一种靶向识别免疫细胞的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种识别免疫细胞的多肽，该多肽包括如下氨基酸序列：(a)含人类Triokinase/FMN环化酶的C末端片段序列AILEVLQS的氨基酸序列及其同源序列；或，(b)与(a)中所述的氨基酸序列基本相同的氨基酸序列，所述基本相同是指与上述(a)中所述的氨基酸序列具有70％以上的序列同一性。本发明专利技术还公开了编码所述多肽的核酸序列；一种靶向识别免疫细胞的，包括如上所述的多肽以及带有报告基团的多肽探针；包括上述探针的试剂盒；以及，如上所述的多肽或探针的相关应用。

A peptide targeting to recognize immune cells and its application

【技术实现步骤摘要】
一种靶向识别免疫细胞的多肽及其应用
本专利技术属于分子生物学和细胞检测及成像领域。具体地，本专利技术涉及一种能够靶向识别免疫细胞的多肽及其包含该多肽的探针、试剂盒，及其进行免疫标记的方法。
技术介绍
免疫细胞是介导身体免疫应答的细胞，包括多种不同类型的细胞。这些细胞通过血液和淋巴系统循环，并被募集到组织损伤和感染的位点。不同类型的免疫细胞通过其功能和物理特征而区分开，但免疫细胞大都来自于造血干细胞中的同一起源，并响应于内部和外界的信号按照不同的方式发育。经典的免疫学观点认为，单核吞噬系统是骨髓来源的髓样细胞群体，其中单核细胞在血液、骨髓和脾脏中循环且不进行稳态增殖，其离开血液进入组织后衍生分化为巨噬细胞。而巨噬细胞是在淋巴和非淋巴组织中的固有吞噬细胞，被认为经由清除凋亡细胞和产生生长因子来参与稳态组织的体内平衡。而且，这些细胞在不同组织中，其表型、稳态周期和功能可显示出非常明显的异质性(Geissmannetal.,Developmentofmonocytes,macrophagesanddendriticcells,Science.2010Feb5；327(5966):656-61)。该类细胞在组织正常发育、体内平衡、组织修复和对病原体的免疫反应中起着多种不同作用。成熟的单核/巨噬细胞在体内游动性较强。而在相关组织中，单核/巨噬细胞吞噬细菌、病原体和死细胞后，可以通过附近的淋巴管进入淋巴结或淋巴器官如脾脏等，将吞噬物的抗原提呈给其它淋巴细胞，如T细胞或B细胞等。近年来发现，在多数成熟组织中的巨噬细胞起源于胚胎发育阶段而不是来自循环性的单核细胞。许多组织都具有由胚胎衍生型巨噬细胞和循环性单核细胞衍生的巨噬细胞(也称为循环性巨噬细胞、成年性巨噬细胞)，这两类不同来源的巨噬细胞组成了成熟组织中的巨噬细胞群。这种对组织中巨噬细胞的新理解促进了对循环性单核细胞功能的重新审视。炎症反应会激发单核细胞分化形成巨噬细胞，但在炎症反应过程中驻留性和新征募的巨噬细胞是否会实施同样的功能还不清楚(SlavaEpelman,KoryJ.Lavine,andGwendalynJ.Randolph，OriginandFunctionsofTissueMacrophages，Immunity41,July17,2014，21-35)。由此，也造成了巨噬细胞在不同解剖部位，甚至同一解剖部位，由于来源不同、组织微环境下环境信号对其的刺激不同，可以造成巨噬细胞被激活形成不同的亚群，表达不同的表面标记物。所以，通过单一的生物标记物抗体识别来辨别不同的巨噬细胞亚群就变得很困难或得到相互矛盾的结果。例如在昆明小鼠实验中，腹腔巨噬细胞的识别用F4/80抗体，肺泡巨噬细胞用CD11c抗体，腹壁肌巨噬细胞用CD68抗体，才能获得比较好的结果。另一方面，由于巨噬细胞具有分布广、多功能等特点，在体内对单核/巨噬细胞的大范围识别和成像，例如腹腔、呼吸道、肠道、整个器官、肌肉组织等的分子成像，可以对生物体内免疫系统的变化和发展，炎症或肿瘤发生发展提供直观而又灵敏的细胞和分子层面的变化信息，这对精准诊断疾病无疑是非常重要的。而要达到这一目的，需要一种广谱性单核/巨噬细胞识别探针来实现。组织中的巨噬细胞，尤其是肺泡巨噬细胞，与其他种类的巨噬细胞不同。肺泡巨噬细胞驻留在肺泡的上皮表面，直接与环境外来物发生接触和相互作用，包括直接吸入的空气尘埃微粒，细菌、病毒等。肺泡巨噬细胞是否能正常发挥功能，对肺部免疫和肺部炎症治疗方面有着重要作用(参见Sessilealveolarmacrophagesmodulateimmunitythroughconnexin43-basedepithelialcommunication,KristinWestphalenetal.Nature,2014February27；506(7489):503-506)。同时，肺泡巨噬细胞也是肺部给药研究中的一种重要靶细胞。肺部给药途径具有药物吸收起效快，无肝脏首过效应，肺内的酶相对较少、化学降解和酶降解活性较低等特点，特别适合蛋白质、核酸等生物大分子药物的给药。对此，具有特定靶向性、无毒且可快速代谢的多肽探针和药物递送载体是最优选的。因此，利用广谱性靶向单核/巨噬细胞的分子成像探针对单核/巨噬细胞成像或作为药物递送的载体，在多个领域具有很高的应用前景。目前，对于单核/巨噬细胞的识别和成像，无论是在体内或在体外，基本是利用识别细胞的各种生物标记物或受体等的相应抗体进行识别和标记，并在此基础上开发出各种一抗和二抗联用或者使用直标抗体的组织免疫学和细胞免疫学方法。然而，由于抗体是大分子蛋白，其制备、生产步骤繁琐。在此过程中，存在很多影响抗体活性的因素，使得抗体的质量不可控，批次之间的质量波动大。不同生产商出售的同种抗体之间的质量也无统一标准。而且，通过抗原-抗体相结合原理，对活体单核/巨噬细胞进行的荧光染色标记时，还存在荧光维持时间短等问题。相比于蛋白或抗体，多肽不具备严格意义上的蛋白质三维立体活性结构，因此其免疫原性低，易于通过化学合成获取，并且可以耐受比较严苛的化学修饰和标记并保持其活性。此外，多肽具有高亲和性，较易穿透组织，具有更快的血浆清除速率。通过对多肽进行结构修饰，可使其具有更加优良的药代动力学性质。分子影像学兴起于21世纪初，之后因其操作简单、所得结果直观、灵敏度高等优点，在这十多年时间内，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。目前，分子影像技术已发展出包括光学成像(OpticalImaging，OI)、核磁共振成像(MagneticResonanceImaging，MRS)、放射性核素成像等成像方式，具体如正电子发射计算机断层扫描(positronemissiontomography，PET)和单光子发射计算机断层扫描(Singlephotonemissioncomputedtomography，SPECT)等。但每种模态的成像方法都有其各自的优点和缺陷，多种成像技术联合应用的多模态成像将是今后发展的趋势。哺乳动物的活体分子成像技术，让研究人员能够直接监控活的生物体内的细胞活动和分子变化行为。而在活体分子成像技术中，最重要的是制备合适的活体靶向识别探针。因此，亟需提供一种新的适于识别单核/巨噬细胞的靶向探针，来进行活体成像或靶向给药。
技术实现思路
为了实现上述目的，本专利技术提供了一种广谱性识别单核/巨噬细胞的多肽，其能在动物活体内自动靶向识别不同解剖部位的巨噬细胞，并集结黏附于巨噬细胞上。如果该多肽带有成像报告基团，则可以对各种单核/巨噬细胞进行原位成像，清晰显示出相关单核/巨噬细胞的活体分布，时空改变关系，从而研究活体中单核/巨噬细胞的生理功能，以及实时分布。如果该多肽与药物相连，则药物-多肽可作为靶向药物递送载体，从而提供了一种靶向药物递送的有效工具。因此，本专利技术的目的之一在于提供一种可以靶向识别免疫细胞，尤其靶向识别单核细胞前体和单核/巨噬细胞的新的功能性多肽。本专利技术的另一目的在于提供编码上述多肽的核酸。本专利技术的又一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向识别免疫细胞的多肽，其特征在于，所述多肽包括：/n(a)含人类Triokinase/FMN环化酶的C末端片段序列AILEVLQS(SEQ ID NO.:1)的氨基酸序列；或/n(b)与(a)中所述的氨基酸序列基本相同的氨基酸序列，所述基本相同是指与上述(a)中所述的氨基酸序列具有70％以上的序列同一性。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向识别免疫细胞的多肽，其特征在于，所述多肽包括：
(a)含人类Triokinase/FMN环化酶的C末端片段序列AILEVLQS(SEQIDNO.:1)的氨基酸序列；或
(b)与(a)中所述的氨基酸序列基本相同的氨基酸序列，所述基本相同是指与上述(a)中所述的氨基酸序列具有70％以上的序列同一性。


