一种骨肽注射液及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种骨肽注射液及其制备方法与应用。该制备方法包括：取猪或牛四肢骨，粉碎、脱钙、脱脂和洗涤后得到预处理溶液；向预处理溶液中加入酶进行降解得到降解液；将降解液经超滤浓缩，亲和层析处理，收集目标组分的洗脱液；将洗脱液浓缩后，加入活性炭吸附澄清的氯化钠溶液，混匀过滤，添加稳定剂，灌装灭菌后得到骨肽注射液。本发明专利技术通过控制预处理过程中的脱钙方法、脱脂方法的选择，洗涤液的选择，选择亲和层析，获得高产量的注射液；进一步经过降高血压的动物试验表明，本发明专利技术提供的骨肽注射液具有降低血压的药用前景。

Osteopeptide injection and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种骨肽注射液及其制备方法与应用
本专利技术涉及组合物药剂
，尤其是一种骨肽注射液及其制备方法与应用。
技术介绍
动物骨作为药物来治疗疾病历史由来以及。猪四肢骨的有效成型为富含蛋白质、多肽物质，对大鼠急性蛋清性关节炎、亚急性甲醛性关节炎有显著抗炎作用，对酒石酸锑钾引起的疼痛有镇痛作用。通过多年临床实践得知，通过猪四肢骨开发的骨肽注射液用于治疗骨折、增生性骨关节疾病及风湿、类风湿关节炎等效果显著。现有的动物骨提取技术一般仅仅包括提取、去脂、醇提、酸提、碱提、吸附、浓缩等步骤，步骤工艺复杂，提取物产量不高。对于现有的骨肽提取物，一般主要针对足跖肿胀、关节炎、骨折、骨发育等具有一定的功效。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种骨肽注射液及，并本专利技术提供了其制备方法，及其在制备降高血压产品中的应用。本专利技术提供的技术方案如下：一种骨肽注射液的制备方法，包括以下步骤：预处理：取猪或牛四肢骨，粉碎后，进行脱钙和脱脂处理，洗涤后得到预处理溶液；酶解：向所述预处理溶液中加入酶进行降解得到降解液；精制：将所述降解液经过超滤膜进行超滤浓缩，将浓缩液亲和层析处理，收集目标组分的洗脱液；后处理：将所述洗脱液浓缩后，加入0.05-0.08g/ml经活性炭吸附澄清的氯化钠溶液，混匀过滤，混合比例为20-30:1，添加稳定剂，灌装灭菌后得到所述骨肽注射液，于2-8℃保藏。本专利技术还提供了一种骨肽。本专利技术还提供了一种骨肽在制备降高血压产品中的应用。本专利技术提供的技术方案至少包括以下有益效果：1、本专利技术采用预处理、酶解、精制和后处理的步骤，通过控制预处理过程中的脱钙方法、脱脂方法的选择，洗涤液的选择，亲和层析的选择，获得的注射液产量比例高达182mg/kg。2、进一步经过降高血压的动物试验，结果表明，本专利技术提供的骨肽注射液具有降低血压的药用前景。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术作进一步地详细描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。一、骨肽注射液的制备本专利技术提供一种骨肽注射液的制备方法方法，包括步骤：将新生小牛管状骨经预处理、酶解、精制和后处理制备而成。预处理：取猪或牛四肢骨，粉碎后，进行脱钙和脱脂处理，洗涤后得到预处理溶液。脱钙处理方法为离子电解脱钙处理法，包括：于电解槽内盛放脱钙液，将经粉碎后的骨粉投入脱钙液中，电解正极材料由金属铜制成，负极材料由铂金制成，电解温度30-40℃，用2.3～4.0V直流电流通电，骨组织标本与电解液质量比小于1:30，电解过程中需多次更换所述脱钙液。脱钙液选自酸类脱钙液，举例如甲酸氯化铝溶液(G1)、甲酸-甲醛溶液(G2)、Plank-Rychlo溶液(G3)、甲酸-柠檬酸(G4)、AF-硝酸液(G5)、硝酸-尿素液(G6)或HAS脱钙液(G7)。具体的实施方式中，见表1中，如实施例1-10，选择的脱钙处理方法为离子电解脱钙处理法和酸液脱钙处理方法相结合，对比例1-2采用单纯酸液脱钙处理方式。脱脂处理包括有机溶剂处理和低温冷冻处理，所述有机溶剂为乙醇、氯仿、戊烷和己烷中的一种或几种，所述低温为2-8℃。实施例1-10中采用的有机溶剂为乙醇氯仿(1:1体积比)记为Z1，戊烷记为Z2或已烷记为Z3，骨泥与脱脂剂投入料液比均为1:20(g/ml)，150rpm震荡浸泡24h脱脂。洗涤处理中用洗涤液包括NaCl、CaCl2、MgCl2、ZnCl2中的一种或几种，具体见表1实施例1-10，其中溶质总含量为为9％(m/v)，如洗涤液为包含NaCl+ZnCl2的水溶液(记为X1)，其中，NaCl和ZnCl2质量浓度之比为10:1且NaCl和ZnCl2总质量浓度为9％(m/v)；NaCl+CaCl2的水溶液(记为X2)，NaCl和ZnCl2质量浓度之比为10:1且NaCl和ZnCl2总质量浓度为9％(m/v)；NaCl+MgCl2的水溶液(记为X3)，NaCl和MgCl2质量浓度之比为10:1且NaCl和MgCl2总质量浓度为9％(m/v)；NaCl+ZnCl2+MgCl2的水溶液(记为X4)，NaCl、ZnCl2和MgCl2质量浓度之比为5:5:1，且NaCl、ZnCl2和MgCl2总质量浓度为9％(m/v)。对比例1-2为9％的NaCl溶液。洗涤处理的pH值控制在12-13，处理时间不低于2h。洗涤是为了去除不溶性非胶原蛋白。酶解：向预处理溶液中加入酶进行降解得到降解液；具体的，添加的酶可为木瓜蛋白酶、风胃蛋白酶和碱性蛋白酶，产自蒂斯曼中国有限公司；酶解程序为按照pH10-11条件下加入碱性蛋白酶于60℃处理5-7h，再调节pH至6-6.5，加入木瓜蛋白酶，于55℃处理4-5h，最后调节pH至7.0，于50℃处理4-5h。精制：将所述降解液经过超滤膜进行超滤浓缩，超滤膜的截留分子量为8kD-30kD，优选地，截留分子量为10kD。将浓缩液亲和层析处理，收集目标组分的洗脱液；亲和层析所使用的填料为壳聚糖-磷酸钙-丝素蛋白复合体，亲和层析处理过程中，使用第一溶液平衡层析柱和对样品上样，使用第二溶液进行洗脱，收集目标组分溶液。壳聚糖-磷酸钙-丝素蛋白的制备方法：先将蚕粉碎后置于0.5％碳酸钠中沸水漂洗，去除丝胶蛋白和蜡质，再经溶于溴化锂溶液，加入甲壳素、磷酸钙，按照甲壳素与氢氧化钠质量比1:20加入碱液，控制温度90-120℃，即可制得。具体的，第一溶液pH值为7.5-9.0，第二溶液的pH值为4-4.5，第一溶液和第二溶液均包含尿素、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和Tris-氯化钠。优选的，第一溶液为10M尿素、0.1M磷酸氢二钠、0.1M磷酸二氢钠和0.01M的Tris-氯化钠，pH值为8.5；第二溶液为10M尿素、0.1M磷酸氢二钠、0.1M磷酸二氢钠和0.01M的Tris-氯化钠，pH值为4.2。对比例4采用凝胶排阻层析。后处理：将目标组分的洗脱液浓缩后，加入0.05-0.08g/ml经活性炭吸附澄清的氯化钠溶液，混匀过滤，混合比例为20-30:1，添加稳定剂，灌装灭菌后得到骨肽注射液，于2-8℃保藏。表1列出了预处理过程中的脱钙方法、脱脂方法的选择，洗涤液的选择，亲和层析的选择，及亲和层析的上样pH和洗脱pH，结果表明，这些因素均对最终产品中的产量产生影响。具体的，产量为后处理得到的注射液经冻干处理得到的固体质量中多肽和蛋白占原材料骨头比例。相对于对比例，实施例4获得注射液产量最高。表1骨肽注射液的制备二、对自发性高血压的功效试验材料：实验药剂：上述实施例四的注射液，对比例一的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种骨肽注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n预处理：取猪或牛四肢骨，粉碎后，进行脱钙和脱脂处理，洗涤后得到预处理溶液；/n酶解：向所述预处理溶液中加入酶进行降解得到降解液；/n精制：将所述降解液经过超滤膜进行超滤浓缩，将浓缩液亲和层析处理，收集目标组分的洗脱液；/n后处理：将所述洗脱液浓缩后，加入0.05-0.08g/ml经活性炭吸附澄清的氯化钠溶液，混匀过滤，混合比例为20-30:1，添加稳定剂，灌装灭菌后得到所述骨肽注射液，于2-8℃保藏。/n

