一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法技术

本发明专利技术涉及一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法，该方法包括：样品采集、样品制备，标准曲线绘制，对样品进行离子色谱‑电导法分析和计算人尿中乙醇酸或马尿酸的浓度等步骤。该方法采用了固相萃取方法对尿液中的马尿酸和乙醇酸进行分离提纯，并采用离子色谱‑电导检测法测定了实际尿液中乙醇酸和马尿酸的浓度。该方法可同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度，其检测灵敏、分析快速、重复性好，且操作简单、方法准确可靠，可为实际尿液中马尿酸和乙醇酸的分析检测提供一个良好的方法参考。

A method for simultaneous determination of glycolic acid and hippuric acid in human urine

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法
本专利技术涉及生化检测分析
，尤其是涉及一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法。
技术介绍
肾结石是我国常见的多发病，若发现一种可预测肾结石高危人群的标志物，提前对他们的饮食结构及生活方式等进行干预，从而可减轻病人的痛苦与政府的经济负担。专利技术人前期通过代谢组学的方法，比较了肾结石患者和正常人群尿代谢物之间的差异(具体参见：HNMR-basedmetabolomicstudyofmetabolicprofilingfortheurineofkidneystonepatients)，结果发现了15种差异代谢物，进一步通过ROC曲线和Logistic回归模型，发现联合“马尿酸和组氨酸”、“马尿酸和甘氨酸”、“马尿酸和乙醇酸”和“马尿酸和枸橼酸”的精确度优于单一或其它联合模型，这4组之间无统计学上的差异，敏感性均>90％”，这4组对于区分肾结石人群与对照人群，其特异性最高达84％。因此，可采用这4组代谢物中的任何一组作为标志物来预测肾结石可能发生的情况。通过检测人尿液中上述4种组合中任一组两种物质的浓度，如有一组中的两种代谢物同时异常，提示这些人为肾结石的高危人群，可提前干预并定期复查，从而降低肾结石风险。为了让上述研究成果得到切实的应用，在肾结石的预防和干预中充分发挥作用，本专利技术人依据现有技术对上述任何一组的物质进行检测，均难达到采用同一种方法可快速且稳定地检测上述任一组的两种物质的浓度。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的上述技术问题，本专利技术提供一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法，该方法可同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度，其检测灵敏、分析快速、重复性好，且操作简单、方法准确可靠，可为实际尿液中马尿酸和乙醇酸的分析检测提供一个良好的方法参考。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法，包括如下步骤：S01、样品采集:收集医院肾结石患者及正常对照人群的晨尿，采样时防止污染；S02、样品的制备：分别取5ml水、10ml甲醇、5ml水对C18固相萃取小柱进行浸润、淋洗和活化；用去离子水将S01所采集的尿液稀释5倍后，用C18固相萃取小柱纯化得尿液纯化液；S03、对样品进行离子色谱-电导法分析：将步骤S02所得的尿液纯化液用滤膜过滤器过滤后注入到离子色谱仪中对所述尿液纯化液中的马尿酸和乙醇酸浓度进行分析，其具体色谱条件如下：分离柱：MetrosepA5150阴离子交换柱，淋洗液：3.5mmol/LNa2CO3+3.0mmol/LNaHCO3，流速：0.3ml/min，进样量：2ml，电导检测器检测，50mmol/L的硫酸溶液作为抑制器再生液；S04、根据步骤S03得到的图谱计算样品中乙醇酸或马尿酸对应的峰面积，然后根据峰面积和标准曲线的回归方程自动计算人尿中乙醇酸或马尿酸的浓度。进一步地，步骤S04中标准曲线的制作过程如下：分别配制含有50mg/L、10mg/L和2mg/L的马尿酸与乙醇酸混合标准液，然后，将上述浓度的混合标准液用滤膜过滤器过滤后注入到离子色谱仪中，采用步骤S03的色谱条件对其中的马尿酸和乙醇酸进行分析，以峰面积平均值为横坐标，标准系列浓度为纵坐标绘制标准曲线。相对现有技术，本专利技术的有益效果在于：经过反复的实验探索发现，采用3.5mmol/LNa2CO3+3mmol/LNaHCO3条件，能够同时且较好地将人尿中的乙醇酸和马尿酸分离出来，并且，可将分析的时间缩短在15min之内。