2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，(a)和(b)中所述的氨基酸序列包括80个以下的氨基酸残基，优选包括60个以下的氨基酸残基，更优选包括45个以下的氨基酸残基。


3.根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于，(a)中所述的氨基酸序列为AILEVLQS(SEQIDNO.:1)，LRAILEVLQS(SEQIDNO.:2)，ILRAILEVLQS(SEQIDNO.:3)，AAILRAILEVLQS(SEQIDNO.:4)，EQPDPGAVAAAAILRAILEVLQS(SEQIDNO.:5)，PGAVAAAAILRAILEVLQ(SEQIDNO.:6)或TKNMEAGAGRASYISSARLEQPDPGAVAAAAILRAILEVLQS(SEQIDNO.:7)。


4.根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于，(b)中所述的氨基酸序列为非人类Triokinase/FMN环化酶C末端中包含与(a)中所述的氨基酸序列具有70％以上序列同一性的序列，优选为AVLEVLQG(SEQIDNO.:8)，VLRAVLEVLQG(SEQIDNO.:9)，EQPDPSAVAAAAILRAILEVLQG(SEQIDNO.:10)，LQPDPSAVAAAAVLRAVLEVLQG(SEQIDNO.:11)，LQPDPGAVAAAAVLRAVLEGLQG(SEQIDNO.:12)，DQPDPGAVAAAAIFRAILEVLQTKAA(SEQIDNO.:13)，DQPDPGAVAAAAILRTILEVLQSQGV(SEQIDNO.:14)，DQPDPGAVAAAAILRAILEVLQSQGA(SEQIDNO.:15)，或EQPDPGAVAAAAILRAILEVLQS(SEQIDNO.:16)。


5.根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于，所述免疫细胞包括淋巴细胞、树突状细胞、单核细胞前体、单核/巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞，优选为单核细胞前体和单核/巨噬细胞。

【专利技术属性】
技术研发人员：魏远安，刘学术，
申请(专利权)人：广东凯安生命技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44