一种高通量研究水稻转录因子的方法技术

本发明专利技术公开了一种高通量研究水稻转录因子的方法，涉及分子生物学与生物化学领域，方法包括将水稻中的1800个转录因子基因序列通过在合适的位点设计引物并用PCR将目标序列扩增出来，扩增产物通过同源重组方法连接进入酵母双杂交的AD载体PGADT7，构建成功的AD载体通过大肠杆菌进行扩繁、抽提并测序鉴定，鉴定正确的载体转入酵母Y187菌株，生成最终的水稻转录因子文库。本发明专利技术为对水稻转录因子进行高通量一对一的筛选的方式提供可行性，所得的阳性质粒无需再进行后续一对一验证及测序，简化了工作流程，提高了水稻转录因子的研究效率。

A high throughput method for the study of rice transcription factors

【技术实现步骤摘要】
一种高通量研究水稻转录因子的方法
本专利技术涉及分子生物学和生物化学领域，尤其涉及一种利用酵母文库高通量研究水稻转录因子的方法。
技术介绍
酵母文库是研究植物蛋白与基因的理想模型。目前主流的应用是在酵母双杂交中，其主要目的是研究蛋白质的相互作用。也有利用酵母文库进行的单杂实验，用于研究蛋白与DNA的相互作用，由于这一特点单杂实验也可以用于研究转录因子与基因的相互作用关系。转录因子是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。但是酵母文库一般都包含一个物种内所有的转录信息，因此对于研究转录因子并不是十分合适。这就需要单独构建一套转录因子文库，这是一件十分繁琐的工程，目前已有一些物种有构建好的转录因子文库，比如拟南芥。但是水稻还一直没有这样形式的文库。传统的筛库实验在筛选得到阳性克隆后，需要进行后续的一对一重复验证试验来确认是否真的为阳性克隆，这就造成后续实验十分繁琐。因此，本领域的技术人员致力于开发一种高通量研究水稻转录因子的方法，以期解决上述问题。...

【技术保护点】
1.一种高通量研究水稻转录因子的方法，其特征在于，包括两部分：/n(1)水稻转录因子库的构建；/n(2)一对一mating筛选。/n

【技术特征摘要】
1.一种高通量研究水稻转录因子的方法，其特征在于，包括两部分：
(1)水稻转录因子库的构建；
(2)一对一mating筛选。


2.根据权利要求1所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，包括以下4个步骤：
(1)设计引物利用PCR扩增将1800个水稻转录因子从cDNA或T载体上扩增出来；
(2)将扩增出来的转录因子片段连接到表达载体上，然后转入大肠杆菌感受态细胞进行扩大培养，获得连接入水稻转录因子序列的质粒；
(3)将获得的质粒转入酵母感受态细胞中；
(4)鉴定验证阳性克隆，将正确的克隆转入深孔板扩大培养，每一个孔是一个水稻转录因子。


3.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(1)所设计的引物序列必须保证与所用载体序列同框表达，不局限于在起始密码子位置开始扩增。


4.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(1)引物设计时需增加同源重组序列或相应的酶切位点序列，PCR扩增所使用的模板包括质粒及水稻cDNA。


5.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树伟，肖云平，赵仕兰，
申请(专利权)人：上海欧易生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31