治疗同型半胱氨酸尿症的酶替代疗法优化制造技术

本发明专利技术提供了一种PEG化人截短的胱硫醚合酶蛋白的方法，该蛋白在氨基酸位置15处具有半胱氨酸至丝氨酸的突变(htCBS C15S)。用5kDa、10kDa或20kDa NHS酯PEG分子之一将htCBS C15SPEG化。在该方法中使用了对PEG化过程的过程监控，以降低未PEG化的htCBS C15S和PEG化不足的htCBS C15S的水平。PEG化htCBS C15S的给药在同型半胱氨酸尿症的整个治疗过程中均具有功效。

Optimization of enzyme replacement therapy for homocysteinuria

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗同型半胱氨酸尿症的酶替代疗法优化相关申请的交叉引用本申请要求2017年4月17日提交的美国临时专利申请62/486,246的优先权，该临时专利申请通过引用整体并入本文。序列表本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表文件名为20891004PCT_SL.txt，于2018年4月17日创建，大小为10,794字节。序列表的电子格式信息通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及表征PEG化的人截短的胱硫醚β合酶(htCBS)缀合物，以鉴定其作为经典同型半胱氨酸尿症的酶替代疗法可再现生产和进一步临床开发的适用性。专利技术背景人胱硫醚β合酶(CBS，KEGG酶识别码：EC4.2.1.22)是硫氨基酸代谢的重要酶，其活性决定硫在甲硫氨酸(Met)循环中的循环利用或其通过转硫途径转化为半胱氨酸的合成。参见Finkelstein,J.D.,J.Nutr.Biochem.1990,1,228-237，其全部内容通过引用并入本文。硫氨基酸代谢的关键中间体是非蛋白氨基酸同型半胱氨酸(Hcy)，它可以通过Met合酶或甜菜碱同型半本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PEG化在SEQ ID NO:1氨基酸位置15处具有半胱氨酸至丝氨酸的突变的人截短的胱硫醚β合酶(CBS)蛋白或其变体(htCBS C15S)的方法，所述方法包括：/n(a)将htCBS C15S与溶液中的一个或多个NHS酯PEG分子以摩尔比过量至约40倍的NHS酯PEG分子缀合以产生一个批次，其中多个NHS酯PEG分子为5kDa、10kDa或20kDa NHS酯PEG分子；/n(b)将该批次的尺寸排阻色谱-高效液相色谱(SEC-HPLC)分析的色谱图的保留时间与具有可接受的PEG化的htCBS C15S的SEC-HPLC分析的色谱图的保留时间进行比较以鉴定PEG化不足，其中PEG化不...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170417 US 62/486,2461.一种PEG化在SEQIDNO:1氨基酸位置15处具有半胱氨酸至丝氨酸的突变的人截短的胱硫醚β合酶(CBS)蛋白或其变体(htCBSC15S)的方法，所述方法包括：
(a)将htCBSC15S与溶液中的一个或多个NHS酯PEG分子以摩尔比过量至约40倍的NHS酯PEG分子缀合以产生一个批次，其中多个NHS酯PEG分子为5kDa、10kDa或20kDaNHS酯PEG分子；
(b)将该批次的尺寸排阻色谱-高效液相色谱(SEC-HPLC)分析的色谱图的保留时间与具有可接受的PEG化的htCBSC15S的SEC-HPLC分析的色谱图的保留时间进行比较以鉴定PEG化不足，其中PEG化不足的批次的保留时间大于具有可接受的PEG化的htCBSC15S的保留时间；和
(c)向该批次中添加另外的NHS酯PEG分子，以减少该批次中的PEG化不足的量，从而使htCBSC15SPEG化。


2.一种PEG化在SEQIDNO:1氨基酸位置15处具有半胱氨酸至丝氨酸的突变的人截短的胱硫醚β合酶(CBS)蛋白或其变体(htCBSC15S)的方法，所述方法包括：
(a)将htCBSC15S与溶液中的一个或多个NHS酯PEG分子以摩尔比过量小于约40倍的NHS酯PEG分子缀合以产生一个批次，其中多个NHS酯PEG分子为5kDa、10kDa或20kDaNHS酯PEG分子；
(b)将该批次的非还原毛细管电泳(NR-CE)分析的保留时间与具有可接受的PEG化的htCBSC15S的NR-CE分析的保留时间进行比较以鉴定PEG化不足，其中PEG化不足的批次的保留时间小于具有可接受的PEG化的htCBSC15S的保留时间；和
(c)向该批次中添加另外的NHS酯PEG分子，以减少该批次中的PEG化不足的量，从而使htCBSC15SPEG化。


3.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中NHS酯PEG分子以约10倍的摩尔过量存在。


4.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中NHS酯PEG分子以约20倍的摩尔过量存在。


5.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中NHS酯PEG分子以小于20倍、小于10倍、小于5倍或小于2倍的摩尔过量存在。


6.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中一个或多个NHS酯PEG分子由5kDaNHS酯(5NHS)PEG分子组成。


7.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中一个或多个NHS酯PEG分子由10kDaNHS酯(10NHS)PEG分子组成。


8.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中一个或多个NHS酯PEG分子由20kDaNHS酯(20NHS)PEG分子组成。


9.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中多个NHS酯PEG分子中的每一个均由小于约20kDa的PEG分子组成。


10.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中PEG化不足的htCBSC15S包含少于15个、少于10个、少于5个或少于1个PEG化的氨基酸。


11.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中具有可接受的PEG化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·马伊坦，J·P·克劳斯，E·M·巴布利，F·格拉文，M·塞洛斯莫拉，
申请(专利权)人：科罗拉多州立大学董事会法人团体，奥芬科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US