表面包含免疫调节剂的细胞及其用途制造技术

表面包含免疫调节剂的细胞及其用途，细胞的表面包含能够特异性识别和/或结合靶标的免疫调节剂，细胞中编码免疫调节剂的核酸与其转录激活控制域可操作地连接，转录激活控制域为条件性转录激活控制域，且细胞表面的免疫调节剂对靶标的特异性识别和/或结合使得转录激活控制域令免疫调节剂在细胞中的表达上调。

Cells containing immunomodulators on the surface and their uses

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表面包含免疫调节剂的细胞及其用途
本申请涉及生物医药领域，具体涉及一种表面包含免疫调节剂的细胞及其用途。
技术介绍
目前，新兴的具有靶向性过继细胞治疗技术嵌合抗原受体T淋巴细胞(CAR-T)在多种恶性肿瘤治疗中均发挥着重要作用。通过将单链抗体、特异性受体等针对肿瘤相关抗原(TAA)特异性识别肽段与T细胞激活信号如CD3ζ偶联得到融合蛋白，并通过慢病毒等方式将该融合蛋白特异性表达于T细胞表面，使修饰过的T细胞(CAR-T)可以对肿瘤细胞进行特异性识别和/或杀伤。由于这种杀伤不依赖于主要组织相容性抗原(MHC)，避免了由于MHC缺失导致的肿瘤免疫逃逸。尽管在恶性血液病的治疗中，CAR-T展现出了良好的应用价值，但在实体瘤治疗中，CAR-T往往并不能达到预期效果，甚至在临床研究中，CAR-T可能会存在由于不能与肿瘤细胞有效结合的脱靶效应而产生的毒性。此外，由于目前CAR-T多采用EF1a等强启动子表达CAR，使其表达丰度往往维持在过高的水平而产生其他副作用。这种现象在以HER2为靶点的CAR-T中体现明显：4D5是高亲和力靶向HER2的抗体，将其序列用于CAR-T时，CAR-T细胞会对不同HER2表达丰度的细胞产生接近相同的杀伤水平，因此也会对低表达HER2的正常组织造成损伤。为了避免因不能与肿瘤细胞有效结合的脱靶效应而产生的毒性，有研究者通过大量的抗体筛选工作，选择了具有较低亲和力但对高靶抗原表达靶细胞杀伤未明显降低的抗体FRP5作为CAR-T的scFv序列。虽然能够一定程度上避免了基于4D5抗体序列的CAR-T的问题，但是筛选工作增加，使大量高亲和力抗体不能应用于CAR-T领域。
技术实现思路
本申请提供了一种表面包含免疫调节剂的细胞及其用途，其具有下列性质中的一种或多种：1)组织特异性增高；2)避免对正常组织的误伤；3)降低所述细胞的凋亡水平，延长所述细胞发挥免疫效应的时间；4)扩大所述免疫调节剂的适用范围；5)抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖。一方面，本申请提供了一种细胞，其表面包含能够特异性识别和/或结合靶标的免疫调节剂，所述细胞中编码所述免疫调节剂的核酸与其转录激活控制域可操作地连接，所述转录激活控制域为条件性转录激活控制域，且其中所述细胞表面的所述免疫调节剂对所述靶标的特异性识别和/或结合使得所述转录激活控制域令所述免疫调节剂在所述细胞中的表达上调。在某些实施方式中，所述的免疫调节剂在所述细胞中的表达不受组成型转录激活控制域的调控。在某些实施方式中，所述的免疫调节剂在所述细胞中的表达受且仅受与其可操作连接的所述条件性转录激活控制域的调控。在某些实施方式中，所述的细胞中的所述免疫调节剂选自：嵌合抗原受体(CAR)、免疫检查点抑制剂和细胞因子。在某些实施方式中，所述的条件性转录激活控制域位于编码所述免疫调节剂的核酸的上游。在某些实施方式中，所述的编码所述免疫调节剂的核酸通过连接子与所述条件性转录激活控制域可操作地连接，所述连接子包含选自下组的核苷酸序列：SEQIDNO:19和SEQIDNO:20。在某些实施方式中，所述的条件性转录激活控制域包含NFAT结合位点。在某些实施方式中，所述的NFAT结合位点结合NFAT家族成员。在某些实施方式中，所述的NFAT家族成员选自下组：NFATc1、NFATc2、NFATc3、NFATc4、NFAT5、Spl和NKκB。在某些实施方式中，所述的NFAT结合位点包括至少1个拷贝的NFAT结合序列。在某些实施方式中，所述的NFAT结合序列包含选自下组的核苷酸序列：SEQIDNO:21和SEQIDNO:26。在某些实施方式中，所述的细胞表面的所述免疫调节剂对所述靶标的特异性识别和/或结合促进所述NFAT家族成员与所述条件性转录激活控制域中所述NFAT结合位点的结合，从而提高所述免疫调节剂的转录水平。在某些实施方式中，所述的条件性转录激活控制域还包含启动子。在某些实施方式中，所述的条件性转录激活控制域中，所述NFAT结合位点位于所述启动子的上游。在某些实施方式中，所述的NFAT结合位点与所述启动子直接或间接连接。在某些实施方式中，所述的启动子选自下组：最小IL2启动子和最小CMV启动子。在某些实施方式中，所述的条件性转录激活控制域包含选自下组的核苷酸序列：SEQIDNO:1。