三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用，包括：本发明专利技术提供的三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用；治疗乳腺癌的药物为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊中任一；包含三氯苯达唑的组合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用；待治疗的乳腺癌的癌细胞为MCF‑7或MDA‑MB‑231。本发明专利技术的有益效果是：在体外和体内，三氯苯达唑均能诱导细胞凋亡性细胞焦亡，其通过活化的caspase‑3切割GSDME产生GSDME‑NT而发挥作用并呈现形成空泡特点。该发现表明，三氯苯达唑通过诱导癌细胞发生凋亡性细胞焦亡，三氯苯达唑通过活化caspase‑3，至少部分地通过增强ROS/JNK/bax线粒体凋亡通路，诱导GSDME依赖的细胞焦亡，凸显其具有治疗癌症的作用。

Application of trichlorobenzazole in the preparation of drugs for the treatment of breast cancer

【技术实现步骤摘要】
三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用
本专利技术涉及治疗乳腺癌药物的制备领域，尤其是涉及三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
技术介绍
乳腺癌仍然是一个主要的健康问题，并且是威胁女性健康的主要癌症。乳腺癌最常见的原因是遗传性，环境和生活方式也增加了乳腺癌的发病率，如辐射、竞争和工作压力、饮酒和肥胖。尽管通过使用各种疗法，包括化疗、内分泌治疗和放疗，在乳腺癌的治疗方面取得了很大进展；但乳腺癌患者化疗的总体反应率不理想，同时发生不良反应。实际上，主要由于对细胞凋亡的抗性的发展，这些疗法最终会变得难以治愈。因此，需要发现用于治疗乳腺癌具有较少副作用的可扩展治疗和更有影响的药物，包括治疗乳腺癌的非凋亡程序性细胞死亡(PCD)。程序性细胞死亡途径在所有多细胞生物的生长、生存、稳态和先天免疫中具有重要的生理作用。根据表型差异，PCD分两种重要形式：包括细胞凋亡和程序性坏死。程序性坏死也称为非凋亡性PCD，已报道两种形式的PCD：一种是细胞坏死，另一种是细胞焦亡。通过激活受体相互作用蛋白激酶-3(RIPK3)触发坏死性凋亡，其使假激酶MLKL磷酸化，然后导致细胞裂解。然而，细胞焦亡的特征在于质膜上的孔隙形成，随后导致细胞膨胀和质膜中的孔隙，这最初被认为是脊椎动物先天免疫的一般炎症反应。然而，最近的研究表明，化疗药物活化的caspase-3还可以诱导癌症和正常细胞的二次坏死/细胞焦亡，这些细胞表达Gasdermin家族成员GasderminE(GSDME)。当引起细胞凋亡，活性的caspase-3可切割GSDME产生GSDME的N-末端片段(GSDME-NT)。然后GSDME-NT将转移并穿透质膜，从而破坏细胞的渗透屏障，导致二次坏死/细胞焦亡。细胞焦亡是一种程序性死亡，其中GasderminE(GSDME)在癌细胞中起重要作用，其可被凋亡相关的caspase-3诱导活化。三氯苯达唑是一种新型的咪唑抗吸虫剂，已成为治疗家畜肝吸虫感染的首选药物并持续了20多年。并且最近已被成功用于治疗人类的片吸虫病。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，提供三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供的三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。作为优选：所述治疗乳腺癌的药物为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊中任一。作为优选：主要包含三氯苯达唑的组合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。作为优选：待治疗的乳腺癌的癌细胞为MCF-7或MDA-MB-231。本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术的实验结果表明：三氯苯达唑诱导乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)裂解性死亡，死亡细胞肿胀，有明显的大气泡。westernblot结果显示，三氯苯达唑治疗可促进多种凋亡标志物的活化，促进GSDME-N末端片段的生成，说明活化的caspase-3可诱导二次坏死/细胞焦亡。