【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】无需全身性免疫遏制的同种异体移植物耐受专利
本公开总体上涉及移植领域。本公开进一步涉及用于在移植细胞的环境中产生局部免疫遏制的方法。专利技术背景人胚胎干(ES)细胞和诱导型多能干(iPS)细胞的出现对再生医学和转化医学具有范式转变作用。这些细胞可在多能状态下无限自我更新，同时保留分化为人体中的任何细胞类型的能力。此类性质使研究人员更好地了解人类发育和发育障碍的病因。它们还为现代医学提供了针对用常规医学难以治疗或无法治疗的疾病的强大新工具，所述疾病举几个来说包括脊髓损伤、糖尿病、失明、多发性硬化症和癌症。随着对如何控制干细胞分化和分化的细胞产物的生物学的了解不断增强，细胞疗法的适用疾病的功效和范围只会增加。这些应用带来重要且严峻的挑战。连同细胞安全性，最重要的关注之一是来自不同遗传背景的细胞的免疫排斥。免疫排斥仍然是关键的障碍，因为免疫系统已经进化出一套复杂的机制来识别和消除表达特定蛋白质片段的“非自身”细胞–尤其是来自主要组织相容性复合物(小鼠中的MHC，人中的HLA)的那些–在供体与接受者之间不同(Yang等人,NatRevGenet.18:309-26(2017))。这种响应几乎肯定是保护免受机会性感染和恶性肿瘤的进化压力的副产物，所述机会性感染和恶性肿瘤通常由“外来”蛋白质和表位的存在来定义。视情况而定，移植的细胞或组织的排斥可在数分钟/数小时(超急性)、数天/数月(急性)和数月/年(慢性)的时间尺度内发生(LaRosa等人,JImmunol.178:7503-9(2007))。这种排斥由来自先天性...
【技术保护点】
1.一种细胞，所述细胞经遗传修饰以包含至少一种用于在移植到同种异体宿主中时在移植部位提供局部免疫遏制的机制，所述遗传修饰的细胞包含：/n-一组转基因，每种转基因编码为细胞质、膜结合或局部作用的基因产物，并且其功能是以下中的一种或多种：/na)减轻抗原呈递细胞活化和功能；/nb)减轻攻击移植物的白细胞活性或溶细胞功能；/nc)减轻同种异体移植物细胞的巨噬细胞溶细胞功能和吞噬作用；/nd)诱导攻击移植物的白细胞中的细胞凋亡；/ne)减轻局部炎性蛋白；以及/nf)保护免受白细胞介导的细胞凋亡，/n其中所述组转基因包括以下基因中的两种或更多种：PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8、或Serpin B9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170612 US 62/518151;20180503 US 62/6666261.一种细胞，所述细胞经遗传修饰以包含至少一种用于在移植到同种异体宿主中时在移植部位提供局部免疫遏制的机制，所述遗传修饰的细胞包含：
-一组转基因，每种转基因编码为细胞质、膜结合或局部作用的基因产物，并且其功能是以下中的一种或多种：
a)减轻抗原呈递细胞活化和功能；
b)减轻攻击移植物的白细胞活性或溶细胞功能；
c)减轻同种异体移植物细胞的巨噬细胞溶细胞功能和吞噬作用；
d)诱导攻击移植物的白细胞中的细胞凋亡；
e)减轻局部炎性蛋白；以及
f)保护免受白细胞介导的细胞凋亡，
其中所述组转基因包括以下基因中的两种或更多种：PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8、或SerpinB9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。
2.如权利要求1所述的细胞，其中所述组转基因包括以下基因中的三种、四种、五种、六种、七种或全部八种：PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8、或SerpinB9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。
3.如权利要求1所述的细胞，其中所述组转基因基因包括PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。
4.如权利要求1至3中任一项所述的细胞，其还包含以下转基因中的一种或多种：TGF-β、Cd73、Cd39、Lag3、Il1r2、Ackr2、Tnfrsf22、Tnfrs23、Tnfrsf10、Dad1以及IFNγR1d39，或编码充当TGF-β、Cd73、Cd39、Lag3、Il1r2、Ackr2、Tnfrsf22、Tnfrs23、Tnfrsf10、Dad1或IFNγR1d39的激动剂的生物制剂的基因。
