一种沙眼衣原体检测胶体金层析试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种沙眼衣原体检测胶体金层析试剂盒及其应用。该试剂盒通过将采集的样本经细胞裂解液裂解后释放病原体核酸，然后在逆转录酶和T7RNA聚合酶的作用下，经过逆转录和转录过程，实现病原体核酸片段的扩增。扩增后的RNA产物被检测液中的特异探针识别捕获，形成RNA扩增产物‑‑‑特异探针‑‑‑金探针复合物，该复合物通过侧向流层析在NC膜上被固定形成可见的条带，实现病原体核酸的检测。本发明专利技术没有RNA的提取过程，不需要特殊仪器，基于RNA恒温扩增，在实际检测中不易污染，具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势，使沙眼衣原体核酸检测得到广泛应用成为一种可能。

A colloidal gold chromatography kit for Chlamydia trachomatis detection and its application

【技术实现步骤摘要】
一种沙眼衣原体检测胶体金层析试剂盒及其应用
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种基于RNA恒温扩增-金探针层析技术检测沙眼衣原体核酸的试剂盒及其应用。
技术介绍
沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)是一类在细胞内寄生的微生物，大小约250～450nm，革兰阴性，圆形或椭圆形；含DNA和RNA以及核糖体；有细胞壁，其结构和组成类似于革兰阴性菌。沙眼衣原体基于抗外膜蛋白单克隆或多克隆抗体的血清分型，将沙眼衣原体分为12个血清型：A-K。其中，A、B/Ba和C型主要引起沙眼；D～K型主要引起泌尿生殖道感染。沙眼衣原体(CT)可引起非淋菌性尿道炎和盆腔炎。沙眼衣原体感染后表现出一系列临床症状，如尿道炎、宫颈炎、前列腺炎、性病性淋巴肉芽肿、Reiter综合征等。沙眼衣原体感染后若未经及时治疗，可引起输卵管性不孕、异位妊娠等一系列并发症，而长期反复的生殖道沙眼衣原体感染，可增加宫颈鳞状上皮细胞癌和艾滋病发病的危险。沙眼衣原体感染在发达国家和发展中国家均极为常见，在很多国家，淋病的发病数逐渐下降，而沙眼衣原体感本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种沙眼衣原体核酸检测胶体金层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是基于RNA恒温扩增-金探针层析技术，包括：/n1）扩增反应液：含40 mM Tris-HCl (pH 8.0)，12 mM MgCl

【技术特征摘要】
1.一种沙眼衣原体核酸检测胶体金层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是基于RNA恒温扩增-金探针层析技术，包括：
1）扩增反应液：含40mMTris-HCl(pH8.0)，12mMMgCl2，70mMKCl，15%DMSO，5mMDTT，每种dNTP各1mM，每种NTP各2mM，扩增引物各0.2µM，扩增中需要两对引物：CT扩增引物、内参基因扩增引物：
（1）CT扩增引物：
CT-R引物（5’-3’）：TAATACGACTCACTATAGGGAGATCGTAACGCCTCTTCATCGG；
CT-F引物（5’-3’）：CATGCAGCACGTTTTGCAAC；
（2）内参基因扩增引物：
内参-R引物（5’-3’）：TAATACGACTCACTATAGGGAGAAGTGGGTAATTTGCGCGC；
内参-F引物（5’-3’）：GCGACGACCCATTCGAAC；
2）扩增酶：包含三种，逆转录酶、T7RNA聚合酶和RnaseH；优选地所述逆转录酶为AMV或M-MLV；
3）核酸提取试剂：细胞裂解液，购至美国Signosis公司，货号CL-0001；
4）检测液：包含胶体金颗粒标记的核酸探针（金探针）、每个指标的特异探针、C线显色探针，每个指标特异探针有两种，分别为CES系列和LES系列，其中CES系列和LES系列又可以设计多条，具体如下：
（1）金探针
金探针5’端被巯基化修饰，所述序列为：
5’-CATCTGCAAGCTCCGTCATCCAGTAGATCTCCAtttttAGAAGGCGTCCCAGATTGAGGC-3’；
（2）沙眼衣原体（CT）特异探针
CT-CES1（5’-3’）：AGGGCGACCTGGAGTATttttAGTGCACTGAGAATGTGCAG；
CT-CES2（5’-3’）：CCACGGATTTTATTCGTAttttAGTGCACTGAGAATGTGCAG；
CT-LES1（5’-3’）：TCTTCTTCAAGATGACGAttttGCCTCAATCTGGGACGCCTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：李先强，姜昕，陈巨，王琳琳，薛金辉，
申请(专利权)人：武汉中帜生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42