【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸检测方法及检测用试剂
本专利技术涉及核酸检测方法。更详细地说涉及在能够与成为检测对象的核酸试样形成复合物的检测核酸及核酸剪切酶的存在下来检测有无成为检测对象的核酸的方法。本申请基于2017年7月31日在日本申请的特愿2017-148402号主张优先权，将其内容援引在此。
技术介绍
在基因诊断中，存在很多准确且迅速地对DNA进行检测和/或定量的手法(专利文献1～3、非专利文献1，2)。对RNA进行检测和/或定量的手法虽然有，但需要逆转录反应等工夫和时间。另外，还有逆转录反应的偏差。因此，为了能够用较少的操作即可在短时间内进行RNA检测，考虑到利用等温扩增反应。其中，使用被称为Flapendonuclease1(FEN-1，侧翼核酸内切酶-1)或5’-Nuclease(5’-核酸酶)的核酸剪切酶的InvasiveCleavageAssay(侵入裂解分析，ICA)由于操作性和反应的稳定性而被称作有效的手法。但是，在为使用了FEN-1的ICA时，虽然会识别DNA/DNA双链上的侵入结构而发生侧翼(Flap)部位的...
【技术保护点】
1.一种核酸检测方法，其是从含有靶标核酸的流体中检测靶标核酸的核酸检测方法，/n其具备将具有第一核酸剪切酶和第二核酸剪切酶的检测用试剂混合到所述流体中的检测用试剂混合工序，/n利用所述第一核酸剪切酶将通过所述靶标核酸与具有第一侧翼部位的第一核酸及第二核酸形成复合物而显现的第一侵入结构所附带的所述第一侧翼部位剪切，生成第三核酸，/n利用所述第二核酸剪切酶将通过所述第三核酸与具有第二侧翼部位的第四核酸形成复合物而显现的第二侵入结构所附带的所述第二侧翼部位剪切，生成被剪切物。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170731 JP 2017-1484021.一种核酸检测方法，其是从含有靶标核酸的流体中检测靶标核酸的核酸检测方法，
其具备将具有第一核酸剪切酶和第二核酸剪切酶的检测用试剂混合到所述流体中的检测用试剂混合工序，
利用所述第一核酸剪切酶将通过所述靶标核酸与具有第一侧翼部位的第一核酸及第二核酸形成复合物而显现的第一侵入结构所附带的所述第一侧翼部位剪切，生成第三核酸，
利用所述第二核酸剪切酶将通过所述第三核酸与具有第二侧翼部位的第四核酸形成复合物而显现的第二侵入结构所附带的所述第二侧翼部位剪切，生成被剪切物。
2.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其中，
所述靶标核酸为RNA，
所述第一核酸的至少所述第一侧翼部位、所述第二核酸、所述第四核酸含有DNA。
3.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其中，
所述靶标核酸及所述第四核酸为DNA，
所述第一核酸及所述第二核酸含有RNA。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的核酸检测方法，其中，
通过所述第三核酸与具有第二侧翼部位的第四核酸与第五核酸形成复合物，显现所述第二侵入结构，
所述第五核酸含有DNA。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的核酸检测方法，其中，
所述第二核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性小于所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性，
所述第一核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性小于所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性。
6.根据权利要求4所述的核酸检测方法，其中，
所述第二核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性与所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活性相比，为90％以下，
所述第一核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性与所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性相比，为90％以下。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的核酸检测方法，其中，
所述第一核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性小于所述第二核酸剪切酶对所述第二侵入结构的剪切活性。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的核酸检测方法，其中，
所述第一核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性及所述第二核酸剪切酶对所述第四核酸的剪切活性小于所述第一核酸剪切酶对所述第一侵入结构的剪切活...
【专利技术属性】
技术研发人员：荻野雅之，牧野洋一，
申请(专利权)人：凸版印刷株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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