在某些实施方式中，所述的免疫调节剂为嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体包括细胞内结构域，所述细胞内结构域包括信号传导结构域和/或共刺激结构域。在某些实施方式中，所述的信号传导结构域包含选自下组的部分：CD3ζ的信号传导结构域、CD3δ的信号传导结构域和CD3ε的信号传导结构域。在某些实施方式中，所述的共刺激结构域包含选自下组的部分：CD27的共刺激结构域、CD28的共刺激结构域、CD137的共刺激结构域、ICOS的共刺激结构域和OX40的共刺激结构域。在某些实施方式中，所述的CAR包含铰链区。在某些实施方式中，所述的铰链区包含选自下组的部分：IgG4的铰链区、IgG1的铰链区和CD8的铰链区。在某些实施方式中，所述的CAR包含跨膜区。在某些实施方式中，所述的跨膜区包含选自下组的部分：CD8的跨膜区、CD28的跨膜区和CD24的跨膜区。在某些实施方式中，所述的CAR包含靶向部分。在某些实施方式中，所述的靶向部分包括ScFv。在某些实施方式中，所述的靶向部分特异性结合和/或识别肿瘤抗原。在某些实施方式中，所述的靶向部分特异性结合和/或识别选自下组的靶标：HER家族成员、CD19、CD20、CD33、CD138、BCMA、EGFR、EGFRVIII、PSMA、GD2、CEA和GPC3。在某些实施方式中，所述的靶向部分特异性结合和/或识别选自下组的靶标：HER2和GPC3。在某些实施方式中，所述的编码所述免疫调节剂的核苷酸包含选自下组的核苷酸序列：SEQIDNO:24和SEQIDNO:25。在某些实施方式中，所述的细胞选自下组：免疫细胞、巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞。在某些实施方式中，所述的免疫细胞选自下组：T细胞、B细胞和NK细胞。另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包括本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。另一方面，本申请提供了一种使免疫调节剂在细胞中的表达上调的方法，其包括以下的步骤：(a)提供本申请所述的细胞；(b)使(a)的所述细胞与可与所述免疫调节剂特异性识别和/或结合的靶标接触，从而使得所述免疫调节剂在所述细胞中的表达上调。另一方面，本申请提供了一种所述的细胞和/或所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖。另一方面，本申请提供了一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，所述方法包括使所述的细胞和/或所述的药物组合物与所述肿瘤或肿瘤细胞接触。在某些实施方式中，所述接触为体外接触。另一方面，本申请提供了一种抑制受试者中的肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，所述方法包括向所述受试者施用所述的细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞，其表面包含能够特异性识别和/或结合靶标的免疫调节剂，所述细胞中编码所述免疫调节剂的核酸与其转录激活控制域可操作地连接，所述转录激活控制域为条件性转录激活控制域，且其中所述细胞表面的所述免疫调节剂对所述靶标的特异性识别和/或结合使得所述转录激活控制域令所述免疫调节剂在所述细胞中的表达上调。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180914 CN 201811079949X1.细胞，其表面包含能够特异性识别和/或结合靶标的免疫调节剂，所述细胞中编码所述免疫调节剂的核酸与其转录激活控制域可操作地连接，所述转录激活控制域为条件性转录激活控制域，且其中所述细胞表面的所述免疫调节剂对所述靶标的特异性识别和/或结合使得所述转录激活控制域令所述免疫调节剂在所述细胞中的表达上调。


2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述免疫调节剂在所述细胞中的表达受且仅受与其可操作连接的所述条件性转录激活控制域的调控。


3.根据权利要求1-2中任一项所述的细胞，其中所述条件性转录激活控制域包含NFAT结合位点。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的细胞，所述条件性转录激活控制域还包含启动子。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的细胞，所述条件性转录激活控制域包含选自下组的核苷酸序列：SEQIDNO:1。
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭昊，黄经纬，陈思晔，凌有国，李慧姣，杨焕凤，何晓文，
申请(专利权)人：上海原能细胞医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31