一种根瘤菌及其菌剂和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种根瘤菌，为根瘤菌Ery‑6(Rhizobium sp.Ery‑6),保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCM 2019729。本发明专利技术还提供了一种含有上述根瘤菌的微生物菌剂及微生物菌剂的制备方法，并提供了上述微生物菌剂在降解红霉素中的应用。本发明专利技术的根瘤菌Rhizobium sp.Ery‑6对红霉素具有极强的降解能力，能够以红霉素为唯一碳源进行生长，在48h内对无机盐培养基中100mg/L的红霉素的降解率能够达到79.78％，对无机盐培养基中1000mg/L的红霉素的降解率高达37.3％，具有良好的开发应用前景。

A Rhizobium and its fungicide and Application

【技术实现步骤摘要】
一种根瘤菌及其菌剂和应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种根瘤菌及其菌剂和应用。
技术介绍
抗生素是一种低到中等分子量的化合物，具有多种化学和生物学特性。抗生素是用来治疗细菌感染的药物。抗生素广泛应用在规模化畜禽养殖过程中的动物，包括四环素类、磺胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基类等。中国每年生产约21万吨抗生素，约占世界总量的60％，包含了36种不同的抗生素化合物，其中过半的抗生素被用于畜禽养殖业，畜禽粪便中残留抗生素伴随着肥料进入农田。据报道，几乎90％的畜牧和家禽使用的抗生素都是在亚治疗浓度下使用的，其中70％是为了预防疾病，30％是为了促进生长。应用于畜禽的抗生素主要通过排泄物、污水灌溉和污泥堆肥等直接和间接排放进入环境，对自然生态系统产生不利影响。至此，抗生素在人类和动物的广泛使用下，对生态系统和人类健康的负面影响引起了人们的极大关注。抗生素对环境的污染可从几个方面发生，如药品生产过程、丢弃未使用的药品和容器等，或施用粪肥和废渣。环境中的抗生素残留不仅改变了环境微生物群落的结构和丰度，而且影响了微生物群落的能力。抗生素存在和持久性造成了严重的环境污染问题。近年来，由于环境中耐药性细菌的出现，残留抗生素在环境中的潜在影响等引起的一系列环境问题已成为全球关注的焦点。长期接触低毒性和亚毒性的抗生素可改变微生物生态，促进抗生素耐药性细菌的发展和传播。另外，对水生物种的毒性影响，甚至可以通过食物链直接威胁到人类健康。目前，由于抗生素特性的多样化，利用自然界的微生物降解可能是抗生素消减所必需的。红霉素属于大环内酯类抗生素，具有很强的抗菌作用，应用广泛。来自孟加拉国、印度、印度尼西亚和塔兰的研究报告，在海产养殖水中检测到红霉素，其浓度达到180ng/L，美国环境保护署(USEPA)在2009年首次将红霉素列为饮用水需要优先检测和控制的候选污染物之一。现有的生物处理工艺如曝气生物滤池，只能消减废水中的微量红霉素，更有效地降解环境中的红霉素残留还要依靠特定的微生物。迄今为止，国内外对微生物降解红霉素的研究较少。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术问题提供了一种能够高效降解红霉素的根瘤菌及其菌剂和应用。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：第一方面，本专利技术提供了一种根瘤菌，命名为Rhizobiumsp.Ery-6，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCM2019729，保藏日期为2019年9月17日。第二方面，本专利技术提供了上述根瘤菌在降解红霉素中的应用。第三方面，本专利技术提供了一种微生物菌剂，包含上述根瘤菌。第四方面，本专利技术提供了上述微生物菌剂的制备方法，将所述根瘤菌接种于培养基中得到所述微生物菌剂。进一步，所述培养基为LB培养基或以红霉素为唯一碳源的无机盐培养基。第五方面，本专利技术还提供了上述微生物菌剂在降解红霉素中的应用。第六方面，本专利技术提供了一种降解红霉素的方法，向含有红霉素的水样中添加上述微生物菌剂，对水样中的红霉素进行降解。进一步，降解条件为：温度为30-35℃，pH为7-7.0，120r/min振荡培养。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术的根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6对红霉素具有极强的降解能力，能够以红霉素为唯一碳源进行生长，在48h内对无机盐培养基中100mg/L的红霉素的降解率能够达到79.78％，对无机盐培养基中1000mg/L的红霉素的降解率高达37.3％，同时还可以降解罗红霉素、泰乐菌素和氯霉素，具有良好的开发应用前景。