5.如权利要求4所述的细胞，其中所述TGF-β或生物制剂在移植物环境中局部作用。
6.如权利要求1至5中任一项所述的细胞，其中所述细胞是干细胞、适用于基因组编辑的细胞和/或治疗性细胞类型的来源。
7.如权利要求6所述的细胞，其中所述细胞是胚胎干细胞、多能干细胞、诱导型多能干细胞(iPSC)、造血干细胞、间充质干细胞、内皮干细胞、上皮干细胞、脂肪干细胞或祖细胞、种系干细胞、肺干细胞或祖细胞、乳腺干细胞、嗅成体干细胞、毛囊干细胞、肠干细胞或祖细胞、多潜能干细胞、羊膜干细胞、脐带血干细胞、神经干细胞或祖细胞、成体干细胞、体干细胞、组织特异性干细胞、全能干细胞、成纤维细胞、单核细胞前体、B细胞、外分泌细胞、胰腺祖细胞、内分泌祖细胞、成肝细胞、成肌细胞、前脂肪细胞、肝细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、K562人红白血病细胞系、骨细胞、滑膜细胞、肌腱细胞、韧带细胞、半月板细胞、脂肪细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、红细胞-巨核细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、T细胞、胰岛β细胞、神经元、心肌细胞、血细胞、外分泌祖细胞、导管细胞、腺泡细胞、α细胞、β细胞、δ细胞、PP细胞、胆管细胞、白色或棕色脂肪细胞、激素分泌细胞、表皮角质形成细胞、上皮细胞、肾细胞、生殖细胞、骨骼关节滑膜细胞、骨膜细胞、软骨膜细胞、软骨细胞、内皮细胞、心包细胞、脑膜细胞、角质形成细胞前体细胞、角质形成细胞干细胞、周细胞、神经胶质细胞、室管膜细胞、从羊膜或胎盘膜分离的细胞、浆膜细胞、体细胞，或源自皮肤、心脏、脑或脊髓、肝、肺、肾、胰腺、膀胱、骨髓、脾、肠或胃的细胞。
8.如权利要求1至7中任一项所述的细胞，其中所述细胞还包含至少一种用于控制细胞增殖的机制，所述遗传修饰的细胞包含：
a)对一个或多个细胞分裂基因座/基因座(CDL)的遗传修饰，所述CDL是其一种或多种转录产物由分裂细胞表达的一个或多个内源性或外源性基因座，所述遗传修饰是以下中的一种或多种：
i)消除连接(ALINK)系统，所述ALINK系统包含与编码所述CDL的DNA序列转录连接的编码阴性选择性标记物的DNA序列；以及
ii)CDL调控的外源性活化因子(EARC)系统，所述EARC系统包含与所述CDL可操作连接的基于诱导型活化因子的基因表达系统。
9.如权利要求8所述的细胞，其中所述CDL的遗传修饰包括用以下中的一种或多种进行所述CDL的靶向置换：
a)包含所述ALINK系统的DNA载体；
b)包含所述EARC系统的DNA载体；以及
c)包含所述ALINK系统和所述EARC系统的DNA载体；
其中所述ALINK系统和/或EARC系统各自可操作地连接至所述CDL。
10.如权利要求8或9所述的细胞，其中包含所述ALINK系统的CDL的遗传修饰是纯合的、杂合的、半合子的或复合杂合的，和/或其中包含所述EARC系统的CDL的遗传修饰仅通过所述基于诱导型活化因子的基因表达系统的诱导剂导致所述CDL的活化。
11.如权利要求8至10中任一项所述的细胞，其中所述CDL是表5中列举的基因座中的一种或多种。
12.如权利要求11所述的细胞，其中所述CDL编码在以下中的一者或多者中起作用的基因产物：细胞周期、DNA复制、RNA转录、蛋白质翻译和代谢。
13.如权利要求12所述的细胞，其中所述CDL是Cdk1/CDK1、Top2A/TOP2A、Cenpa/CENPA、Birc5/BIRC5以及Eef2/EEF2中的一种或多种，优选地其中所述CDL是Cdk1或CDK1。
14.如权利要求8至13中任一项所述的细胞，其中所述ALINK系统包括单纯疱疹病毒-胸苷激酶/更昔洛韦系统、胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶系统、羧基酯酶/伊立替康系统或iCasp9/AP1903系统，优选地其中所述ALINK系统是单纯疱疹病毒-胸苷激酶/更昔洛韦系统。
15.如权利要求8至13中任一项所述的细胞，其中所述EARC系统是dox-桥系统、香豆酸盐开关诱导型系统、蜕皮激素诱导型系统、无线电波诱导型系统或配体可逆的二聚化系统，优选地其中所述ERAC系统是dox-桥系统。
16.如权利要求1至15中任一项所述的细胞，其中PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6中的一种或多种以等于或大于活化的白细胞中相应内源性基因的表达水平的水平表达。
