一种杜娟兰种苗组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种杜娟兰种苗组培快繁方法，属于植物繁育技术领域，培育过程中将成熟种子播种于种子萌发培养基中，培养5个月后，将萌发的种子转接入圆球茎诱导培养基中培养3个月得到大量圆球茎，再将圆球茎转接入分化培养基中培养2个月，分化得到带根的植株，将植株取出进行驯化，驯化3个月后获得可以移栽大田的优质种苗，该方法提升了杜鹃兰繁殖率，为杜鹃兰种苗的规模化、工厂化生产提供了可靠的技术保障，为杜鹃兰大规模繁殖提供了一种新途径，有效地解决了当前杜鹃兰植物资源和种苗资源短缺的问题。

A method of tissue culture and rapid propagation of Dujuan LAN seedlings

【技术实现步骤摘要】
一种杜娟兰种苗组培快繁方法
本专利技术涉及植物繁育
，具体为一种杜娟兰种苗组培快繁方法。
技术介绍
杜鹃兰为兰科植物，是中药材山慈菇的基原植物，以假鳞茎入药，味辛、甘，性寒，有小毒。有清热解毒、润肺止咳、活血止痛、消肿散结等功效，为重要紧缺中药材。杜鹃兰喜冷凉阴湿环境，对生态环境要求较严，目前主要依靠分株繁殖，其繁殖系数极低。随着中药材市场对中药材山慈菇的需求量增大，致使人们进行地毯式的采挖，杜娟兰野生资源濒临枯竭，导致药材价格节节攀升，杜鹃兰的快速繁殖成了亟待解决的难题。科研工作者研发出了在无菌组织培养条件下培育杜鹃兰苗，但是培育过程繁琐，时间周期长，成本高。中国专利“公告号CN107873521”公开了一种杜鹃兰种子组培快繁方法，流水下冲洗10min，剥离出种子；用0.1％升汞10min+70％酒精10s进行消毒；接种到MS+2，4-D1mg/L+BA1mg/L愈伤组织诱导；转接到1/2MS+NAA1mg/L+BA1mg/L愈伤组织分化成苗；培养于24±1°C、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d；将组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗，用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，用营养钵分装。50d后诱导率可达到55％；培养40d后成苗；苗成活率达到83％。该方法过程中诱导率过低，所得苗成活率不高，不满足杜鹃兰大规模种植的需求，急需寻找一种提高成活率，能够大规模种植的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述
技术介绍
困难，提供一种杜娟兰种苗组培快繁方法。为达到上述目的，采用的技术方案为：一种杜娟兰种苗组培快繁方法，所述杜娟兰种苗组培快繁方法包含以下步骤：步骤一，采集杜鹃兰成熟果荚，将果荚消毒处理后播种于1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蛋白胨5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L，pH为6.0的种子萌发培养基中，培养5个月，其中前1个月处于完全黑暗条件，1个月后置于光照为1200Lx，12h/d的环境中培养；步骤二，将萌发的种子转接入改良MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.0mg/L+维生素C5g/L+蛋白胨10g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂2g/L+白糖60g/L+活性炭2g/L，pH为6.0的圆球茎诱导培养基中，培养3个月得到大量圆球茎；步骤三，将圆球茎转接入1/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+维生素C5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L+活性炭2g/L，pH为6.0分化培养基中培养2个月，得到带根的完整植株；步骤四，将得到的植株进行驯化和移栽，3个月后即可获得移栽大田的优质种苗。进一步，步骤四中所述驯化是指将步骤三得到的苗切下来，浸泡多菌灵500倍液+中生霉素1000倍液10-15min后备用；所述驯化是指在简易大棚内用竹片制成高1m、宽1m的小拱棚，拱棚内铺放一层厚10-15cm的育苗专用基质即制成驯化苗床，用1/1000高锰酸钾对苗床内的基质进行消毒；所述移栽是指将分化得到的苗移栽入驯化苗床内，行株距均为3cm，移栽完毕后用塑料薄膜完全覆盖在竹片拱棚上，保持苗床内湿度为80-90%，温度为26-28℃，每10天喷洒一次自制营养液。进一步，步骤二中所述改良MS是指将MS培养基中KNO3、NH4NO3、KH2PO4、VB1、VB6的量分别调整为：1500mg/L、1300mg/L、200mg/L、1mg/L、1mg/L，其余组分和浓度均不变。进一步，步骤二中所述圆球茎诱导培养基中的琼脂的用量为2g/L，配出来的培养基处于半固体状态。进一步，所述育苗专用基质为腐殖土、锯末面、蛭石和河沙，按体积比2:1:1:1混合而成。进一步，所述自制营养液为：MS（只包含MS基本培养基中的大量和微量元素，其中KH2PO4的量调整为200mg/L）+IBA0.5mg/L+阿司匹林10g/L。采用上述方案的有益效果为：这种杜娟兰种苗组培快繁方法培育出的种苗优质，生长良好，诱导率、分化率和成活率在现有技术水平上都得到了显著提高，为杜鹃兰种苗的规模化、工厂化生产提供了可靠的技术保障，为杜鹃兰大规模繁殖提供了一种新途径，有效地解决了当前杜鹃兰植物资源和种苗资源短缺的问题。