抗PD-L1抗体及其用途制造技术

公开了完全人抗PD‑L1抗体及其相应的应用。完全人抗体能够与人PD‑L1特异性结合。通过采用基于酵母展示文库的筛选技术以及通过亲和力成熟以进一步提高其对PD‑L1的亲和力来获得抗体。公开的完全人抗PD‑L1抗体显示出良好的特异性、亲和力和稳定性。它们能够通过与活化的T细胞结合而增强T细胞活性，同时显著抑制肿瘤生长。公开的完全人抗PD‑L1抗体可用于诊断和治疗PD‑L1相关癌症和其他相关疾病。

Anti PD-L1 antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-L1抗体及其用途领域本公开涉及生物医学领域，并且涉及完全人抗PD-L1抗体及其药物用途。背景当T细胞对外源抗原作出反应时，它们需要抗原呈递细胞(APC)来向静息T淋巴细胞提供两个信号：第一个信号在T细胞借助TCR识别与MHC分子结合的抗原肽时产生，之后抗原识别信号通过TCR/CD3复合物传递；第二信号由一系列共刺激分子提供；这样，就可以正常激活T细胞，进而产生正常的免疫反应。根据第二信号产生的作用，这些共刺激分子可被分类为正共刺激分子或负共刺激分子，正负共刺激信号的调节以及所述信号之间的相对平衡在身体的整个免疫反应过程中起着重要的调节作用。PD-1是CD28受体家族的成员，该家族还包括CTLA4、CD28、ICOS和BTLA。当添加单克隆抗体并观察到其增加T细胞增殖时，发现了该家族的最初成员CD28和ICOS(Hutloff等(1999)Nature397:263-266；Hansen等(1980)Immunogenics10:247-260)。PD-1的配体包括PD-L1和PD-L2，研究结果已表明，该受体与配体的结合下调T细胞活化和相关细胞因子的分泌(Freeman等(2000)JExpMed192:1027-34；Latchman等(2001)NatImmunol2:261-8；Carter等(2002)EurJImmunol32:634-43；Ohigashi等(2005)ClinCancerRes11:2947-53))。PD-L1(B7-H1)是一种细胞表面糖蛋白，其属于B7家族，包括IgV样和IgC样区域、跨膜区域和细胞质尾部区域。相应的基因最早于1999年发现并被克隆(DongH等(1999)NatMed5:1365-1369)，该糖蛋白本身被确定为与T细胞受体PD-1相互作用并在免疫反应的负面调节中起重要作用。除了作用于T细胞上表达的PD-1外，PD-L1当在T细胞上表达时，还可与APC上的CD80相互作用以传递负信号，从而起着T细胞抑制剂的作用。除了在巨噬细胞谱系细胞上表达以外，PD-L1在正常人组织中也以低水平表达，但该糖蛋白在某些肿瘤细胞系(包括例如肺癌、卵巢癌、结肠癌和黑色素瘤)中表现出相对高的表达(Iwai等(2002)PNAS99:12293-7；Ohigashi等(2005)ClinCancerRes11:2947-53)。研究结果表明，PD-L1在肿瘤细胞中的表达增加会增加T细胞凋亡，从而在使肿瘤细胞逃避免疫反应中起重要作用。研究人员已发现，PD-L1基因转染的P815肿瘤细胞系可显示出对特定CTL裂解的体外抗性，并且当接种到小鼠体内时，所述细胞具有更高的致瘤性和侵袭性。这些生物特性可以通过阻断PD-L1来逆转。在PD-1敲除小鼠中，PD-L1/PD-1途径被阻断，并且接种的肿瘤细胞不能形成肿瘤(DongH等(2002)NatMed8:793-800)。仍然需要能够以高亲和力结合PD-L1并因此阻断PD-1与PD-L1结合的抗PD-L1抗体。概述在本专利技术的某些方面，结合筛选和亲和力成熟的酵母展示系统被用于获得显示出良好的特异性和相对高的亲和力和稳定性的完全人抗PD-L1抗体，从而完成本专利技术。本专利技术的第一方面涉及抗PD-L1抗体或其抗原结合部分，其包括选自以下之一的一组CDR区：(1)分别对应于SEQIDNO:1-3的重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及分别对应于SEQIDNO:4-6的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列或者分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％或95％的同一性的序列；(2)分别对应于SEQIDNO:7-9的重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及分别对应于SEQIDNO:10-12的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列或者分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％或95％的同一性的序列；(3)分别对应于SEQIDNO:13-15的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别对应于SEQIDNO:16-18的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列或者分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％或95％的同一性的序列；(4)分别对应于SEQIDNO:1、2和19的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别对应于SEQIDNO:4-6的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列或者分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％或95％的同一性的序列；(5)分别对应于SEQIDNO:7、20和9的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别对应于SEQIDNO:10-12的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列或者分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％或95％的同一性的序列；(6)分别对应于SEQIDNO:13-15的重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及分别对应于SEQIDNO:21、17和18的轻链CDR1，CDR2和CDR3序列的序列或者分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％或95％的同一性的序列。由本专利技术的第一方面构成的抗PD-L1抗体或相应的抗原结合部分中的任一种也包括选自以下之一的一组重链可变区框架区：1)分别对应于SEQIDNO:22-25的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列；2)分别对应于SEQIDNO:30-33的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列；3)分别对应于SEQIDNO:38-41的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列；4)分别对应于SEQIDNO:30-33的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列。由本专利技术的第一方面构成的抗PD-L1抗体的任一种或相应的抗原结合部分也包括选自以下之一的一组轻链可变区框架区：1)分别对应于SEQIDNO:26-29的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列；2)分别对应于SEQIDNO:30-33的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列；3)分别对应于SEQIDNO:38-41的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列；4)分别对应于SEQIDNO:30-33的FR1、FR2、FR3和FR4序列，或分别与前述序列之一具有大于70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗PD-L1抗体或其抗原结合部分，其包含选自以下的多肽组：/n(1)包含分别对应于SEQ ID NO:1、2和3的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQ ID NO:4、5和6的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；/n(2)包含分别对应于SEQ ID NO:7、8和9的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQ ID NO:10、11和12的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；/n(3)包含分别对应于SEQ ID NO:13、14和15的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQ ID NO:16、17和18的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；/n(4)包含分别对应于SEQ ID NO:1、2和19的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQ ID NO:4、5和6的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；/n(5)包含分别对应于SEQ ID NO:7、20和9的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQ ID NO:10、11和12的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；以及/n(6)包含分别对应于SEQ ID NO:13、14和15的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQ ID NO:21、17和18的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170418 US PCT/US2017/0282061.一种抗PD-L1抗体或其抗原结合部分，其包含选自以下的多肽组：
(1)包含分别对应于SEQIDNO:1、2和3的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQIDNO:4、5和6的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；
(2)包含分别对应于SEQIDNO:7、8和9的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQIDNO:10、11和12的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；
(3)包含分别对应于SEQIDNO:13、14和15的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQIDNO:16、17和18的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；
(4)包含分别对应于SEQIDNO:1、2和19的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQIDNO:4、5和6的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；
(5)包含分别对应于SEQIDNO:7、20和9的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQIDNO:10、11和12的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链；以及
(6)包含分别对应于SEQIDNO:13、14和15的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链，以及包含分别对应于SEQIDNO:21、17和18的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链。