17.如权利要求16所述的细胞，其中PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6中的全部八种以等于或大于活化的白细胞中相应内源性基因的表达水平的水平表达。
18.如权利要求1至17中任一项所述的细胞，其中所述PD-L1转基因编码与SEQIDNO:11或SEQIDNO:12的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
19.如权利要求1至18中任一项所述的细胞，其中所述HLA-G或H2-M3转基因编码与SEQIDNO:16或SEQIDNO:15的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
20.如权利要求1至19中任一项所述的细胞，其中所述Cd47转基因编码与SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
21.如权利要求1至20中任一项所述的细胞，其中所述CD200转基因编码与SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
22.如权利要求1至21中任一项所述的细胞，其中所述FASLG或FasL转基因编码与SEQIDNO:10或SEQIDNO:9的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
23.如权利要求1至22中任一项所述的细胞，其中所述Ccl21或Ccl21b转基因编码与SEQIDNO:2或SEQIDNO:1的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
24.如权利要求1至23中任一项所述的细胞，其中所述Mfge8转基因编码与SEQIDNO:13或SEQIDNO:14的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
25.如权利要求1至24中任一项所述的细胞，其中所述SerpinB9或Spi6转基因编码与SEQIDNO:8或SEQIDNO:7的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
26.如权利要求4至25中任一项所述的细胞，其中所述IFNγR1d39转基因编码与SEQIDNO:17的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
27.如权利要求1至26中任一项所述的细胞，其中所述两种或更多种转基因可操作地连接至组成型启动子。
28.如权利要求27所述的细胞，其中所述组成型启动子选自由以下组成的组：CAG启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、EF1α启动子、PGK启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5K启动子、SV40启动子、HSV的tk启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、HIV的LTR启动子、莫洛尼病毒的启动子、爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)启动子以及劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子。
29.如权利要求1至28中任一项所述的细胞，其中所述细胞还包含编码治疗剂的转基因。
30.如权利要求29所述的细胞，其中所述治疗剂是蛋白质或抗体。
31.如权利要求30所述的细胞，其中所述抗体是抑制性抗体或激动剂抗体。
32.如权利要求29至31中任一项所述的细胞，其中所述治疗剂是表2中列出的剂或已知在癌症、酶或激素缺乏症、代谢病症或变性疾病中突变的基因的野生型型式。
33.如权利要求29至32中任一项所述的细胞，其中所述治疗剂使用选自由以下组成的组的诱导型表达系统来表达：四环素响应元件、光诱导型系统、放射遗传系统、香豆酸盐开关诱导型系统、蜕皮激素诱导型系统、去稳定结构域系统或配体可逆的二聚化系统。
34.如权利要求29至32中任一项所述的细胞，其中所述治疗剂使用选自由以下组成的组的组成型启动子来表达：CAG启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、EF1α启动子、PGK启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5K启动子、SV40启动子、HSV的tk启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、HIV的LTR启动子、莫洛尼病毒的启动子、爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)启动子以及劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子。
