副干酪乳杆菌株LBP-YE01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用技术

本发明专利技术副干酪乳杆菌株LBP‑YE01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用，属于微生物培养、繁殖技术领域。所述副干酪乳杆菌株LBP‑YE01，分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，已经于2018年2月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)进行保藏，保藏编号为CGMCC No.15360。本发明专利技术具有以下优点：1、本发明专利技术的饮品在人体消化道的条件下能够具有很好的生物活性；2、由于本发明专利技术的乳酸菌在人体消化道内具有很好的生物活性，因此有助于改善人体的肠胃功能。

Selection, preservation and application of Lactobacillus paracasei strain lbp-ye01, its culture, its bacterial solution and subculture strain

【技术实现步骤摘要】
副干酪乳杆菌株LBP-YE01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用
本专利技术属于微生物培养、繁殖
，具体涉及副干酪乳杆菌株LBP-YE01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用。
技术介绍
副干酪乳杆菌是国家卫生部指定能添加于食品的有益菌种之一，大部分菌株的耐受性很好。但是大部分菌株在37.5℃的环境下培养后失活率比较高，在人体胃肠道内强酸、胆盐和人体消化酶环境无活性。
技术实现思路
专利技术是鉴于上述情况而完成的，其目的在于能够提供使乳酸菌满足人体和动物消化道系统生存并繁殖，以发挥其有益菌群的作用。本菌株的标准繁殖温度是42～45℃，在100℃能存活5分钟以上，故能作为补充人体胃肠道的有益菌优选菌株。本专利技术的目的在于公开了一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01。本专利技术第二个目的在于公开了上述副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物。本专利技术第三个目的在于公开了上述副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液。本专利技术第四个目的在于公开了上述副干酪乳杆菌株LBP-YE01传代菌株挑选和保藏方法。本专利技术第五个目的在于公开了副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物和菌液的应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01，CGMCCNo.15360。上述技术方案所述的一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01，其中：该菌株耐高温，最佳培养繁殖温度42～45℃，在100℃的环境下能存活5分钟以上。一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物，其中：所述副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物是在由大豆渣和糯米组成的菌体培养基中培养副干酪乳杆菌株LBP-YE01得到，培养温度为10℃-20℃，培养时间为10-50天；所述大豆渣和糯米的重量百分比分别为：大豆渣70％-90％、糯米10％-30％。本技术方案中副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物(简称A产物)，A产物中副干酪乳杆菌的数量>1.5×107CFU/g。一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液，其中，所述菌液通过下述方法制备：将水和麦芽糖添加到上述技术方案所述的副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物，在42℃-45℃下培养1-2天，过滤后得到副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液；所述副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物、水和麦芽糖之间的重量份为副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物1份、水3-30份、麦芽糖0.3-0.5份。本技术方案中副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液(简称B产物)过滤得到的B产物中副干酪乳杆菌数量>2×107CFU/ML。一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01传代菌株挑选和保藏方法，其特征在于，所述挑选和保藏方法包括下述步骤：从上述技术方案所述的副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液中取10mL菌液于无菌试管内在100℃水浴中浸泡5分钟后，再移取1mL菌液至无菌平皿内，将冷却至48℃的MRS琼脂培养基倾注于平皿约15ml，转动平皿混合均匀后在恒温培养箱36±1℃厌氧培养72H；(从移取1ml菌液到平皿倾注15分钟内完成)；培养完成后，取出平皿，在单个菌落中用接种环挑取菌落，采取斜面接种法接种6～10支无菌斜面MRS琼脂培养基试管，接种后的试管斜面放入36±1℃厌氧培养72H后采用标准的真空冷冻干燥保藏法保藏菌种；所述MRS琼脂培养基是通过下述方法制备：将蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温801mL、K2HPO4·7H2O2g、醋酸钠·3H2O5g、柠檬酸三铵2g、MgSO4·7H2O0.2g、MgSO4·4H2O0.05g和琼脂粉15g加入到1000mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH至6.2±0.2，分装后121℃高温灭菌15min～20min。