一种白菜紫色叶片相关分子标记的获得及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种白菜紫色叶片相关分子标记的获得及应用。包括鉴定或辅助鉴定白菜叶片颜色的方法，包括：检测待测白菜基因组是否含有分子标记A3，如果待测白菜基因组含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为紫色，如果待测白菜基因组不含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为绿色，其中，所述分子标记A3为核苷酸序列是SEQ ID NO:3所示的DNA分子。

Acquisition and application of a purple leaf related molecular marker in Chinese Cabbage

【技术实现步骤摘要】
一种白菜紫色叶片相关分子标记的获得及应用
本专利技术涉及生物
，白菜紫色叶片分子标记及其在鉴定白菜植株颜色中的应用。
技术介绍
大白菜原产我国，是我国栽培面积最大的蔬菜作物。近年来，随着生活水平的提高，人们对大白菜的品质要求也随之提高。蔬菜品种供应也随之逐渐呈现多样化趋势，如北京桔红心和黄心大白菜等彩色大白菜的育成和推广等。紫色白菜因色泽艳丽、风味独特、营养丰富、栽培效益高日益受到人们的喜爱。紫色白菜富含花青素。花青素是一类重要的水溶性色素，具有吸引昆虫传粉、抵御低温和紫外线伤害以及防治病虫害等多种生理功能。此外，花青素还具医疗保健功能，如延缓皮肤衰老，防止老年痴呆以及增强机体免疫力等。花青素是目前已知最强的自由基清除剂，清除自由基的能力是维生素C的20倍，维生素E的50倍。另外，花青素也可作为天然食用色素。因此，培育和推广紫色白菜具有十分重要的实用意义。2006年，国内出现了紫色小白菜杂交种“紫罗兰”，但在大白菜种质资源中，尚未发现紫色品种。目前紫色大白菜的紫色性状的主要来源可分为5种：紫红色芥菜、紫色小白菜、紫菜薹、紫红色芜菁和深紫色芥菜。孙日飞等(2006)采用大白菜和紫红色芥菜种间杂交，获得了紫色白菜新种质，但是研究表明，大白菜紫红色性状遗传不符合孟德尔遗传规律。张德双等(2007)采用大白菜与紫色小白菜杂交，获得两份紫色白菜材料，研究发现大白菜叶片紫色对绿色为显性，由一对遗传基因控制，叶片紫色的基因具有累加效应。张明科等(2008)研究表明，来源于紫菜薹的紫色为数量性状，是受一对主基因控制的不完全显性遗传，并呈现出剂量效应，可能还受到微效基因和环境条件的共同影响。Hayashi等在A7连锁群上定位到控制芜菁紫红色的基因，与SSR标记BRMS-036和CAPS标记OPU10C表现连锁，遗传距离分别为2.4cM。近年来，韩国KWONNONGSEED公司权五河利用细胞质雄性不育系CMS成功育成紫色大白菜“紫宝”、“紫裔”品种，叶片紫色性状表现美观、匀称。张德双等(2017)获得了子叶腹面、真叶的腹面和背面、叶柄以及叶脉全部为深紫色大白菜15NG28。15NG28与绿色大白菜的杂交F1代、回交BC1F1代的紫色单株子叶的腹面和背面、真叶的腹面和背面、叶柄以及叶脉均为紫色。目前关于大白菜紫色性状控制基因及遗传规律尚没有清晰的认识。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于：找到一种与白菜叶片为紫色密切相关的分子标记，并将其应用在白菜叶片的颜色鉴定和白菜育种中。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种鉴定或辅助鉴定白菜叶片颜色的方法，包括：检测待测白菜基因组是否含有分子标记A3，如果待测白菜基因组含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为紫色，如果待测白菜基因组不含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为绿色，其中，所述分子标记A3为核苷酸序列是SEQIDNO:3所示的DNA分子。其中，所述检测所述待测白菜中是否含有分子标记A3包括如下步骤：针对所述分子标记A3设计特异性引物对，将所述特异性引物对命名为B1引物对。进一步，所述B1引物对由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所示的两条单链DNA组成。进一步，包括如下步骤：1)提取待测白菜的基因组DNA；2)以待测白菜的基因组DNA为模板，以引物对B1为引物，进行PCR扩增；3)若扩增产物中含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为紫色，若扩增产物中不含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为绿色。所述B1引物对也应在本专利技术的保护范围之内。含有所述B1引物对的鉴定或辅助鉴定白菜叶片颜色的试剂或者试剂盒也应在本专利技术的保护范围之内。所述分子标记A3也应在本专利技术的保护范围之内。