用于鉴别H5和H7高致病变异型禽流感病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法技术

本发明专利技术“用于鉴别H5和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法”，属于分子检测领域。所述冻干微芯片的特征是：荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；所述荧光PCR反应体系包括：H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒上下游引物及Taqman探针；H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒上下游引物及Taqman探针。本发明专利技术同时检测H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒，所述检测试剂盒检测方法准确性、特异性和敏感性高，检测时间短。

Freeze dried microchips, kits and methods for the identification of H5 and H7 highly pathogenic avian influenza viruses

【技术实现步骤摘要】
用于鉴别H5和H7高致病变异型禽流感病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法
本专利技术涉及病毒的分子生物学检测
，特别是涉及一种用于鉴别H5和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的冻干微芯片、试剂盒及方法。
技术介绍
高致病性禽流感(Highlypathogenicavianinfluenza,HPAI)是由H5或H7亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)引起多种禽类发生急性感染和高度死亡的一种烈性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告的动物疫病，在我国被列为一类动物疫病。在国务院发布的《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》中，将其列为优先防治和重点防范的动物疫病。禽流感病毒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素(H)/和神经氨酸酶(N)蛋白抗原性的不同，目前可分为17个H亚型(H1～H17)和9个N亚型(N1～N9)。感染人的禽流感病毒亚型主要为H5N1、H9N2、H7N7、H7N9、H10N8等。禽流感病毒可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于鉴别H5和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的冻干微芯片，其特征在于，用于鉴别H5和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；/n所述荧光PCR反应体系包括：下述引物和探针：/nH5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒上游引物：/n5＇-GAAATCAAACAAATTAGTCCTTGCG-3＇，/nH5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒下游引物：/n5＇-GCGTACCCACTCCCCTGC-3＇，/nH5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒Taqman探针：/n5＇-AAGAAAAAGAG...

【技术特征摘要】
1.用于鉴别H5和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的冻干微芯片，其特征在于，用于鉴别H5和H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；
所述荧光PCR反应体系包括：下述引物和探针：
H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒上游引物：
5＇-GAAATCAAACAAATTAGTCCTTGCG-3＇，
H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒下游引物：
5＇-GCGTACCCACTCCCCTGC-3＇，
H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒Taqman探针：
5＇-AAGAAAAAGAGGATTGTTTGGAG-3＇；
H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒上游引物：
5＇-GGAAAATGTCCGAGATATGTTAAGC-3＇，
H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒下游引物：
5＇-CATTTTCAATGAAACCCGCTATAGC-3＇，
H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒Taqman探针：
5＇-GACTGCGAGAGGCCT-3＇。


2.根据权利要求1所述的冻干微芯片，其特征在于，所述荧光PCR反应体系还包括：Taq酶、反转录酶、海藻糖、Tris-Cl、dNTP、Mg2+；
优先地，所述H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒和H75亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的Taqman探针的5`端标记有荧光报告基团；3`端标记有荧光淬灭基团。


3.根据权利要求1或2所述的冻干微芯片，其特征在于，所述荧光PCR反应体系包括：上游引物0.4μM；下游引物0.4μM；Taqman探针0.4μM；DNA聚合酶0.5U/μL；反转录酶0.5U/μL；dNTP0.3mM；Mg2+3mM；海藻糖5μM；Tris-Cl5mM，其余为灭菌去离子水，总体积为36μL，每孔体积为1.2μL；
优先地，所述H5亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的Taqman探针的5`端标记的荧光报告基团为FAM荧光报告基团；
所述H7亚型HA裂解位点插入变异型高致病性禽流感病毒的Taqman探针的5`端标记的荧光报告基团为ROX荧光报告基团；
所述H5亚型HA裂解...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉良，韩焘，王传彬，杨林，王新杰，高姗姗，孙晓明，胡祥钰，
申请(专利权)人：中国动物疫病预防控制中心农业部屠宰技术中心，北京亿森宝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11