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用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒、检测方法及试剂盒等技术

技术编号:23431184 阅读:146 留言:0更新日期:2020-02-25 12:52
本发明专利技术提供一种能有效用于抗原特异性T细胞含量检测的检测颗粒、其相应的制备方法、包括其的试剂盒以及利用其进行抗原特异性T细胞含量检测的检测方法,其中的检测颗粒的特征在于:在基于待测样品中的被激活的抗原特异性T细胞所分泌的细胞分泌物、被激活的抗原特异性T细胞的增殖状态或被激活的抗原特异性T细胞的细胞表面标志物中的任意一种或多种而进行该抗原特异性T细胞的含量的检测中用于激活抗原特异性T细胞,其在处理待测样品时能被待测样品中的抗原提呈细胞吞噬以释放抗原或基于遗传物质生成抗原以让抗原提呈细胞将释放或生成的抗原的抗原表位提呈到该抗原提呈细胞的表面以让相应的抗原特异性T细胞识别并激活抗原特异性T细胞。

Nanoparticles, methods and kits for antigen-specific T cell assay

【技术实现步骤摘要】
用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒、检测方法及试剂盒等
本专利技术属于免疫检测领域,具体涉及一种能有效用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒、其相应的制备方法、包括其的试剂盒以及利用其进行抗原特异性T细胞含量检测的检测方法。
技术介绍
近些年来免疫技术的发展极其迅速,尤其是癌症的免疫治疗领域获得了突破性进展。随着对各类疾病认识的不断提高,人们发现免疫细胞在各类疾病发生和治疗中扮演着越来越重要的角色。免疫细胞包括B细胞和T细胞等。T细胞在自身免疫反应和适应性免疫反应过程中都发挥了巨大的作用。抗原特异性T细胞是适应性免疫反应的主要组成部分之一。抗原特异性T细胞在某些疾病比如癌症和自身免疫性疾病的发生和发展过程中扮演着重要的角色。因而如何能够有效地检测抗原特异性T细胞尤其是外周血中的抗原特异性T细胞就显得尤为重要,但是由于某些疾病如1型糖尿病的患者外周血中某些抗原特异性T细胞数量的稀少,目前尚无非常有效的技术方法用于检测一些疾病相关的抗原特异性T细胞的含量。
技术实现思路
本专利技术提供一种能有效用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒、其相应的制备方法、包括其的试剂盒以及利用其进行抗原特异性T细胞含量检测的检测方法。为了实现上述目的,本专利技术采用了如下技术方案:本专利技术的一个目的是提供一种用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒,其特征在于:在基于待测样品中的被激活的抗原特异性T细胞所分泌的细胞分泌物、被激活的抗原特异性T细胞的增殖状态或被激活的抗原特异性T细胞的细胞表面标志物中的任意一种或多种而进行该抗原特异性T细胞的含量的检测中用于激活抗原特异性T细胞,检测纳米颗粒包载有与疾病相关的抗原或包载有与疾病相关的抗原合成需要的遗传物质,其中,检测纳米颗粒的粒径大小为纳米级,检测纳米颗粒在处理待测样品时能被待测样品中的抗原提呈细胞吞噬以释放抗原或基于遗传物质生成抗原以让抗原提呈细胞将释放或生成的抗原的抗原表位提呈到该抗原提呈细胞的表面以让相应的抗原特异性T细胞识别并激活抗原特异性T细胞,抗原特异性T细胞为与疾病相关的抗原特异性T细胞。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒的粒径大小为10-2000nm。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒的粒径大小为30-1000nm。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒的粒径大小为100-500nm。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,抗原包括与癌症疾病相关的抗原以及与自身免疫性疾病相关的抗原中的一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,自身免疫性疾病可为1型糖尿病。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒包载有与疾病相关的抗原,抗原为细胞裂解物、蛋白质、质粒、DNA、RNA、多肽、组织裂解物、外泌体裂解物、细胞分泌颗粒裂解物、糖类以及脂类中的任意一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒含有与疾病相关的抗原合成需要的遗传物质,遗传物质来于细胞裂解物、质粒、DNA、RNA、组织裂解物、外泌体裂解物、细胞分泌颗粒裂解物中的任意一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒采用包括医用高分子材料、制备脂质体所需的材料、制备纳米粒所需的金属材料以及制备纳米粒所需的非金属材料中的任意一种或任意几种制备而成。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒为纳米粒、脂质体、纳米乳、外泌体、外泌体类似物、病毒、细胞分泌颗粒及细胞分泌颗粒类似物中的任意一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,抗原分布于检测纳米颗粒的内部以及检测纳米颗粒的表面这两个位置中的任意一个位置或两个位置。