脱水亚硝基尼索地平在制备防治脓毒症的药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药领域，涉及脱水亚硝基尼索地平(dehydronitrosonisoldipine,NTS)在制备防治脓毒症的药物中的应用，其中所述的脓毒症既包括内毒素血症，也包括多细菌感染性的脓毒症。具体机制涉及NTS对细胞焦亡(pyroptosis)的抑制。该应用中所述的药物为腹腔注射液，注射液的剂量范围是14.8～44.4mg/kg体重。在脓毒症小鼠模型中，该药物能抑制血浆炎症因子的表达、延长小鼠生存时间、提高小鼠生存率。

Application of anhydrous nitroso nisoldipine in the preparation of drugs for the prevention and treatment of sepsis

【技术实现步骤摘要】
脱水亚硝基尼索地平在制备防治脓毒症的药物中的应用
本专利技术属于医药领域，涉及脱水亚硝基尼索地平(dehydronitrosonisoldipine,NTS)对脓毒症的防治作用；具体机制涉及NTS通过抑制细胞焦亡(pyroptosis)改善机体炎症状态。
技术介绍
脓毒症(sepsis)是外科感染的严重并发症，是重症监护病房中致死率最高的病种；平均每四个脓毒症患者中，就会出现一例死亡；全球每年大约有3150万例脓毒症发生，有530万人因脓毒症而丧生。脓毒症的病理过程极为复杂，直到近三十年，人们才对它有大致了解。脓毒症的病理过程可分为两个阶段，早期的炎症风暴阶段和晚期的免疫抑制阶段。早期的炎症风暴始于固有免疫系统对自体受损组织和病原体的过度反应，这种反应超出免疫系统的控制范围，并在级联放大的效应下形成炎症风暴。晚期的免疫抑制体现为免疫系统的瘫痪，对病原体刺激的不敏感；这与早期炎症风暴导致的免疫耗竭和细胞死亡关系密切。细胞焦亡是近年来新发现的一种细胞程序性死亡方式，它主要发生于专职的吞噬细胞，如巨噬细胞、单核细胞、DC、中性粒细胞等。与细胞凋亡(apoptosis)不同，细胞在发生焦亡时，整个细胞膜会涨破，并释放出大量的促炎因子；在所有坏死性细胞死亡中，细胞焦亡的诱发最迅速、激活的炎症反应也最猛烈。目前已有大量研究表明细胞焦亡在脓毒症的炎症风暴阶段起重要推动作用，敲除焦亡信号通路的相关基因，能改善脓毒症小鼠模型的预后(KayagakiN,StoweIB,LeeBL,etal.Caspase-11cleavesgasderminDfornon-canonicalinflammasomesignalling[J].Nature,2015,526(7575):666-71；HagarJA,PowellDA,AachouiY,etal.CytoplasmicLPSactivatescaspase-11:implicationsinTLR4-independentendotoxicshock[J].Science,2013,341(6151):1250-3)。NTS是二氢吡啶类钙拮抗剂尼索地平(nisoldipine)光解产物的主要成分。曾有文献对NTS的药物毒性进行过报道(赵敬琴，任雷鸣。尼索地平光解产物的制备及药理作用[J]。河北医科大学学报，1990，(1):8-9)。该研究显示，NTS的毒副作用比尼索地平本身要弱。在小鼠灌胃实验中，尼索地平以300mg/kg体重的剂量，导致10只小鼠全部死亡；而NTS在300～2000mg/kg的剂量下未导致一只小鼠死亡(共10只小鼠)。在腹腔注射实验中，尼索地平以100mg/kg的剂量导致7/10的小鼠死亡，而NTS在同样的剂量下(100mg/kg)仅导致1/10的小鼠死亡。这项研究显示NTS的毒副作用较小，但关尼索地平和NTS在抑制细胞焦亡、防治脓毒症方面的作用目前均尚无报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供NTS在制备药物中的应用。本专利技术公开了脱水亚硝基尼索地平在制备防治脓毒症的药物中的应用。本专利技术所述脓毒症包括内毒素血症，也包括多细菌感染性的脓毒症。本专利技术提供了NTS在制备细胞焦亡抑制剂中的应用。本专利技术提供了NTS在制备脓毒症抗炎药物中的应用。