总体来说，该方法采用了固相萃取方法对尿液中的马尿酸和乙醇酸待测物进行分离提纯，并采用离子色谱-电导检测法测定了实际尿液中乙醇酸和马尿酸的浓度。该方法可同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度，其检测灵敏、分析快速、重复性好，且操作简单、方法准确可靠，可为实际尿液中马尿酸和乙醇酸的分析检测提供一个良好的方法参考。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术条件摸索人尿的离子色谱图；图2是本专利技术的乙醇酸和马尿酸的标准离子色谱图(50mg/L)；图3是本专利技术的乙醇酸和马尿酸的标准离子色谱图(10mg/L)；图4是本专利技术的乙醇酸和马尿酸的标准离子色谱图(2mg/L)；图5是本专利技术的人尿的离子色谱图；图6是把图5纵坐标的最高值降低后，以凸显出马尿酸和乙醇酸的峰的图谱。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的分析，显然，所描述的仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。为了方便，本专利技术下述实施例所采用的主要仪器与试剂如下：离子色谱仪(瑞士万通883型，配置抑制器模块)，C18固相萃取小柱(WatersSep-Pak)，针筒式滤膜过滤器(津腾)。实施例一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法，包括如下步骤：S01、样品采集:收集我院肾结石患者及正常对照人群的晨尿，采样时防止污染；S02、样品的制备：分别取5ml水、10ml甲醇、5ml水对C18固相萃取小柱进行浸润、淋洗和活化；用去离子水将S01所采集的尿液稀释5倍后加入C18固相萃取小柱中，用洗脱得尿液纯化液；S03、对样品进行离子色谱-电导法分析：将步骤S02所得的尿液纯化液用滤膜过滤器过滤后注入到离子色谱仪中，按照下述色谱条件对所述尿液纯化液中的马尿酸和乙醇酸浓度进行分析，其具体色谱条件如下：分离柱：MetrosepA5150阴离子交换柱，淋洗液：3.5mmol/LNa2CO3+3.0mmol/LNaHCO3，流速：0.3ml/min，进样量：2ml，电导检测器检测，50mmol/L的硫酸溶液作为抑制器再生液；S04、根据步骤S03得到的图谱计算样品中乙醇酸或马尿酸对应的峰面积，然后根据峰面积和标准曲线的回归方程自动计算人尿中乙醇酸或马尿酸的浓度。其中，步骤S04中标准曲线的制作过程如下：分别配制含有50mg/L、10mg/L和2mg/L的马尿酸与乙醇酸混合标准液，然后，将上述浓度的混合标准液用滤膜过滤器过滤后注入到离子色谱仪中，采用步骤S03的色谱条件对其中的马尿酸和乙醇酸进行分析，以峰面积平均值为横坐标(x，(μs/cm)×min)，标准系列浓度为纵坐标(y，mg/L)绘制标准曲线。结果例2.1分离条件的摸索用配置好的50mg/L马尿酸与乙醇酸混合标准液和人尿样本进行分离条件的摸索。对分离条件进行不断摸索，最终摸索出最佳条件为3.5mmol/LNa2CO3+3mmol本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS01、样品采集:收集医院肾结石患者及正常对照人群的晨尿，采样时防止污染；/nS02、样品的制备：分别取5ml水、10ml甲醇、5ml水对C18固相萃取小柱进行浸润、淋洗和活化；用去离子水将S01所采集的尿液稀释5倍后，用C18固相萃取小柱纯化得尿液纯化液；/nS03、对样品进行离子色谱-电导法分析：将步骤S02所得的尿液纯化液用滤膜过滤器过滤后注入到离子色谱仪中对所述尿液纯化液中的马尿酸和乙醇酸进行分析，其具体色谱条件如下：/n分离柱：MetrosepA5150阴离子交换柱，淋洗液：3.5mmol/LNa

【技术特征摘要】
1.一种同时检测人尿中乙醇酸和马尿酸的浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01、样品采集:收集医院肾结石患者及正常对照人群的晨尿，采样时防止污染；
S02、样品的制备：分别取5ml水、10ml甲醇、5ml水对C18固相萃取小柱进行浸润、淋洗和活化；用去离子水将S01所采集的尿液稀释5倍后，用C18固相萃取小柱纯化得尿液纯化液；
S03、对样品进行离子色谱-电导法分析：将步骤S02所得的尿液纯化液用滤膜过滤器过滤后注入到离子色谱仪中对所述尿液纯化液中的马尿酸和乙醇酸进行分析，其具体色谱条件如下：
分离柱：MetrosepA5150阴离子交换柱，淋洗液：3.5mmol/LNa2CO3+3.0mmol/LNaHCO3，流...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾国华，温耀安，欧莉莉，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东;44