一种单细胞5-hmC的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种单细胞5‑hmC的检测方法，属于分子生物学技术领域，通过微流控芯片法获取包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球，对包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球去乳化处理后，在琼脂糖凝胶微球中将细胞裂解，再利用点击化学反应原理，将Cy5荧光基团连接到基因组DNA上，实现基因组DNA上5‑hmC的化学标记。本发明专利技术利用点击化学反应原理实现5‑hmC的检测和分析，克服了难以进行大量样品检测、无法进行单个细胞内5‑hmC检测、化学反应条件苛刻、反应效率低等缺点。

A single cell 5-hmc detection method

【技术实现步骤摘要】
一种单细胞5-hmC的检测方法
本专利技术属于分析化学、修饰碱基的检测领域，涉及一种单细胞5-hmC的检测方法。
技术介绍
当前研究已经证明同种细胞在微观角度是有显著差异的，即存在着显著的微观不一致性(异质性)，传统的生物学实验都是基于大量细胞的，其实验结果难以反映单细胞水平上的生命活动规律。因此，单细胞分析可以分析同种细胞间的个体差异，能在更微观层次上揭示生命活动的规律，能更加准确的揭露生命活动的本质，也就可以为探究重大疾病的起因、发展和治疗提供更可靠的科学依据。而基因组DNA甲基化是人类基因组中一种重要的表观遗传(epigenetic)修饰，作为转录沉默的标志，DNA甲基化是许多细胞过程的中心环节，而这些细胞过程发挥着重要的作用。5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC)是一种表观修饰的胞嘧啶，是5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-mC)的羟基化形式，可以调控基因表达的关闭，是一种重要的表观遗传修饰。研究表明，5-hmC的表达水平在众多肿瘤组织中显著下降，在研究肿瘤发生及发展过程具有重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单细胞5-hmC的检测方法，其特征在于，包括：通过微流控芯片法获取包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球，对包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球去乳化处理后，在琼脂糖凝胶微球中将细胞裂解，再利用点击化学反应原理，将Cy5荧光基团连接到基因组DNA上，实现基因组DNA上5-hmC的化学标记。/n

【技术特征摘要】
1.一种单细胞5-hmC的检测方法，其特征在于，包括：通过微流控芯片法获取包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球，对包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球去乳化处理后，在琼脂糖凝胶微球中将细胞裂解，再利用点击化学反应原理，将Cy5荧光基团连接到基因组DNA上，实现基因组DNA上5-hmC的化学标记。


2.根据权利要求1所述的单细胞5-hmC的检测方法，其特征在于，获取包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球后，将包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球于4℃下固化处理3～5h，使琼脂糖凝胶微球中琼脂糖含量达到1.5％。


3.根据权利要求1所述的单细胞5-hmC的检测方法，其特征在于，所述对包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球去乳化处理是将包裹单细胞的琼脂糖凝胶微球离心后，依次用异丙醇、无水乙醇震荡混合、离心处理，再加入PBS，震荡混合后离心处理，收集沉淀。


4.根据权利要求1所述的单细胞5-hmC的检测方法，其特征在于，在琼脂糖凝胶微球中将细胞裂解...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永席，张进，薛静，陈锋，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61