35.一种遗传修饰的细胞群，其包含如权利要求1至34中任一项所述的细胞。
36.一种用于在同种异体宿主中的移植部位提供局部免疫遏制的方法，所述方法包括在同种异体宿主中的移植部位移植如权利要求1至34中任一项所述的细胞或如权利要求35所述的遗传修饰的细胞群。
37.一种用于在同种异体宿主中的移植部位提供局部免疫遏制的方法，所述方法包括：
(i)提供细胞；以及
(ii)在所述细胞中表达一组转基因，每种转基因编码为细胞质、膜结合或局部作用的基因产物，其功能是以下中的一种或多种：
a)减轻抗原呈递细胞活化和功能；
b)减轻攻击移植物的白细胞活性或溶细胞功能；
c)减轻同种异体移植物细胞的巨噬细胞溶细胞功能和吞噬作用；
d)诱导攻击移植物的白细胞中的细胞凋亡；
e)减轻局部炎性蛋白；以及
f)保护免受白细胞介导的细胞凋亡，
其中所述组转基因包括以下基因中的两种或更多种：PD-L1、HLAG或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8、或SerpinB9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述组转基因包括以下基因中的三种、四种、五种、六种、七种或全部八种：PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8、或SerpinB9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。
39.如权利要求37所述的方法，其中所述组转基因基因包括PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6，或编码充当PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6的激动剂的生物制剂的基因。
40.如权利要求37至39中任一项所述的方法，其还包括表达以下转基因中的一种或多种：TGF-β、Cd73、Cd39、Lag3、Il1r2、Ackr2、Tnfrsf22、Tnfrs23、Tnfrsf10、Dad1以及IFNγR1d39，或编码充当TGF-β、Cd73、Cd39、Lag3、Il1r2、Ackr2、Tnfrsf22、Tnfrs23、Tnfrsf10、Dad1或IFNγR1d39的激动剂的生物制剂的基因。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述TGF-β或生物制剂在移植物环境中局部作用。
42.如权利要求37至41中任一项所述的方法，其中所述细胞是干细胞、适用于基因组编辑的细胞和/或治疗性细胞类型的来源。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述细胞是胚胎干细胞、诱导型多能干细胞、诱导型多能干细胞(iPSC)、造血干细胞、间充质干细胞、内皮干细胞、上皮干细胞、脂肪干细胞或祖细胞、种系干细胞、肺干细胞或祖细胞、乳腺干细胞、嗅成体干细胞、毛囊干细胞、肠干细胞或祖细胞、多潜能干细胞、羊膜干细胞、脐带血干细胞、神经干细胞或祖细胞、成体干细胞、体干细胞、组织特异性干细胞、全能干细胞、成纤维细胞、单核细胞前体、B细胞、外分泌细胞、胰腺祖细胞、内分泌祖细胞、成肝细胞、成肌细胞、前脂肪细胞、肝细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、K562人红白血病细胞系、骨细胞、滑膜细胞、肌腱细胞、韧带细胞、半月板细胞、脂肪细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、红细胞-巨核细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、T细胞、胰岛β细胞、神经元、心肌细胞、血细胞、外分泌祖细胞、导管细胞、腺泡细胞、α细胞、β细胞、δ细胞、PP细胞、胆管细胞、白色或棕色脂肪细胞、激素分泌细胞、表皮角质形成细胞、上皮细胞、肾细胞、生殖细胞、骨骼关节滑膜细胞、骨膜细胞、软骨膜细胞、软骨细胞、内皮细胞、心包细胞、脑膜细胞、角质形成细胞前体细胞、角质形成细胞干细胞、周细胞、神经胶质细胞、室管膜细胞、从羊膜或胎盘膜分离的细胞、浆膜细胞、体细胞，或源自皮肤、心脏、脑或脊髓、肝、肺、肾、胰腺、膀胱、骨髓、脾、肠或胃的细胞。