上述技术方案所述的副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物在作为人和动物口服饮品中的应用。上述技术方案所述的副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液在作为人和动物口服饮品中的应用。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术中副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液是由副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物在42℃-45℃下培养得到的，因此本专利技术的饮品人体消化道的条件下能够具有很好的生物活性。2、由于本专利技术的副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液在人体消化道内具有很好的生物活性，因此有助于改善人体的肠胃功能。附图说明：1.图1为副干酪乳杆菌在MRS培养基平皿内的菌落图。2.图2为在3000—4000倍的显微镜上观测的副干酪乳杆菌的形态。3.图3为副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液在人工胃液中的生长情况。4.图4为副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液在人工肠液中的生长情况。5.图5为副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液对胆盐的耐受性。6.图6为副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液的耐盐能力。菌株保藏信息：本专利技术副干酪乳杆菌株LBP-YE01，分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillusparacasei，已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)进行保藏，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.15360，保藏日期为2018年2月27日。具体实施方式：为使本专利技术的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本专利技术副干酪乳杆菌株LBP-YE01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用作进一步的说明。实施例1：副干酪乳杆菌株LBP-YE01的制备或分离：1、野外取样，在我国黑龙江省野外的树林内，在阴暗、潮湿的地方挑选到生成出金针菇的树木或者枯木。在金针菇的根部与树皮和土壤之间的混合培养基中采集100g左右的混合物(不是每次取样都会得到本专利技术的副干酪乳杆菌株，故而要大量采集、挑选。)2、制备样液，此混合物置于1L的锥形瓶内，加入矿泉水500ml带回到微生物实验室内，在室温25℃左右充分搅拌(2H-3H)后，用200目滤布过滤后得到滤液于1L锥形瓶，将此滤液500ml置于100℃水中充分震荡15分钟。3、培养在超净工作台上，取滤液1ml置于无菌平皿内，将准备好的约48℃的MRS琼脂培养基倾注于平皿约15ml，转动平皿混合均匀后在恒温培养箱36±1℃厌氧培养72H。4、挑选、纯化在培养皿中观察菌落形态，副干酪乳杆菌在MRS培养基平皿内的形态(如图1所示)，找到此菌落后，用接种环挑取少量菌体至试管MRS斜面培养基上。5、纯培养试管MRS斜面在36±1℃恒温培养箱中，倒置培养72H获得纯培养。6、检测将获得的纯培养的试管MRS斜面送到专门的机构进行菌种测定，评测是否为副干酪乳杆菌种。7、扩培将获得的纯培养菌用接种环接种到大豆渣70％与糯米粉30％的混合培养基中，10-20℃培养20天，再转入0-5℃低温培养180天左右即可。实施例2：副干酪乳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01，CGMCC No.15360。/n

【技术特征摘要】
1.一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01，CGMCCNo.15360。


2.根据权利要求1所述的一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01，其特征在于：该菌株耐高温，最佳培养繁殖温度42～45℃，在100℃的环境下能存活5分钟以上。


3.一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物，其特征在于：所述副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物是在由大豆渣和糯米组成的菌体培养基中培养副干酪乳杆菌株LBP-YE01得到，培养温度为10℃-20℃，培养时间为10-50天；所述大豆渣和糯米的重量百分比分别为：大豆渣70％-90％、糯米10％-30％。


4.一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液，其特征在于，所述菌液通过下述方法制备：将水和麦芽糖添加到权利要求3所述的副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物，在42℃-45℃下培养1-2天，过滤后得到副干酪乳杆菌株LBP-YE01菌液；
所述副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物、水和麦芽糖之间的重量份为副干酪乳杆菌株LBP-YE01培养物1份、水3-30份、麦芽糖0.3-0.5份。


5.一种副干酪乳杆菌株LBP-YE01传代菌株挑选和保藏方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶进荣，
申请(专利权)人：深圳市肽素生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44