上述任一所述的方法、所述分子标记A3、所述引物对或者所述的试剂或试剂盒在白菜育种中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。上述任一所述的方法、所述分子标记A3、所述引物对或者所述的试剂或试剂盒在筛选紫色叶片的白菜中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。附图说明图1为白菜紫色叶片的三种带型。图2为幼苗期紫色白菜和绿色白菜白菜的表型。图3为成苗期紫色白菜的表型。图4为F2代植株鉴定，1-84泳道为紫色后代，85-97泳道为绿色后代，98、99泳道为亲本绿色大白菜，M为DNA分子量标准。图5为F3代植株鉴定，1-132泳道均为F3代紫色植株，M为DNA分子量标准。图6为F3代植株鉴定，其中，133-228泳道为F3代植株，229泳道为F2代绿色植株，230、231位绿色大白菜亲本，M为DNA分子量标准。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本实施例利用白菜紫色叶片分子标记对白菜的植株颜色进行鉴定，所检测白菜为紫色大白菜15NG28(张德双，赵泓，张凤兰，余阳俊，赵岫云，于拴仓，汪维红，苏同兵，卢桂香.新型紫色大白菜15NG28后代的鉴别及其转录组分析.华北农学报，32(6)：14-24。公众可从申请人处获得该生物材料，该生物材料只为重复本专利技术的相关实验所用，不可作为其它用途使用。15NG28真叶的腹面和背面、叶柄以及叶脉全部表现深紫色。)与绿色大白菜84427(张凤兰，张德双，余阳俊，徐家炳，赵岫云，于拴仓，汪维红，卢桂香.晚熟大白菜新品种京秋4号的选育.中国蔬菜，2013(12)：94-96。84427的叶片和叶柄均为绿色，选育过程：于1984年从山东地方品种胶县二叶中经8代自交选育而成的自交不亲和系，亲和指数为2.0，公众可从申请人处获得该生物材料，该生物材料只为重复本专利技术的相关实验所用，不可作为其它用途使用。绿色大白菜84427的表型为，植株半直立，生长势中等，叶色较深，叶面稍皱，叶柄绿色，多茸毛，叶球合叠形，耐病毒病、霜霉病。)实施例1白菜紫色叶片性状特异分子标记的获得方法，步骤包括：(1)提取白菜的基因组DNA；以白菜的基因组DNA为模板，引物对B1(B1-F：tttttgtataacataactctgtttttcccc(如SEQIDNO:1所示)B1-R：gacacaatccatagaaatgtcttcac(如SEQIDNO:2所示))为引物进行PCR。(2)配制如下PCR体系：(3)PCR程序：95℃预变性3min，95℃变性30s，58℃退火30s，68℃延伸2min，扩增35个循环，最后68℃延伸5min。(4)利用1.0％的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳检测。按照上述步骤得到的电泳结果如图1所示，A1、A2和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鉴定或辅助鉴定白菜叶片颜色的方法，其特征在于，检测待测白菜基因组是否含有分子标记A3，如果待测白菜基因组含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为紫色，如果待测白菜基因组不含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为绿色，其中，所述分子标记A3为核苷酸序列是SEQ ID NO:3所示的DNA分子。/n

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定白菜叶片颜色的方法，其特征在于，检测待测白菜基因组是否含有分子标记A3，如果待测白菜基因组含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为紫色，如果待测白菜基因组不含有分子标记A3，则待测白菜的叶片颜色为或者候选为绿色，其中，所述分子标记A3为核苷酸序列是SEQIDNO:3所示的DNA分子。


2.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述检测所述待测白菜中是否含有分子标记A3包括如下步骤：针对所述分子标记A3设计特异性引物对，将所述特异性引物对命名为B1引物对。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述B1引物对由SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所示的两条单链DNA组成。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取待测白菜的基因组DNA；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛晓云，张德双，张凤兰，于拴仓，苏同兵，李佩荣，梁然然，刘庆玲，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京;11