2.如权利要求1中所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区具有选自以下的序列：
SEQIDNO:47、49、51、53或54，或分别与所述序列之一具有70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列。


3.如权利要求1中所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其包含轻链可变区，所述轻链可变区具有选自以下序列的序列：
SEQIDNO:48、50、52、55或56，或分别与所述序列之一具有70％、80％、85％、90％、95％或99％的同一性的序列。


4.如权利要求1-3中任一项所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其对应于完整抗体、双特异性抗体、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv。


5.如权利要求4中所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其为还包含在重链可变区与轻链可变区之间的连接肽的scFv。


6.如权利要求5中所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其中所述连接肽包含SEQIDNO:67的序列。


7.如权利要求1-4中任一项所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其中所述重链恒定区选自IgG、IgM、IgE、IgD和IgA。


8.如权利要求7中所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其中所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。


9.如权利要求6-8中任一项所述的抗PD-L1抗体或其相应的抗原结合部分，其中所述轻链恒定区是κ区或λ区。


10.一种核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，所述抗体重链可变区包含选自以下的一组氨基酸序列：
(i)SEQIDNO:1-3；
(ii)SEQIDNO:7-9；
(iii)SEQIDNO:13-15；
(iv)SEQIDNO:1、2和19；和
(v)SEQIDNO:7、20和9。


11.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·拉夫罗夫斯基，许婷，S·巴巴索夫，A·雷皮克，M·萨姆索诺夫，V·伊格纳提夫，S·阿库阿泽，
申请(专利权)人：阿法姆海外股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US