与此一致的是，通过caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)处理，三氯苯达唑诱导的GSDME-N末端片段生成和热解被抑制或减少。此外，三氯苯达唑还诱导活性氧(ROS)升高和JNK磷酸化。然而，ROS清除剂(NAC)降低了三氯苯达唑诱导的ROS升高、JNK磷酸化和裂解性细胞死亡，提示三氯苯达唑诱导的GSDME依赖的细胞焦亡与ROS/JNK/bax线粒体凋亡通路相关。此外还发现，在BALB/C裸鼠异种移植瘤模型中，给予三氯苯达唑治疗显著促进了caspase-3活化、parp活化和GSDME-N末端片段的形成，抑制了异种移植瘤的生长。(2)本专利技术的实验结果表明：在体外和体内，三氯苯达唑均能诱导细胞凋亡性细胞焦亡，其通过活化的caspase-3切割GSDME产生GSDME-NT而发挥作用并呈现形成空泡特点。该发现表明，三氯苯达唑通过诱导癌细胞发生凋亡性细胞焦亡，三氯苯达唑通过活化caspase-3，至少部分地通过增强ROS/JNK/bax线粒体凋亡通路，诱导GSDME依赖的细胞焦亡，凸显其具有治疗癌症的作用。附图说明图1为三氯苯达唑诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞裂解性死亡的效果图；图2为necrostatine-1预处理1小时，TRI处理，然后拍照观察的荧光图；图3为三氯苯达唑影响膜电位和线粒体活性的效果图；图4为三氯苯达唑处理的MCF-7细胞中凋亡和裂解性细胞死亡标记的蛋白质印迹分析图；图5为三氯苯达唑处理的MDA-MB-231细胞中凋亡和裂解性细胞死亡标记的蛋白质印迹分析图；图6为阻断caspase-3活性可抑制三氯苯达唑诱导的MCF-7细胞溶解性细胞死亡效果图；图7为阻断caspase-3活性可抑制三氯苯达唑诱导的MDA-MB-231细胞溶解性细胞死亡效果图；图8为三氯苯达唑通过ROS/JNK/Bax-线粒体途径诱导细胞凋亡和细胞溶解死亡效果图；图9为三氯苯达唑在异种移植模型中的抗肿瘤作用效果图；图10为WesternBlot结果图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步描述。下述实施例的说明只是用于帮助理解本专利技术。应当指出，对于本
的普通人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以对本专利技术进行若干修饰，这些改进和修饰也落入本专利技术权利要求的保护范围内。实施例1：使用乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231作为细胞模型，验证三氯苯达唑诱导乳腺癌细胞发生细胞凋亡和裂解性细胞死亡：为确定三氯苯达唑对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的作用，将乳腺癌细胞MCF-7或MDA-MB-231细胞用指定浓度的三苯达唑(TRI)处理24小时。使用CCK-8检测方法来测定药物在这些细胞中的细胞毒性。如图1所示：图1中的A、C为：将MCF-7和MDA-MB-231细胞用AnnexinV-FITC和PI染色，然后通过流式细胞术分析。在流式细胞仪的代表性点状图的每个象限中显示的细胞的比例。图1中的B、D为对A、C中凋亡细胞与坏死/化脓细胞的比率的定量分析，其中纵坐标Annexin-V-/PI-代表活细胞，Annexin-V+/PI-代表凋亡细胞，Annexin-V+/PI+表示坏死或凋亡细胞。数据显示为平均值SD(n＝3)。图1中的E为用含有2μg/ml碘化丙啶的PI溶液(PI：红色，死细胞)加5μg/mlHoechst33342(蓝色，将所有细胞染色)的PI溶液染色10分钟，然后通过Leica共聚焦观察显微镜(63倍)，黑色箭头表示溶胞(坏死或焦亡)。比例尺为20μm。图1中的F和G为：在5个随机选择的区域(每个区域包含约40个细胞)中的PI阳性细胞进行了定量。数据显示为平均值SD(n＝5)。通过单向方差分析与Tukey的多重比较检验进行统计分析。图中*P<0.01；***P<0.001，ns代表的是无差异。数据显示，三氯苯达唑(160μM)在治疗16小时后可显着抑制乳腺癌细胞的活力。为了进一步探讨三氯苯达唑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.三氯苯达唑在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述治疗乳腺癌的药物为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊中任一。


3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳毅，颜亮，吴刚，
申请(专利权)人：杭州彗搏科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33