【技术实现步骤摘要】
用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片、试剂盒及方法
本专利技术涉及病毒的分子生物学检测
,特别是涉及一种用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片、试剂盒及方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”。该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)引起猪发生繁殖与呼吸障碍的一种重要疫病。PRRSV主要感染猪,尤其是母猪,该病严重影响其生殖功能,临床主要特征为流产,产死胎、木乃伊胎、弱胎,呼吸困难,在发病过程中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀,故又称为蓝耳病。它是近些年危害猪场的头号疾病,不仅会造成母猪出现流产、死胎、发情异常、免疫抑制,还会导致商品猪出现腹泻、呼吸道疾病,严重影响猪只生长速度与健康。猪蓝耳经典毒株具有一定的致病性,但毒力较低,是作为猪蓝耳活疫苗防治高致病猪蓝耳的最 ...
【技术保护点】
1.用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片,其特征在于,用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上;/n所述荧光PCR反应体系包括:下述引物和探针:/n猪蓝耳病毒经典株上游引物:5'-TGTTGTGACTTGAGCGTCGAT-3',/n猪蓝耳病毒经典株下游引物:5'-CAAAAGGCCAGGAACCGTAA-3',/n猪蓝耳病毒经典株Taqman探针序列:5'-TTTGTGATGCTCGTCAGG-3';/nNADC30-Like株上游引物:5'-GCCTCGCTCAGAACTTCCT-3', ...
【技术特征摘要】
1.用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片,其特征在于,用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上;
所述荧光PCR反应体系包括:下述引物和探针:
猪蓝耳病毒经典株上游引物:5'-TGTTGTGACTTGAGCGTCGAT-3',
猪蓝耳病毒经典株下游引物:5'-CAAAAGGCCAGGAACCGTAA-3',
猪蓝耳病毒经典株Taqman探针序列:5'-TTTGTGATGCTCGTCAGG-3';
NADC30-Like株上游引物:5'-GCCTCGCTCAGAACTTCCT-3',
NADC30-Like株下游引物:5'-CACCACGATGTAGGCTTCAG-3',
NADC30-Like株Taqman探针序列:5'-AGCATCTCGTCTCC-3'。
2.根据权利要求1所述的冻干微芯片,其特征在于,所述荧光PCR反应体系还包括:Taq酶、反转录酶、海藻糖、Tris-Cl、dNTP、Mg2+;
优先地,所述猪蓝耳病毒经典株和NADC30-Like株的Taqman探针的5`端标记有荧光报告基团;3`端标记有荧光淬灭基团。
3.根据权利要求1或2所述的冻干微芯片,其特征在于,所述荧光PCR反应体系包括:上游引物0.4μM;下游引物0.4μM;Taqman探针0.4μM;DNA聚合酶0.5U/μL;反转录酶0.5U/μL;dNTP0.3mM;Mg2+3mM;海藻糖5μM;Tris-Cl5mM,其余为灭菌去离子水,总体积为36μL,每孔体积为1.2μL;
优先地,所述猪蓝耳病毒经典株的Taqman探针的5`端标记的荧光报告基团为FAM荧光报告基团;
所述猪蓝耳病毒NADC30-Like株的Taqman探针的5`端标记的荧光报告基团为ROX荧光报告基团;
所述猪蓝耳病毒经典株和NADC30-Like株的Taqman探针3`端标记的荧光淬灭基团为MGB淬灭基团。
4....
【专利技术属性】
技术研发人员:韩焘,周智,倪建强,刘玉良,王传彬,杨林,王新杰,高姗姗,孙晓明,胡祥钰,
申请(专利权)人:中国动物疫病预防控制中心农业部屠宰技术中心,北京亿森宝生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京;11
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