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1种子处理：取成熟未开裂果夹，用75%酒精擦拭表面，用2%NaClO浸泡10分钟，然后用无菌水洗涤5次，阴干表面水分，将灭菌好的果夹剖开取出种子接种于种子萌发培养基中，取种子过程中用分析天平取1g种子，得到种子数量，再按照比例称取约1000颗种子。种子萌发：将处理后的种子播种于1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蛋白胨5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L，pH为6.0的种子萌发培养基中，培养5个月，其中前1个月处于完全黑暗条件，1个月后置于光照为1200Lx，12h/d的环境中培养。圆球茎诱导：将萌发的种子转接入改良MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.0mg/L+维生素C5g/L+蛋白胨10g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂2g/L+白糖60g/L+活性炭2g/L，pH为6.0的圆球茎诱导培养基中，培养3个月得到大量圆球茎。圆球茎诱导培养基中的琼脂的用量为2g/L，诱导培养基处于半固体状态。圆球茎分化：将圆球茎转接入1/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+维生素C5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L+活性炭2g/L，pH为6.0分化培养基中培养2个月，得到带根的完整植株。如下表1，种子萌发步骤中种子的平均萌发率为57.5%，诱导步骤中种子的平均诱导率为94.2%，分化步骤中种子的平均分化率为94.4%，最终，得到完整植株的成活率为89.3%。　表1实验一实验二实验三种子数量（颗）100010001000萌发种子数量（颗）581576568圆球茎数量（个）545547539植株数量（株）518510513实施例2在实施例1的基础上，进行植株驯化：①分化苗的准备：将分化得到苗切下来，浸泡多菌灵500倍液+中生霉素1000倍液10-15min后备用；②苗床制作：在简易大棚内用竹片本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杜娟兰种苗组培快繁方法，其特征是：所述杜娟兰种苗组培快繁方法包含以下步骤：/n步骤一，采集杜鹃兰成熟种子，将种子消毒处理后播种于1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蛋白胨5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L，pH为6.0的种子萌发培养基中，培养5个月，其中前1个月处于完全黑暗条件，1个月后置于光照为1200 Lx，12h/d的环境中培养；/n步骤二，将萌发的种子转接入改良MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.0mg/L+维生素C 5g/L+蛋白胨10g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂2g/L+白糖60g/L+活性炭2g/L，pH为6.0的圆球茎诱导培养基中，培养3个月得到大量圆球茎；/n步骤三，将圆球茎转接入1/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+维生素C 5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L+活性炭2g/L，pH为6.0分化培养基中培养2个月，得到带根的完整植株；/n步骤四，将瓶内的植株移出，进行驯化，3个月后即可获得移栽大田的优质种苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种杜娟兰种苗组培快繁方法，其特征是：所述杜娟兰种苗组培快繁方法包含以下步骤：
步骤一，采集杜鹃兰成熟种子，将种子消毒处理后播种于1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蛋白胨5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L，pH为6.0的种子萌发培养基中，培养5个月，其中前1个月处于完全黑暗条件，1个月后置于光照为1200Lx，12h/d的环境中培养；
步骤二，将萌发的种子转接入改良MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.0mg/L+维生素C5g/L+蛋白胨10g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂2g/L+白糖60g/L+活性炭2g/L，pH为6.0的圆球茎诱导培养基中，培养3个月得到大量圆球茎；
步骤三，将圆球茎转接入1/4MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+维生素C5g/L+马铃薯30g/L+香蕉60g/L+琼脂5g/L+白糖30g/L+活性炭2g/L，pH为6.0分化培养基中培养2个月，得到带根的完整植株；
步骤四，将瓶内的植株移出，进行驯化，3个月后即可获得移栽大田的优质种苗。


2.根据权利要求1所述的杜娟兰种苗组培快繁方法，其特征是：步骤四中所述驯化是指将步骤三得到的苗移出来，浸泡多菌灵500倍液+中生霉素1000倍液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红美，龚晓林，梁大勇，石建龙，
申请(专利权)人：遵义市龙驰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52