一种卵细胞激活培养液及其使用方法技术

本发明专利技术提供了一种卵细胞激活培养液及其使用方法，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：钙离子载体1‑10μmol/L；褪黑素0.01‑100nmol/L；辅酶Q10 0.5‑2.0mg/L；IGF‑2 0.1‑300nmol/L；人血清白蛋白1‑10g/L。上述卵细胞激活培养液能有效弥补精卵结合时的卵子激活缺陷，诱导减数分裂正常进行、雌雄原核形成以及胚胎和胎儿的进一步发育。

A culture medium for activation of oocytes and its application

【技术实现步骤摘要】
一种卵细胞激活培养液及其使用方法
本专利技术涉及辅助生殖
，具体涉及一种卵细胞激活培养液及其使用方法。
技术介绍
辅助生殖技术是人类辅助生殖技术(AssistedReproductiveTechnology，ART)的简称，指采用医疗辅助手段使不育夫妇妊娠的技术，包括人工授精(ArtificialInsemination，AI)和体外受精-胚胎移植(InVitroFertilizationandEmbryoTransfer，IVF-ET)及其衍生技术两大类。其中，体外受精-胚胎移植(IVF-ET),是指将患者双方的卵子与精子取出后，在体外进行受精，然后再将受精卵或者胚胎移植回母体子宫内发育成胎儿。卵母细胞通过成熟促进因子(matur-ationpromotingfactor,MPF)和细胞生长抑制因子(cytostaticfactor,CSF)的调节作用，使发育停滞在第二次减数分裂中期，即MII期；当受精时，卵母细胞胞质内Ca2+浓度瞬间升高形成钙波，钙波之后紧随一系列重复的Ca2+振荡，这种钙振荡可以破坏CSF，导致MPF活性降低甚至消失，引起卵母细胞内的各种代谢活动重新活跃，这个过程被称为卵子激活，促使卵母细胞离开MII期完成减数分裂，形成原核(PN)，释放第二极体(2Pb)，完成受精过程。因此卵子激活决定受精过程能否完成，而胞内钙离子震荡则是卵子激活的一个关键环节。在辅助生殖技术中约有30％的卵母细胞发生受精失败，其中常规IVF受精失败的主要原因是精子穿透失败，ICSI后受精失败的主要原因是卵母细胞激活不足。
技术实现思路
基于此，本专利技术提供一种卵细胞激活培养液及其使用方法，所述卵细胞激活培养液能有效弥补精卵结合时的卵子激活缺陷，诱导减数分裂正常进行、雌雄原核形成以及胚胎和胎儿的进一步发育。具体技术方案为：一种卵细胞激活培养液，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：在其中一些实施例中，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：在其中一些实施例中，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：在其中一些实施例中，所述钙离子载体为A23187钙离子载体。A23187钙离子载体，是通过Ca2+通道跨膜转运，触发Ca2+内流，使胞内Ca2+浓度在短时间内迅速升高，后缓慢下降，促进细胞内的钙振荡。在其中一些实施例中，所述基础培养液包含以下组分：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为(94.25-160.4):(0.1-6):(1-22):(0.01-1.1):(0.07-4.2):(0.1-2.2):(0.01-0.6):(0.001-0.05)。在其中一些实施例中，所述基础培养液包含以下组分：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为(112.5-134.6):(0.4-0.7):(9-11):(0.3-0.4):(0.63-1.05):(0.8-1.2):(0.08-0.12):(0.008-0.012)。在其中一些实施例中，所述无机盐缓冲液包含以下组分：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(80-110):(3.5-8):(0.05-1.2):(0.2-3.2):(10-35):(0.5-3)。在其中一些实施例中，所述无机盐缓冲液包含以下组分：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，且所述氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙的摩尔比为(85-95):(5-6):(0.2-0.4):(0.8-1.2):(20-30):(1.5-2)。在其中一些实施例中，所述氨基酸包括丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸，且所述丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸的摩尔比为(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16):(0.01-0.16)。在其中一些实施例中，所述氨基酸包括丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸，且所述丙氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸的摩尔比为(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11):(0.09-0.11)。在其中一些实施例中，所述卵细胞激活培养液中还含有杀菌剂。在其中一些实施例中，所述杀菌剂选自青霉素、链霉素、硫酸庆大霉素中的一种或多种。在其中一些实施例中，所述杀菌剂为硫酸庆大霉素，且所述卵细胞激活培养液中硫酸庆大霉素的含量为20-100ug/ml。在其中一些实施例中，所述杀菌剂为硫酸庆大霉素，且所述卵细胞激活培养液中硫酸庆大霉素的含量为40-60ug/ml。在其中一些实施例中，所述杀菌剂为硫酸庆大霉素，且所述卵细胞激活培养液中硫酸庆大霉素的含量为50ug/ml。本专利技术还提供了上述卵细胞激活培养液的使用方法。具体技术方案为：一种卵细胞激活培养液的使用方法，包括以下步骤：(1)将上述激活培养液加入培养器皿中或者制作微滴，液体表面覆盖培养用矿物油；(2)将步骤(1)中的培养器皿或微滴于37℃，6％CO2，湿度为95％的培养箱中平衡5～8h；(3)将卵子、ICSI后的卵子或者受精卵，放置于经步骤(2)平衡好的激活培养液中，于37℃，6％CO2，湿度为95％的培养箱中培养5-30min；(4)将激活后的卵子、ICSI后的卵子或者受精卵用所述激活培养液涮洗，然后转入干净的激活培养液里，放入相应培养箱中培养。在其中一些实施例中，所述步骤(3)中将卵子、ICSI后的卵子或者受精卵，放置于经步骤(2)平衡好的激活培养液中，于37℃，6％CO2，湿度为95％的培养箱中培养15min。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术提供了一种卵细胞激活培养液，其含有钙离子载体、褪黑素、辅酶Q10和IGF-2，四种组分之间相互配合，协同增效，可以促进钙离子载体产生更好的激活效果，弥补精卵结合时的卵子激活缺陷，诱导减数分裂正常进行、雌雄原核形成以及胚胎和胎儿的进一步发育。尤其是当卵细胞激活培养液中钙离子载体、褪黑素、辅酶Q10和IGF-2的含量分别为5μmol/L、1nmol/L、1mg/L和50nmol/L时，所述卵细胞激活培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：/n

【技术特征摘要】
1.一种卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：





2.根据权利要求1所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：





3.根据权利要求2所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述卵细胞激活培养液由基础培养液和以下浓度的组分组成：





4.根据权利要求1-3任一项所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述钙离子载体为A23187钙离子载体。


5.根据权利要求1-4任一项所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述基础培养液包含以下组分：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为(94.25-160.4):(0.1-6):(1-22):(0.01-1.1):(0.07-4.2):(0.1-2.2):(0.01-0.6):(0.001-0.05)。


6.根据权利要求5所述的卵细胞激活培养液，其特征在于，所述基础培养液包含以下组分：无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸，且所述无机盐缓冲液、葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠、氨基酸、丙氨酰-谷氨酰胺、牛磺酸、四元羧酸乙二胺四乙酸的摩尔比为(112.5-134.6):(0.4-0.7):(9-11):(0.3-0.4):(0.63-1.05):(0.8-1.2):(0.08-0.12):...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡威，姜永存，曾玉洁，赵衡斌，陈烨，周星宇，吴秀芝，吴文林，
申请(专利权)人：广州裕康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44