本专利技术提供了NTS在作为腹腔注射液防治脓毒症时的剂量范围，即14.8～44.4mg/kg体重。本专利技术提供了NTS在制备防治脓毒症药物中的应用，具体机制涉及NTS对细胞焦亡(pyroptosis)的抑制。在脓毒症小鼠模型中，该药物能抑制血浆炎症因子的表达、延长小鼠生存时间、提高小鼠生存率。附图说明图1是NTS抑制内毒素诱导的人单核细胞系THP-1细胞焦亡。图2是NTS抑制尼日利亚毒素诱导的小鼠巨噬细胞系iBMDM细胞焦亡。图3是NTS改善LPS脓毒症小鼠的生存率。图4是NTS改善LPS脓毒症小鼠的IL-1β。图5是NTS改善LPS脓毒症小鼠的IL-6。图6是NTS改善LPS脓毒症小鼠的TNF-α。图7是NTS延长多细菌感染性脓毒症小鼠的生存时间。图8是NTS改善多细菌感染性脓毒症小鼠的IL-1β。图9是NTS不影响多细菌感染性脓毒症小鼠的IL-6。图10是NTS不影响多细菌感染性脓毒症小鼠的TNF-α。具体实施方式实施例一：NTS抑制内毒素诱导的人单核细胞系THP-1细胞焦亡。实验材料：NTS(MedChemExpress,Cat.No.HY-Z0816)使用二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)溶解。内毒素EscherichiacoliO111:B4LPS(Sigma,Cat.No.LPS25)使用无菌水溶解。THP-1细胞系由中国科学院上海细胞生物学研究所提供，使用RMPI1640培养液培养，培养液中添加有10％的胎牛血清和1％的青霉素/链霉素。Neon电转仪购买自Invitrogen公司。光学显微镜的型号为OlympusIX71。实验方法：我们将50μMNTS或等体积的DMSO加入THP-1的细胞培养液中摇匀；30分钟后，根据文献中描述的方法(ZhaoY,ShiJ,ShaoF.InflammatoryCaspases:ActivationandCleavageofGasdermin-DInVitroandDuringPyroptosis[J].MethodsMolBiol,2018,1714:131-148)，使用电转仪将50ng/mL的LPS电转入THP-1细胞内，以诱导细胞焦亡。2小时后，我们使用光学显微镜观察并拍摄细胞形态。实验结果：见附图1，图A示阴性对照(比例尺为20μm)，图B示THP-1细胞系在经受LPS电转处理后，出现大量的细胞焦亡形态(白色箭头示)；图C示同样经受LPS电转、但在50μMNTS保护下的THP-1细胞系未出现细胞焦亡形态。上述结果说明NTS可以抑制LPS诱导的THP-1细胞焦亡。实施例二：NTS抑制尼日利亚毒素诱导的小鼠巨噬细胞系iBMDM细胞焦亡。实验材料：NTS(MedChemExpress,Cat.No.HY-Z0816)、尼日利亚毒素(nigericin)(Sigma,Cat.No.N7143)使用DMSO溶解。永生化的鼠源巨噬细胞系(immortalizedbonemarrowderivedmacrophage,iBMDM)由北京生命科学研究所邵峰院士慷慨提供，使用RMPI1640培养液培养，培养液中添加有10％的胎牛血清和1％的青霉素/链霉素。光学显微镜的型号为OlympusIX71。实验方法：我们将50μMNTS或等体积的DMSO加入iBMDM的细胞培养液中摇匀；30分钟后，向培养液中加入10μM尼日利亚毒素，以诱导细胞焦亡。1小时后，我们使用光学显微镜观察并拍摄细胞形态。实验结果：见附图2，图A示阴性对照(比例尺为20本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.脱水亚硝基尼索地平在制备防治脓毒症的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.脱水亚硝基尼索地平在制备防治脓毒症的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脓毒症内毒素血症或多细菌感染性的脓...

【专利技术属性】
技术研发人员：高翔，林兆宇，王鼎玉，陈芊月，郑嘉烁，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32