定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法技术

本发明专利技术属于分析化学技术领域，具体涉及一种定量检测酒中DL‑2‑羟基‑4‑甲基戊酸乙酯的方法，包括以下步骤：a、向待测酒样品中依次加入电解质、内标物4‑辛醇乙醇溶液，然后加入萃取溶剂萃取，分离有机层，有机层除水后得到待测样品；b、用气相色谱‑质谱联用仪检测待测样品，定性分析后根据样品中EL与4‑辛醇的峰面积比，对照标准曲线计算样品中EL的含量。本发明专利技术利用液液微萃取与气质联用技术检测了不同香型白酒中EL的含量。该方法具有方便快捷，准确度、精确度高，检出限低的特点，适用于不同香型白酒中EL的检测及定量，为进一步研究EL在白酒风味贡献度提供了必要的手段，同时也为白酒品质的改进提供了相关理论依据。

Quantitative determination of ethyl dl-2-hydroxy-4-methylvalerate in wine

【技术实现步骤摘要】
定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法
本专利技术属于分析化学
，具体涉及一种定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法。
技术介绍
DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯又称DL-白氨酸乙酯(EL)，是一种在酿酒发酵过程中产生的具有水果香气的风味物质，在葡萄酒，白兰地，日本清酒，黄酒等中均有发现。国外的研究表明EL在红酒中含量大约在400ug/L，呈现出为一种新鲜黑莓的香气；它对红酒风味的直接影响却是有限的，但它具有一种协同作用，能增强酒中的水果味。因此，EL在葡萄酒的整体风味中起着重要作用。然而，EL作为一种重要的风味物质，其在酒中的定量检测研究在国内还比较少。目前，在葡萄酒、黄酒及部分白酒的部分研究中对EL进行定性，但并未进行准确定量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法。定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，包括以下步骤：a、向待测酒样品中依次加入电解质、内标物4-辛醇乙醇溶液，然后加入萃取溶剂萃取，分离有机层，有机层除水后得到待测样品；b、用气相色谱-质谱联用仪检测待测样品，定性分析后根据样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯与4-辛醇的峰面积比，对照标准曲线计算样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的含量。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤a中，所述电解质为饱和氯化钠水溶液；优选的，所述电解质与样品的体积比为2：1。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤a中，所述4-辛醇乙醇溶液的加入量以4-辛醇计，4-辛醇与样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的质量比为0.4～0.7：0.1～20。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤a中，所述4-辛醇乙醇溶液中4-辛醇浓度为100mg/L。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤a中，所述萃取溶剂为二氯甲烷或乙醚。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤a中，所述萃取剂与酒样品的体积比为1：7～10。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤a为：取10ml待测酒样品，依次加入20ml饱和氯化钠水溶液、50μl4-辛醇乙醇溶液以及1ml二氯甲烷，萃取后离心分离得到有机层，有机层除水后得到待测样品。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤b中，气相色谱-质谱联用仪检测条件如下：气相色谱条件：载气为He，流速1ml/min；色谱柱为HP-INNOWAX(60m*0.25mm*0.25μm)；进样口温度为230℃；不分流进样；柱箱升温程序为40℃保持5min，然后以4℃/min升至230℃并保持5min；进样量：1μl；质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃，扫描范围35.00-350.00amu，SIM模式特征离子m/z69。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤b中，标准曲线由以下方法制备：用52％vol乙醇水溶液将DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯标准品制备成不同浓度梯度的储藏液，然后分别加入氯化钠饱和水溶液、100mg/L4-辛醇的乙醇溶液和二氯甲烷，萃取后离心分离得到有机层，有机层除水后得到不同浓度的标准溶液，用气相色谱-质谱联用仪检测，以DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯与4-辛醇峰面积之比为横坐标，以DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯与4-辛醇浓度比为纵坐标，绘制标准曲线。其中，上述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，步骤b中，所述定性分析是通过样品与标准品的保留时间与NIST14数据库提供的标准质谱图对照，利用匹配度、特征离子以及保留时间进行定性分析。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术利用液液微萃取与气质联用技术检测了不同香型白酒中EL的含量。该方法具有方便快捷，准确度、精确度高，检出限低的特点，适用于不同香型白酒中EL的检测及定量，为进一步研究EL在白酒风味贡献度提供了必要的手段，同时也为白酒品质的改进提供了相关理论依据。附图说明图1为实施例1中EL浓度为4mg/L的标准品与酱香型白酒中EL及内标4-辛醇的分离色谱图。具体实施方式具体的，定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，包括以下步骤：a、向待测酒样品中依次加入电解质、内标物4-辛醇乙醇溶液，然后加入萃取溶剂萃取，分离有机层，有机层除水后得到待测样品；b、用气相色谱-质谱联用仪检测待测样品，定性分析后根据样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯与4-辛醇的峰面积比，对照标准曲线计算样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的含量。本专利技术方法中，加入电解质是为了提高液液萃取的效率，同时防止萃取中出现乳化现象不便分层，只要满足上述条件的电解质均可使用；同时，由于离子浓度的高低会影响萃取效率，本专利技术的专利技术人发现选择高浓度的氯化钠溶液萃取效率更好，因此，本专利技术在实际操作中使用的是氯化钠饱和溶液。本专利技术的方法也可以选择其他内标物，但专利技术人通过大量的实验发现4-辛醇的定量特征离子为69，与EL的一致，而且物质的质谱图相似，用于定量的结果更可靠。其中，内标物的加入量与待测物的量有关，通常白酒中EL的浓度在0.1～20mg/L，内标物一般按照低浓度加入，因此，本专利技术的专利技术人将4-辛醇乙醇溶液的加入量以4-辛醇计，4-辛醇与样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的质量比为0.4～0.7：0.1～20。本专利技术的方法中，萃取溶剂的选择原则为能够萃取目标物。并且与溶剂不互溶。本专利技术的专利技术人通过大量的实验发现，以二氯甲烷为萃取溶剂，对EL的萃取效率高，易获取，毒性小，使用方便，而且不会造成盐析现象。本专利技术的方法为液液微萃取，即用少量的萃取溶剂进行微萃，快速、简便，萃取后可制剂上机测定，而且检出限低。由于有些白酒中EL的含量很低，因此萃取剂的量要小，萃取后相当于将物质浓度提高，可以提高物质在仪器中的响应，更好的完成定量。本专利技术方法中，步骤a为：取10ml待测酒样品，依次加入20ml饱和氯化钠水溶液、50μl4-辛醇乙醇溶液以及1ml二氯甲烷，萃取后离心分离得到有机层，有机层除水后得到待测样品。进一步的，步骤b中，气相色谱-质谱联用仪检测条件如下：气相色谱条件：载气为He，流速1ml/min；色谱柱为HP-INNOWAX(60m*0.25mm*0.25μm)；进样口温度为230℃；不分流进样；柱箱升温程序为40℃保持5min，然后以4℃/min升至230℃并保持5min；进样量：1μl；质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，接口温度250℃，扫描范围35本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：/na、向待测酒样品中依次加入电解质、内标物4-辛醇乙醇溶液，然后加入萃取溶剂萃取，分离有机层，有机层除水后得到待测样品；/nb、用气相色谱-质谱联用仪检测待测样品，定性分析后根据样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯与4-辛醇的峰面积比，对照标准曲线计算样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的含量。/n

