永生化汗腺肌上皮细胞制造技术

一种永生化汗腺肌上皮细胞，其表达α‑SMA和广谱细胞角蛋白，在至少5次传代后具有球体形成能力；以及一种永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，其中，一边将在表面露出有汗腺肌上皮细胞的细胞结构体以悬浮在培养基中的状态进行培养一边将永生化基因导入至该细胞中，将所得到的基因导入体以悬浮在培养基中的状态进行培养，得到永生化汗腺肌上皮细胞。

Immortalized sweat gland myoepithelial cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】永生化汗腺肌上皮细胞
本专利技术涉及永生化汗腺肌上皮细胞。更详细地说，本专利技术涉及在止汗剂、除臭剂等外用剂、汗腺功能的改善剂等的开发等中有用的永生化汗腺肌上皮细胞及其制造方法。
技术介绍
汗腺的功能不全和功能的异常亢进有时会引起中暑等疾病、皮肤的发粘、不适感等。汗腺肌上皮细胞是构成汗腺的细胞之一。汗腺肌上皮细胞参与汗的分泌时的汗腺的运动。另外，根据本专利技术人的报告，汗腺肌上皮细胞为汗腺的干细胞(例如，参见非专利文献1)。因此，为了开发出改善汗腺的功能不全和功能的异常亢进的手段，考虑了将汗腺肌上皮细胞用于汗腺的功能的评价等。但是，从汗腺分离出的汗腺肌上皮细胞在汗腺中存在的量少，而且可传代培养的次数少，因此具有获得性和处理性差的缺点。因此，希望使汗腺肌上皮细胞永生化，对汗腺肌上皮细胞赋予长期的细胞增殖能力。作为使汗腺细胞永生化的方法，报告了使以贴附在培养容器上的状态进行培养的汗腺细胞感染猿猴病毒40(下文中称为“SV40”)的方法(例如，参见非专利文献2)。但是，由于上述方法中将汗腺细胞在与生物体环境不同的环境下进行培养，因此具有难以得到与生物体内的汗腺细胞具有同样的功能和性质的永生化汗腺细胞的缺点。另一方面，考虑了将汗腺细胞以悬浮在培养基中的状态进行培养。但是，本专利技术人在当前还未发现具体记载有能够向悬浮状态的汗腺细胞中导入外来基因的技术的文献。现有技术文献非专利文献非专利文献1：仓田隆一郎等，“IsolationAndCharacterizationOfSweatGlandMyoepithelialCellsFromHumanSkin(来自人皮肤的汗腺肌上皮细胞的分离和鉴定)”，CellStructureandFunction，第39卷，2014年发行，pp.101-112非专利文献2：CATHERINEM.LEEetal.,“NCL-SG3:ahumaneccrinesweatglandcelllinethatretainsthecapacityfortransepithelialiontransport(NCL-SG3：具有跨上皮离子传输能力的人外分泌汗腺细胞株)”，JournalofCellScience，第92卷，1989年发行，pp.241-249
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术是鉴于上述现有技术而进行的，其目的在于提供一种永生化汗腺肌上皮细胞、以及能够以高制造效率制造该永生化汗腺肌上皮细胞的永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，该永生化汗腺肌上皮细胞与生物体内的汗腺肌上皮细胞具有同样的功能和性质，能够使具有该功能和性质的细胞长期增殖。用于解决课题的手段本专利技术涉及：(1)一种永生化汗腺肌上皮细胞，其特征在于，该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白和广谱细胞角蛋白，在至少5次传代后具有球体形成能力；(2)如上述(1)所述的永生化汗腺肌上皮细胞，其中，该细胞进一步表达ATP1a1；(3)一种永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，其是制造永生化汗腺肌上皮细胞的方法，该方法包括下述工序：(I)一边将在表面露出有汗腺肌上皮细胞的细胞结构体以悬浮在培养基中的状态进行培养一边将永生化基因导入至该汗腺肌上皮细胞中而得到基因导入体的工序；以及(II)将由上述工序(I)得到的基因导入体以悬浮在培养基中的状态进行培养而得到永生化汗腺肌上皮细胞的工序；(4)如(3)所述的永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，其中，在上述工序(I)中，藉由病毒载体将永生化基因导入至上述汗腺肌上皮细胞中；(5)如上述(3)或(4)所述的永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，其中，进一步包括下述工序：在进行上述工序(I)之前，从所采取的皮肤组织中除去至少胶原纤维的全部或一部分，得到含有汗腺的组织；在上述工序(I)中，使用上述含有汗腺的组织作为上述细胞结构体；以及(6)如上述(3)或(4)所述的永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，其中，进一步包括下述工序：在进行上述工序(I)之前，将汗腺细胞以悬浮在培养基中的状态进行培养，形成在表面露出有汗腺肌上皮细胞的球体；在上述工序(I)中，使用上述球体作为上述细胞结构体。