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,待测样品为血液、外周血单核细胞、病灶部位组织以及病灶部位细胞中的任意一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,细胞分泌物包括干扰素-γ、白介素1、白介素2、转化生长因子-β、肿瘤坏死因子-α、白介素6、白介素7、白介素15、白介素21、IP-10、白介素17、穿孔素以及颗粒酶和白介素10中的一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,检测纳米颗粒在处理待测样品时,加入白介素内毒素、内毒素、细胞因子内毒素、化学因子内毒素、趋化因子、二甲双胍、黄连素、青蒿素以及青蒿素类似物中的任意一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,采用免疫学测定法、生物活性测定法以及分子生物学检测方法中的任意一种或多种细胞分泌物检测方法检测细胞分泌物。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,细胞分泌物检测方法为酶联免疫斑点法、酶联免疫吸附法、胞内染色的流式细胞仪检测、CytometricBeadArray、多聚体技术、多细胞因子检测法、高效液相法以及液质联用中的任意一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,基于的细胞分泌物的种类为一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,抗原特异性T细胞激活后的增殖状态的检测采用基于外源标记的减少检测方法、基于分子标记的表达检测方法、基于代谢标记的增加检测方法、基于细胞群体生物量的变化检测方法以及基于细胞数量的变化检测方法中的任意一项或多项进行检测。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,基于外源标记的减少检测方法为蛋白质结合染料CFDA-SE、CellTrace以及亲脂性染料PKH67和PKH26标记后采用流式细胞仪检测。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,基于分子标记的表达检测方法中的基于的分子标记为Ki-67和PCNA。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,基于代谢标记的增加检测方法中的基于的代谢标记为氧化还原代谢标记和基于DNA代谢标记。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,基于细胞群体生物量的变化检测方法中,基于的细胞群体生物量包括DNA含量和蛋白质含量中的一种或多种。本专利技术提供的检测纳米颗粒,还具有这样的特征,其中,抗原特异性T细胞激活的细胞表面标志物为CD137、CD69、CD38、CD44、CD62L或CD25中的一种或多种。本专利技术的另一个目的是提供一种用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒的制备方法,其特征在于,检测纳米颗粒为纳米粒,制备过程包括以下步骤:步骤1,将第一预定体积的含有第一预定浓度的抗原或抗原合成需要的遗传物质加入第二预定体积的含有第二预定浓度医用高分子材料的有机相中;步骤2,将步骤1得到的抗混合物进行大于3秒的超声处理;步骤3,将步骤2处理后得到的混合物加入第三预定体积的第三预定浓度的乳化剂水溶液中并进行大于5秒的超声处理;步骤4,将步骤3处理后得到的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒,其特征在于:/n在基于待测样品中的被激活的抗原特异性T细胞所分泌的细胞分泌物、被激活的抗原特异性T细胞的增殖状态或被激活的抗原特异性T细胞的细胞表面标志物中的任意一种或多种而进行该抗原特异性T细胞的含量的检测中用于激活所述抗原特异性T细胞,/n所述检测纳米颗粒包载有与疾病相关的抗原或包载有与疾病相关的抗原合成需要的遗传物质,/n其中,所述检测纳米颗粒的粒径大小为纳米级,所述检测纳米颗粒在处理所述待测样品时能被所述待测样品中的抗原提呈细胞吞噬以释放所述抗原或基于所述遗传物质生成所述抗原以让所述抗原提呈细胞将释放或生成的所述抗原的抗原表位提呈到该抗原提呈细胞的表面以让所述抗原特异性T细胞识别并激活所述抗原特异性T细胞,/n所述抗原特异性T细胞为与所述疾病相关的抗原特异性T细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于抗原特异性T细胞含量检测的检测纳米颗粒,其特征在于:
在基于待测样品中的被激活的抗原特异性T细胞所分泌的细胞分泌物、被激活的抗原特异性T细胞的增殖状态或被激活的抗原特异性T细胞的细胞表面标志物中的任意一种或多种而进行该抗原特异性T细胞的含量的检测中用于激活所述抗原特异性T细胞,
所述检测纳米颗粒包载有与疾病相关的抗原或包载有与疾病相关的抗原合成需要的遗传物质,
其中,所述检测纳米颗粒的粒径大小为纳米级,所述检测纳米颗粒在处理所述待测样品时能被所述待测样品中的抗原提呈细胞吞噬以释放所述抗原或基于所述遗传物质生成所述抗原以让所述抗原提呈细胞将释放或生成的所述抗原的抗原表位提呈到该抗原提呈细胞的表面以让所述抗原特异性T细胞识别并激活所述抗原特异性T细胞,
所述抗原特异性T细胞为与所述疾病相关的抗原特异性T细胞。


2.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒的粒径大小为10-2000nm。


3.根据权利要求2所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒的粒径大小为30-1000nm。


4.根据权利要求2所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒的粒径大小为100-500nm。


5.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述抗原包括与癌症疾病相关的抗原以及与自身免疫性疾病相关的抗原中的一种或多种。


6.根据权利要求5所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述自身免疫性疾病为1型糖尿病。


7.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒包载有与疾病相关的抗原,
所述抗原为细胞裂解物、蛋白质、质粒、DNA、RNA、多肽、组织裂解物、外泌体裂解物、细胞分泌颗粒裂解物、糖类以及脂类中的任意一种或多种。


8.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒含有与疾病相关的抗原合成需要的遗传物质,
所述遗传物质来于细胞裂解物、质粒、DNA、RNA、组织裂解物、外泌体裂解物、细胞分泌颗粒裂解物中的任意一种或多种。


9.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒采用包括医用高分子材料、制备脂质体所需的材料、制备纳米粒所需的金属材料以及制备纳米粒所需的非金属材料中的任意一种或任意几种制备而成。


10.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒为纳米粒、脂质体、纳米乳、外泌体、外泌体类似物、病毒、细胞分泌颗粒及细胞分泌颗粒类似物中的任意一种或多种。


11.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述抗原分布于所述检测纳米颗粒的内部以及所述检测纳米颗粒的表面这两个位置中的任意一个位置或两个位置。


12.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述待测样品为血液、外周血单核细胞、病灶部位组织以及病灶部位细胞中的任意一种或多种。


13.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述细胞分泌物包括干扰素-γ、白介素1、白介素2、转化生长因子-β、肿瘤坏死因子-α、白介素6、白介素7、白介素15、白介素21、IP-10、白介素17、穿孔素以及颗粒酶和白介素10中的一种或多种。


14.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述检测纳米颗粒在处理所述待测样品时,加入白介素、内毒素、细胞因子、化学因子、趋化因子、二甲双胍、黄连素、青蒿素以及青蒿素类似物中的任意一种或多种。


15.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,采用免疫学测定法、生物活性测定法以及分子生物学检测方法中的任意一种或多种细胞分泌物检测方法检测所述细胞分泌物。


16.根据权利要求15所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述细胞分泌物检测方法为酶联免疫斑点法、酶联免疫吸附法、胞内染色的流式细胞仪检测、CytometricBeadArray、多聚体技术、多细胞因子检测法、高效液相法以及液质联用中的任意一种或多种。


17.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,基于的所述细胞分泌物的种类为一种或多种。


18.根据权利要求1所述的检测纳米颗粒,其特征在于:
其中,所述抗原特异性T细胞被激活后的增殖状态的检测采用基于外源标记的减少检测方法、基于分子标记的表达检测方法、基于代谢标记的增加检测方法、基于细胞群体生物量的变化检测方法以及基于细胞数量的变化检测方法中的任意一项或多项进行检测。


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【专利技术属性】
技术研发人员:刘密王镕
申请(专利权)人:王镕刘密
类型:发明
国别省市:上海;31

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