44.一种控制同种异体宿主中的移植部位处的如权利要求1-7中任一项所述的细胞的增殖的方法，所述方法包括：
a)在细胞中遗传修饰细胞分裂基因座/基因座(CDL)，所述CDL是其一种或多种转录产物由分裂细胞表达的一个或多个内源性或外源性基因座，所述CDL的遗传修饰包括以下中的一种或多种：
i)消除连接(ALINK)系统，所述ALINK系统包含与编码所述CDL的DNA序列转录连接的编码阴性选择性标记物的DNA序列；以及
ii)CDL调控的诱导型外源性活化因子(EARC)系统，所述EARC系统包含与所述CDL可操作连接的基于诱导型活化因子的基因表达系统；
b)将所述细胞或所述细胞群移植在同种异体宿主中的移植部位处；以及
c)i)通过在不存在所述阴性选择性标记物的诱导剂的情况下维持包含所述ALINK系统的所述遗传修饰的细胞来允许包含所述ALINK系统的所述遗传修饰的细胞的增殖，和/或通过将包含所述ALINK系统的所述遗传修饰的细胞暴露于所述阴性选择性标记物的诱导剂来消除和/或抑制包含所述ALINK系统的所述细胞的增殖；和/或
ii)通过将包含所述EARC系统的所述遗传修饰的细胞暴露于所述基于诱导型活化因子的基因表达系统的诱导剂来允许包含所述EARC系统的所述遗传修饰的细胞的增殖，或通过在不存在所述基于诱导型活化因子的基因表达系统的诱导剂的情况下维持包含所述EARC系统的所述遗传修饰的细胞来预防或抑制包含所述EARC系统的所述细胞的增殖。
45.如权利要求36至44中任一项所述的方法，其中所述同种异体宿主是哺乳动物。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述同种异体宿主是小鼠。
47.如权利要求45所述的方法，其中所述同种异体宿主是人。
48.如权利要求36至47中任一项所述的方法，其中所述宿主患有可用细胞疗法治疗的变性疾病或疾患。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述疾病或疾患是失明、关节炎、局部缺血、糖尿病、多发性硬化症、脊髓损伤、中风、癌症、肺病、血液疾病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病、ALS、酶或激素缺乏症、代谢病症、自身免疫性疾病、年龄相关性黄斑变性、视网膜营养不良、感染性疾病、血友病、心肌梗塞、变性疾病或年龄相关性疾病。
50.如权利要求37至49中任一项所述的方法，其中PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6中的一种或多种以等于或大于活化的白细胞中相应内源性基因的表达水平的水平表达。
51.如权利要求50所述的方法，其中PD-L1、HLA-G或H2-M3、Cd47、Cd200、FASLG或FasL、Ccl21或Ccl21b、Mfge8以及SerpinB9或Spi6中的全部八种以等于或大于活化的白细胞中相应内源性基因的表达水平的水平表达。
52.如权利要求37至51中任一项所述的方法，其中所述PD-L1转基因编码与SEQIDNO:11或SEQIDNO:12的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
53.如权利要求37至52中任一项所述的方法，其中所述HLA-G或H2-M3转基因编码与SEQIDNO:16或SEQIDNO:15的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
54.如权利要求37至53中任一项所述的方法，其中所述Cd47转基因编码与SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
55.如权利要求37至54中任一项所述的方法，其中所述CD200转基因编码与SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
56.如权利要求37至55中任一项所述的方法，其中所述FASLG或FasL转基因编码与SEQIDNO:10或SEQIDNO:9的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
57.如权利要求37至56中任一项所述的方法，其中所述Ccl21或Ccl21b转基因编码与SEQIDNO:2或SEQIDNO:1的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
