混合，添加水至1L；
所述磷酸盐缓冲液的制备步骤为：将8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.44gKH2PO4混合，加水至1L；
(2)将经步骤(1)处理的酶标板置于4℃下过夜或者置于37℃恒温箱2h后再于4℃下过夜；
(3)拍干后向每孔添加封闭液进行封闭，然后置于37℃恒温箱2h，再拍干，然后向每孔添加10％蔗糖溶液固定0.5h；其中所述封闭液选自1～5％牛血清白蛋白、2～5％脱脂奶粉和/或5～10％小牛血清；
优选地，所述由捕获抗体包被的酶标板的制备方法包括以下步骤：
(1)将鼠抗人AMH抗体用pH为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至2ug/mL后包被酶标板，每孔为100ug/mL；
(2)将经步骤(1)处理的酶标板置于4℃下过夜；
(3)拍干后向每孔添加2％牛血清白蛋白封闭液进行封闭，然后置于37℃恒温箱2h，再拍干，然后向每孔添加10％蔗糖溶液固定0.5h。


3.根据权利要求1所述的检测抗苗勒管激素含量的双抗夹心酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液中的25×PBS的制备步骤为：将200gNaCL、5gKCL、36gNa2HPO4和11gKH2PO4混合，添加水至1L，调节pH为6.0～6.5；
优选地，所述生物素标记的检测抗体的浓度为0.1～0.4ug/mL；
优选地，所述生物素标记的检测抗体的浓度为0.2ug/mL；
优选地，所述辣根过氧化物酶标记的亲和素的浓度为0.125～0.5ug/mL；
优选地，所述辣根过氧化物酶标记的亲和素的浓度为0.25ug/mL。


4.一种使用根据权利要求1至3中任一项所述的检测抗苗勒管激素含量的双抗夹心酶联免疫试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)制备待测样本处理液，其中所述待测样本选自血清样本、血浆样本、细胞培养物上清液样本、尿液样本或组织裂解液样本；
(2)制备标准品溶液、生物素标记的检测抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、浓缩洗涤液工作液；
(3)将所述待测样本处理液、所述标准品溶液、所述生物素标记的检测抗体稀释液、所述辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液、所述浓缩洗涤液工作液、所述TMB显色底物溶液和所述2M硫酸在18～25℃下平衡15～30min；
(4)取所述由捕获抗体包被的酶标板，分别设标准品孔和待测样本孔，向每个所述标准品孔添加所述标准品溶液50uL，并向每个所述待测样本孔添加所述待测样本处理液50uL；然后向每个孔添加50uL所述生物素标记的检测抗体稀释液，混匀，并于18～25℃下振荡60～120min；
(5)弃去每个孔内的液体，甩干，然后向每个孔中添加所述浓缩洗涤液工作液200uL保持1～2min，重复3次，然后甩干；
(6)向每个孔中添加所述辣根过氧化物酶标记的亲和素稀释液100uL，于18...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓陈玲，华权高，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42