【技术特征摘要】
1.一种骨肽注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
预处理：取猪或牛四肢骨，粉碎后，进行脱钙和脱脂处理，洗涤后得到预处理溶液；
酶解：向所述预处理溶液中加入酶进行降解得到降解液；
精制：将所述降解液经过超滤膜进行超滤浓缩，将浓缩液亲和层析处理，收集目标组分的洗脱液；
后处理：将所述洗脱液浓缩后，加入0.05-0.08g/ml经活性炭吸附澄清的氯化钠溶液，混匀过滤，混合比例为20-30:1，添加稳定剂，灌装灭菌后得到所述骨肽注射液，于2-8℃保藏。


2.根据权利要求1所述的骨肽注射液的制备方法，其特征在于，所述脱钙处理方法为离子电解脱钙处理法，包括：于电解槽内盛放脱钙液，将经粉碎后的骨粉投入所述脱钙液中，电解正极材料由金属铜制成，负极材料由铂金制成，电解温度30-40℃，用2.3～4.0V直流电流通电，骨组织标本与电解液质量比小于1:30，电解过程中需多次更换所述脱钙液。


3.根据权利要求2所述的骨肽注射液的制备方法，其特征在于，所述脱钙液选自酸类脱钙液。


4.根据权利要求1所述的骨肽注射液的制备方法，其特征在于，所述脱脂处理包括有机溶剂处理和低温...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗先隽，
申请(专利权)人：湖北威仕生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42