58.如权利要求37至57中任一项所述的方法，其中所述Mfge8转基因编码与SEQIDNO:13或SEQIDNO:14的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
59.如权利要求37至58中任一项所述的方法，其中所述SerpinB9或Spi6转基因编码与SEQIDNO:8或SEQIDNO:9的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
60.如权利要求40至59中任一项所述的方法，其中所述IFNγR1d39转基因编码与SEQIDNO:17的氨基酸序列具有至少85％同一性的蛋白质。
61.如权利要求37至60中任一项所述的方法，其中所述一种或多种转基因可操作地连接至组成型启动子。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述组成型启动子选自由以下组成的组：CAG启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、EF1α启动子、PGK启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5K启动子、SV40启动子、HSV的tk启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、HIV的LTR启动子、莫洛尼病毒的启动子、爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)启动子以及劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子。
63.如权利要求37至62中任一项所述的方法，其中所述细胞还包含编码治疗剂的转基因。
64.如权利要求63所述的方法，其中所述治疗剂是蛋白质或抗体。
65.如权利要求64所述的方法，其中所述抗体是抑制性抗体或激动剂抗体。
66.如权利要求63至65中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是表2中列出的剂或在所述受试者中突变的基因的野生型型式。
67.如权利要求63至66中任一项所述的方法，其中所述治疗剂使用选自由以下组成的组的诱导型表达系统来表达：四环素响应元件、光诱导型系统、放射遗传系统、香豆酸盐开关诱导型系统、蜕皮激素诱导型系统、去稳定结构域系统或配体可逆的二聚化系统。
68.如权利要求63至66中任一项所述的方法，其中所述治疗剂使用选自由以下组成的组的组成型启动子来表达：CAG启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、EF1α启动子、PGK启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5K启动子、SV40启动子、HSV的tk启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、HIV的LTR启动子、莫洛尼病毒的启动子、爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)启动子以及劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子。
69.一种组合物，其包含如权利要求1至34中任一项所述的细胞。
70.如权利要求69所述的组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。
71.一种药盒，其包含如权利要求1至34中任一项所述的细胞或如权利要求69或70所述的组合物。
72.一种治疗有需要的受试者的疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至34中任一项所述的细胞或如权利要求69或70所述的组合物。
73.如权利要求72所述的方法，其中所述疾病或疾患是失明、关节炎、局部缺血、糖尿病、多发性硬化症、脊髓损伤、中风、癌症、肺病、血液疾病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病、ALS、酶或激素缺乏症、代谢病症、自身免疫性疾病、年龄相关性黄斑变性、视网膜营养不良、感染性疾病、血友病、心肌梗塞、变性疾病、年龄相关性疾病或表2中列出的疾病或疾患。
74.如权利要求72或73所述的方法，其中在施用至所述受试者之前，使所述细胞分化成谱系限制性细胞类型。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述疾病或疾患是心肌梗塞，并且使所述细胞分化成心肌细胞。