专利技术的效果根据本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞，可发挥出下述的优异效果：该细胞与生物体内的汗腺肌上皮细胞具有同样的功能和性质，能够使具有该功能和性质的细胞长期增殖。另外，根据本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，可发挥出能够以高制造效率制造本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞的优异效果。附图说明图1的(A)是示出参考例1中得到的病毒感染汗腺球体的荧光显微镜观察的结果的附图代用照片，(B)是示出参考例2中得到的病毒感染汗腺细胞的荧光显微镜观察的结果的附图代用照片，(C)是示出参考例1中得到的病毒感染汗腺球体的相位差显微镜观察的结果的附图代用照片，(D)是示出参考例2中得到的病毒感染汗腺细胞的共聚焦显微镜观察的结果的附图代用照片。图2的(A)是示出试验例2(1)中对实施例1中得到的病毒感染汗腺球体中包含的汗腺细胞的球体形成能力与传代数的关系进行调查的结果的附图代用照片，(B)是示出试验例2(1)中对比较例1中得到的解离汗腺细胞的球体形成能力与传代数的关系进行调查的结果的附图代用照片。图3的(A)是示出对细胞的种类与广谱细胞角蛋白表达量的关系进行调查的结果的图，(B)是示出对细胞的种类与α-SMA表达量的关系进行调查的结果的图。图4的(A)是示出试验例3中对实施例2中得到的病毒感染组织中包含的汗腺细胞的球体形成能力与传代数的关系进行调查的结果的附图代用照片，(B)是示出试验例3中对比较例1中得到的解离汗腺细胞的球体形成能力与传代数的关系进行调查的结果的附图代用照片。具体实施方式如上所述，本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞的特征在于，其表达α-平滑肌肌动蛋白和广谱细胞角蛋白，在至少5次传代后具有球体形成能力。本说明书中，“永生化”是指在至少5次传代后细胞具有球体形成能力。另外，“从汗腺分离出的汗腺肌上皮细胞”是指从汗腺分离且进行了原代培养的汗腺肌上皮细胞(下文中也称为“原代汗腺肌上皮细胞”)。α-平滑肌肌动蛋白和广谱细胞角蛋白是生物体内的汗腺肌上皮细胞的标志物。α-平滑肌肌动蛋白参与引起汗腺收缩这样的汗腺肌上皮细胞的功能的表达。另外，广谱细胞角蛋白形成了汗腺肌上皮细胞的细胞骨架。本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞表达α-平滑肌肌动蛋白和广谱细胞角蛋白，因此与生物体内的汗腺肌上皮细胞具有同样的功能和性质。此外，本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞在至少5次传代后具有球体形成能力，因此与原代汗腺肌上皮细胞相比，能够使与生物体内的汗腺肌上皮细胞具有同样的功能和性质的细胞长期增殖。原代汗腺肌上皮细胞在第4次传代前即丧失球体形成能力。与之相对，本专利技术的永生化汗腺肌上皮细胞在至少5次、优选7次以上、更优选9次以上、进一步优选18次以上、再进一步优选100次以上的传代后仍具有球体形成能力。因此，与原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种永生化汗腺肌上皮细胞，其特征在于，该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白和广谱细胞角蛋白，在至少5次传代后具有球体形成能力。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170809 JP 2017-1545031.一种永生化汗腺肌上皮细胞，其特征在于，该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白和广谱细胞角蛋白，在至少5次传代后具有球体形成能力。


2.如权利要求1所述的永生化汗腺肌上皮细胞，其中，该细胞进一步表达ATP1a1。


3.一种永生化汗腺肌上皮细胞的制造方法，其是制造永生化汗腺肌上皮细胞的方法，该方法包括下述工序：
(I)一边将在表面露出有汗腺肌上皮细胞的细胞结构体以悬浮在培养基中的状态进行培养一边将永生化基因导入至该汗腺肌上皮细胞中而得到基因导入体的工序；以及
(II)将由所述工序(I)得到的基因导入体以悬浮在培养基中的状态进行培养而得到永生化汗腺肌上皮细胞的工序。

【专利技术属性】
技术研发人员：早川智久，仓田隆一郎，藤田郁尚，冈田文裕，关口清俊，
申请(专利权)人：株式会社漫丹，国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP