重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备L-草铵膦中的应用制造技术

本发明专利技术公开了重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备L‑草铵膦中的应用，该重组草铵膦脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术通过交错延伸pcr基因重排技术，构建获得重组草铵膦脱氢酶的基因文库，并从中筛选获得酶活、催化性能和立体选择性均高的重组草铵膦脱氢酶；该重组草铵膦脱氢酶的活性较之前突变体PPTDHE3‑A164G和突变体PPTDHE0‑V375S分别提高了31％和35％，最终完全催化108g/L的2‑羰基‑4‑(羟基甲基氧膦基)‑丁酸生产L‑草铵膦仅仅需要20分钟(转氨酶通常需要40小时)，且ee值大于99.5％。

Recombinant glyphosate dehydrogenase, genetically engineered bacteria and their application in the preparation of l-glyphosate

【技术实现步骤摘要】
重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备L-草铵膦中的应用
本专利技术涉及生物化工
，尤其涉及重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备L-草铵膦中的应用。
技术介绍
草铵膦(glufosinate-ammonium)的化学名称为4-[羟基(甲基)膦酰基]-DL-高丙氨酸，是世界第二大转基因作物耐受除草剂，由赫斯特公司(几经合并后现归属拜耳公司)开发生产，又称草铵膦铵盐、Basta、Buster等，属膦酸类除草剂，非选择性(灭生性)触杀型除草剂是谷氨酰胺合成酶抑制剂。草铵膦有两种光学异构体，分别为L-草铵膦和D-草铵膦。但只有L-型具有生理活性，且在土壤中易分解，对人类和动物的毒性较小，除草谱广，对环境的破坏力小。目前，市场上销售的草铵膦一般都是外消旋混合物。若草铵膦产品能以L-构型的纯光学异构体形式使用，可显著降低草铵膦的使用量，这对于提高原子经济性、降低使用成本、减轻环境压力具有重要意义。手性纯L-草铵膦的主要制备方法主要由三种：手性拆分法，化学合成法和生物催化法。生物催化法生产草铵膦则具有立体选择性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组草铵膦脱氢酶，其特征在于，所述重组草铵膦脱氢酶的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组草铵膦脱氢酶，其特征在于，所述重组草铵膦脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.如权利要求1所述的重组草铵膦脱氢酶的编码基因。


3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


4.如权利要求1所述的重组草铵膦脱氢酶在制备L-草铵膦中的应用。


5.一种基因工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，其特征在于，所述目的基因包含如权利要求1所述的重组草铵膦脱氢酶的编码基因。


6.如权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述目的基因还包含葡萄糖脱氢酶的编码基因或甲酸脱氢酶的编码基因。


7.如权利要求5或6任一项所述的基...

【专利技术属性】
技术研发人员：程峰，李清华，薛亚平，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33