一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂及其应用，属于免疫胶体金技术领域。该免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，包括以下按照质量分数计的组分：牛血清白蛋白0~30%、聚乙烯吡咯烷酮0~30%、聚乙二醇0~30%，余量为溶剂。该抗体分散剂可以应用于免疫胶体金均相标记抗体中。本发明专利技术通过上述技术方案可显著提高标记效果的一致性，以及降低待标记样品的投料用量。

An antibody dispersant for immunogold homogeneous labeling and its application

【技术实现步骤摘要】
一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂及其应用
本专利技术涉及免疫胶体金
，具体是一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂及其应用。
技术介绍
免疫胶体金技术（Immunecolloidalgoldtechnique）是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的免疫标记技术，英文缩写为：GICT。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如抗坏血酸、枸橼酸钠等作用下，还原聚合成为特定大小的纳米金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金颗粒带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。目前，常规的免疫胶体金标记抗体的方法包括以下步骤：调整pH值；添加抗体等结合物；封闭处理；添加稳定剂；因其是直接添加结合物，故该方法也称为直接标记法。在生产实践中，基于抗体与胶体金颗粒结合的电吸附理论，抗体与胶体金颗粒的反应速度非常快；另外，不同的的免疫金颗粒结合的抗体分子的数量不同，在抗体投料后，先接触抗体分子的胶体金颗粒优先结合抗体分子，结合的抗体分子的数量也要显著大于后接触抗体分子的胶体金颗粒结合抗体分子的数量；由上可知，影响免疫胶体金标记效果的关键影响因素主要有两个，一是静电吸附反应速度非常快，几乎是瞬时完成；二是胶体金颗粒对蛋白的吸附容量大。这两个因素综合作用造成抗体投料后瞬时被先接触抗体分子的胶体金颗粒所优先吸附。因此，目前免疫胶体金直接标记法存在标记效果的一致性较差、结合物投料量较大等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：一种抗体分散剂在免疫胶体金均相标记抗体中的应用，所述抗体分散剂包括以下按照质量分数计的组分：牛血清白蛋白0~30%、聚乙烯吡咯烷酮0~30%、聚乙二醇0~30%，余量为溶剂，且至多一个组分的质量分数为0%；所述免疫胶体金均相标记抗体的方法包括以下步骤：将待标记抗体、水以及抗体分散剂进行混合后，再添加胶体金溶液进行标记。优选的，所述抗体分散剂包括以下按照质量分数计的组分：牛血清白蛋白10%~20%、聚乙烯吡咯烷酮10%~20%、聚乙二醇10%~20%，余量为溶剂。优选的，所述溶剂为水。与现有技术相比，本专利技术实施例的有益效果是：本专利技术实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，将该抗体分散剂与待标记样品进行混合后，再进行免疫胶体金标记，可显著提高标记效果的一致性，以及降低待标记样品（抗体）的投料用量，从而可以达到提高生产效率和降低成本的目的。具体的，本专利技术采用高分子空间位阻和占位的方法，应用生物大分子和高分子聚合物的混合物与待标记样品（抗体）混合，使胶体金颗粒结束混合物即达到吸附容量饱和，进而使得抗体分子均匀的分散于标记体系，达到每一个胶体金颗粒吸附的抗体分子数量相同的标记效果。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。另外，下述实施例中所涉及的设备和试剂未经特别注明的话，均是采用市售的设备和试剂。实施例1该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，其是由30g的牛血清白蛋白、30g的聚乙二醇以及40g的纯化水混合而得的。实施例2该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，其是由30g的牛血清白蛋白、30g的聚乙烯吡咯烷酮以及40g的纯化水混合而得的。实施例3该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，其是由30g的聚乙烯吡咯烷酮、30g的聚乙二醇以及40g的纯化水混合而得的。实施例4该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，其是由10g的牛血清白蛋白、20g的聚乙烯吡咯烷酮、20g的聚乙二醇以及50g的纯化水混合而得的。实施例5该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，其是由20g的牛血清白蛋白、10g的聚乙烯吡咯烷酮、10g的聚乙二醇以及60g的纯化水混合而得的。实施例6该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用抗体分散剂，其是由15g的牛血清白蛋白、15g的聚乙烯吡咯烷酮、15g的聚乙二醇以及55g的纯化水混合而得的。实施例7该实施例提供一种免疫胶体金均相标记抗体的方法，其包括以下步骤：（1）将待标记样品（抗体）、水以及上述实施例4提供的的抗体分散剂进行涡旋混匀，得到混合液，备用；该混合液中，抗体分散剂的体积分数为40%；待标记样品的质量浓度为1μg/mL。（2）往5mL离心管的离心管中加入2.4mL的胶体金溶液，接着，往离心管中添加15μL摩尔浓度为0.3mol/L的碳酸钾溶液进行涡旋混匀2轮，调节胶体金溶液的pH值。（3）取30μL上述混合液添加至上述离心管中，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置10min；接着，添加24μL质量百分比浓度为12%的牛血清白蛋白溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置5min；然后，添加24μL质量百分比浓度为12%的聚乙二醇溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮后，再使用台式高速离心机，将离心管置于10000rpm的转速进行离心处理4min，弃上清，得到沉淀物。（4）除去上述沉淀物表面的残液，然后加入300μL的复溶液进行摇晃重悬处理，并涡旋混匀2轮，得到标记溶液，即可完成对待标记样品的标记。该标记溶液可以直接加到侧向层析试纸条上进行测试分析。实施例8该实施例提供一种免疫胶体金均相标记抗体的方法，其包括以下步骤：（1）将待标记样品（抗体）、水以及上述实施例5提供的抗体分散剂进行涡旋混匀，得到混合液，备用；该混合液中，抗体分散剂的体积分数为60%；待标记样品的质量浓度为1μg/mL。（2）往5mL离心管的离心管中加入3.6mL的胶体金溶液，接着，往离心管中添加30μL摩尔浓度为0.1mol/L的碳酸钾溶液进行涡旋混匀2轮，调节胶体金溶液的pH值。（3）取30μL上述混合液添加至上述离心管中，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置10min；接着，添加36μL质量百分比浓度为8%的牛血清白蛋白溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置5min；然后，添加36μL质量百分比浓度为8%的聚乙二醇溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮后，再使用台式高速离心机，将离心管置于15000rpm的转速进行离心处本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体分散剂在免疫胶体金均相标记抗体中的应用，其特征在于，所述抗体分散剂包括以下按照质量分数计的组分：牛血清白蛋白0~30%、聚乙烯吡咯烷酮0~30%、聚乙二醇0~30%，余量为溶剂，且至多一个组分的质量分数为0%；所述免疫胶体金均相标记抗体的方法包括以下步骤：/n将待标记抗体、水以及抗体分散剂进行混合后，再添加胶体金溶液进行标记。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗体分散剂在免疫胶体金均相标记抗体中的应用，其特征在于，所述抗体分散剂包括以下按照质量分数计的组分：牛血清白蛋白0~30%、聚乙烯吡咯烷酮0~30%、聚乙二醇0~30%，余量为溶剂，且至多一个组分的质量分数为0%；所述免疫胶体金均相标记抗体的方法包括以下步骤：
将待标记抗体、水以及抗体分散剂进行混合后，再添加胶体金溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨春江，袁志波，马孝斌，
申请(专利权)人：北京纳百生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11