【技术特征摘要】
1.定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、向待测酒样品中依次加入电解质、内标物4-辛醇乙醇溶液，然后加入萃取溶剂萃取，分离有机层，有机层除水后得到待测样品；
b、用气相色谱-质谱联用仪检测待测样品，定性分析后根据样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯与4-辛醇的峰面积比，对照标准曲线计算样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的含量。


2.根据权利要求1所述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于：步骤a中，所述电解质为饱和氯化钠水溶液；优选的，所述电解质与样品的体积比为2：1。


3.根据权利要求2所述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于：步骤a中，所述4-辛醇乙醇溶液的加入量以4-辛醇计，4-辛醇与样品中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的质量比为0.4～0.7：0.1～20。


4.根据权利要求1所述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于：步骤a中，所述4-辛醇乙醇溶液中4-辛醇浓度为100mg/L。


5.根据权利要求4所述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于：步骤a中，所述萃取溶剂为二氯甲烷或乙醚。


6.根据权利要求5所述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于：步骤a中，所述萃取剂与酒样品的体积比为1：7～10。


7.根据权利要求1～6任一项所述定量检测酒中DL-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法，其特征在于，步骤a为：取10ml待测酒样品，依次加入20m...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨康卓，郑佳，张建敏，刘芳，何张兰，钱春华，赵东，乔宗伟，彭志云，
申请(专利权)人：宜宾五粮液股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51