76.如权利要求74所述的方法，其中所述疾病或疾患是失明，并且使所述细胞分化成感光细胞。
77.如权利要求74所述的方法，其中所述疾病或疾患是脊髓损伤、帕金森氏病、亨廷顿氏病或阿尔茨海默氏病，并且使所述细胞分化成神经元。
78.如权利要求74所述的方法，其中所述疾病或疾患是多发性硬化症，并且使所述细胞分化成神经胶质细胞。
79.如权利要求72至78中任一项所述的方法，其中将所述细胞局部施用至需要细胞或所述治疗剂的组织或身体部位。
80.如权利要求72至79中任一项所述的方法，其中静脉内、皮下、肌内、经皮、皮内、胃肠外、动脉内、血管内或通过灌注施用所述细胞。
81.如权利要求80所述的方法，其中通过皮下注射施用所述细胞以产生遮掩的皮下组织。
82.如权利要求72至79中任一项所述的方法，其中作为组织施用所述细胞。
83.如权利要求82所述的方法，其中所述组织与凝胶、生物相容性基质或细胞支架一起施用。
84.如权利要求72至79中任一项所述的方法，其中以25,000至5,000,000,000个细胞的量施用所述细胞。
85.如权利要求80至83中任一项所述的方法，其中以800,000,000至3,000,000,000个细胞的量施用所述细胞。
86.如权利要求72至85中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用另外的治疗剂。
87.如权利要求86所述的方法，其中在施用所述细胞之前施用所述另外的治疗剂。
88.如权利要求86所述的方法，其中在施用所述细胞之后施用所述另外的治疗剂。
89.如权利要求86所述的方法，其中与施用所述细胞同时施用所述另外的治疗剂。
90.如权利要求86至89中任一项所述的方法，其中所述另外的治疗剂是免疫遏制剂、疾病改善性抗风湿药物(DMARD)、生物响应调节剂(一种类型的DMARD)、皮质类固醇或非类固醇抗炎药物(NSAID)、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、甲氨蝶呤、羟氯喹、柳氮磺胺吡啶、来氟米特、环磷酰胺、硫唑嘌呤、托法替尼、阿达木单抗、阿巴西普、阿纳金拉、阿那白滞素、塞妥珠单抗、依那西普、戈利木单抗、英夫利昔单抗、利妥昔单抗或托珠单抗、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿巴西普、阿达木单抗、阿仑单抗、氨基水杨酸盐、抗生素、抗组胺剂、抗TNFα、硫唑嘌呤、贝利木单抗、β干扰素、钙调磷酸酶抑制剂、赛妥珠单抗、皮质类固醇、可玛林、环孢菌素A、环孢霉素、富马酸二甲酯、依那西普、芬戈莫德、富马酸酯、克帕松、戈利木单抗、羟基脲、IFNγ、IL-11、来氟米特、白三烯受体拮抗剂、长效β2激动剂、米托蒽醌、吗替麦考酚酯、那他珠单抗、奥瑞珠单抗、吡美莫司、益生菌、类视黄醇、水杨酸、短效β2激动剂、柳氮磺胺吡啶、他克莫司、特立氟胺、茶碱、托珠单抗、优特克单抗或维多珠单抗、贝伐单抗、兰尼单抗或阿柏西普)、光动力疗法、光凝固、卡比多巴-左旋多巴、多巴胺激动剂、MAO-B抑制剂、邻苯二酚-O-甲基转移酶抑制剂、抗胆碱能药、金刚烷胺、深部脑刺激、抗凝剂、抗血小板剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂、β阻滞剂、组合的α和β阻滞剂、钙通道阻滞剂、降胆固醇药物、烟酸、胆固醇吸收抑制剂、洋地黄制剂、利尿剂、血管扩张剂、双重抗血小板疗法、心脏手术、抗病毒化合物、核苷类似物逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂、抗细菌化合物、抗真菌化合物、抗寄生虫化合物、胰岛素、磺酰脲、双胍、美格列奈、噻唑烷二酮、DPP-4抑制剂、SGLT2抑制剂、α-葡糖苷酶抑制剂、胆汁酸螯合剂、阿司匹林、饮食方案、凝血因子、去氨加压素、凝块保存药物、纤维蛋白密封剂、物理疗法、辅酶、骨髓移植物、器官移植物、血液透析、血液滤过、交换输血、腹膜透析、中链三酰甘油、麦格司他、酶补充疗法、检查点抑制剂、化学治疗药物、生物药物、放射疗法、冷冻疗法、热疗、手术切除肿瘤组织或抗癌疫苗。
91.如权利要求72至90中任一项所述的方法，其中所述方法还包括控制所述细胞的增殖。
92.如权利要求91所述的方法，其中所...
【专利技术属性】
技术研发人员：A纳吉，J哈丁，K纳吉，
申请(专利权)人：西奈卫生系统公司，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA
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