附图说明图1为本专利技术根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6的形态照片，其中1A为菌落形态，1B和1C为透射电镜下单个细菌形态；图2为本专利技术根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6的16SrDNA凝胶电泳图；图3为本专利技术根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6的系统发育树；图4为本专利技术根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6的生长曲线；图5为培养时间对根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6降解能力的影响；图6为红霉素初始浓度对根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6降解能力的影响，其中图6A底物浓度分别为10、30、50、70、90、110mg/L，图6B底物浓度分别为10、50、100、200、400、800、1000mg/L；图7为温度对根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6降解能力的影响；图8为转速对根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6降解能力的影响；图9为pH值对根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6降解能力的影响；图10为外加碳氮源对根瘤菌Rhizobiumsp.Ery-6降解能力的影响。具体实施方式以下结合附图及具体实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实验材料红霉素降解菌分离的土壤取自浙江省德清市一家生产有机肥公司内，长期堆放受红霉素污染的鸡粪场地的土壤。实验试剂及仪器UltiMate3000型高效液相色谱仪(HPLC)，C18色谱柱(250×4.6mm，5μm，Waters，USA)，UV-5100型紫外分光光度计(上海元析)，THZ-98AB型摇床(上海一恒)，DHP-9082型恒温培养箱(上海沙鹰)，YXQ-50SII型高压灭菌锅(上海博迅)，DS-5510DTH型超声波清洗机(上海生析)，Mini-15K型高速离心机(杭州奥盛)，YR-PTB型真空泵(上海亚荣)，0.22μm针筒式微孔滤膜(天津津腾)。红霉素(纯度98％，源叶生物)，乙腈(色谱纯，Tedia，德国)，甲醇(色谱纯，Tedia，德国)，磷酸二氢铵(分析纯，麦克林)，其余化学药品均为分析纯试剂，实验用水为哇哈哈纯净水，Millipore制备的超纯水。培养基微量元素溶液(g/L)：FeCl31.6g，CoCl2·6H2O0.1g，MnCl2·4H2O0.425g，ZnCl20.05g，NiCl2·6H2O0.01g，CuSO4·5H2O0.015g，H3BO30.05g，Na2MoO4·2H2O0.01g，CaCl20.05g，蒸馏水定容至1000mL。无机盐液体培养基：NH4Cl1g/L，KH2PO40.5g/L，K2HPO41.5g/L，MgSO40.2g/L，NaCl1g/L，2mL/L微量元素溶液，加超纯水至1000mL。pH7.0，121℃灭菌30min。LB液体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，加超纯水至1000mL。pH7.0，121℃灭菌30min。固体培养基：在液体培养基中加入1.5％的琼脂。红霉素的液相色谱检测条件：UltiMate3000型高效液相色谱仪DAD检测器，色谱柱为XTERRARPC18柱(250×4.6mm，5μm)，流动相为0.02M的pH3.0的磷酸二氢本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种根瘤菌，其特征在于，为根瘤菌Ery-6(Rhizobium sp.Ery-6),保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCM 2019729。/n

【技术特征摘要】
1.一种根瘤菌，其特征在于，为根瘤菌Ery-6(Rhizobiumsp.Ery-6),保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCM2019729。


2.一种如权利要求1所述的根瘤菌在降解红霉素中的应用。


3.一种微生物菌剂，其特征在于，包含权利要求1所述的根瘤菌。


4.一种如权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，将所述根瘤菌接种于培养基中得到所述微生物菌剂。


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【专利技术属性】
技术研发人员：郑华宝，许双燕，张涛，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33