特异性结合间皮素的单克隆抗体及嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合间皮素的单克隆抗体及嵌合抗原受体。本发明专利技术的单克隆抗体含有文中所述的CDR序列，重链可变区在对应于SEQ ID NO:1第57‑73位的氨基酸位置上存在一个或数个取代突变，且该单克隆抗体与间皮素抗原的亲和力与SEQ ID NO:1第23‑272位所示的单链抗体的亲和力相比降低。优选的是，该单克隆抗体是单链抗体。表达含有本发明专利技术单链抗体的CAR的免疫效应细胞能有效杀伤间皮素阳性肿瘤细胞、同时毒副作用又较小。

Monoclonal antibodies and chimeric antigen receptors specifically binding to mesothelin

【技术实现步骤摘要】
特异性结合间皮素的单克隆抗体及嵌合抗原受体
本专利技术涉及肿瘤治疗领域，尤其涉及特异性结合间皮素的单克隆抗体及嵌合抗原受体。
技术介绍
针对恶性肿瘤的免疫治疗近年来发展迅速，取得了令人瞩目的临床疗效。嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法是免疫治疗方法中的一个重要分支。嵌合抗原受体是一种人工合成受体，它通常包含胞外抗原结合域、跨膜铰链区和胞内信号转导区。通过将识别肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigen,TAA)的抗体单链可变区(single-chainfragmentvariable，scFv)和胞内信号域“免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptortyrosine-basedactivationmotifs，ITAM)s在体外进行基因重组。再通过病毒或其它载体系统将其导入T细胞中，这样经过基因改造的T细胞称之为CAR-T细胞。CAR-T细胞在体外经大规模扩增后，回输到患者体内，能够以非MHC限制性的模式表现强效的抗癌作用。CAR疗法在恶性血液肿瘤中已经取得了非常好的疗效，对复发难治性B细胞白血病的完全缓解率超过90％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合间皮素的单克隆抗体，其特征在于，/n所述单克隆抗体轻链可变区的LCDR1包含SEQ ID NO:1第188-193位氨基酸序列，轻链可变区LCDR2包含SEQ ID NO:1第211-213位氨基酸序列，轻链可变区LCDR3包含SEQ ID NO:1第250-262位氨基酸序列；/n所述单克隆抗体重链可变区的HCDR1包含SEQ ID NO:1第49-56位氨基酸序列、HCDR2包含SEQ ID NO:1第74-81位氨基酸序列和HCDR3包含SEQ ID NO:1第121-135位氨基酸序列；和/n所述单克隆抗体重链可变区在对应于SEQ ID NO:1第57-73位的氨基酸...

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合间皮素的单克隆抗体，其特征在于，
所述单克隆抗体轻链可变区的LCDR1包含SEQIDNO:1第188-193位氨基酸序列，轻链可变区LCDR2包含SEQIDNO:1第211-213位氨基酸序列，轻链可变区LCDR3包含SEQIDNO:1第250-262位氨基酸序列；
所述单克隆抗体重链可变区的HCDR1包含SEQIDNO:1第49-56位氨基酸序列、HCDR2包含SEQIDNO:1第74-81位氨基酸序列和HCDR3包含SEQIDNO:1第121-135位氨基酸序列；和
所述单克隆抗体重链可变区在对应于SEQIDNO:1第57-73位的氨基酸位置上存在一个或数个取代突变，且所述单克隆抗体与间皮素抗原的亲和力与SEQIDNO:1第23-272位所示的单链抗体的亲和力相比降低；优选地，所述单克隆抗体特异性结合间皮素结构域III。


2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述取代突变发生在对应于SEQIDNO:1第68位的氨基酸残基上，优选为该位置上的疏水性氨基酸L突变为碱性氨基酸；优选地，所述碱性氨基酸选自：赖氨酸、组氨酸和精氨酸，优选选自精氨酸。


3.如权利要求1-2中任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的轻链可变区如SEQIDNO:4第162-272位氨基酸序列所示；和/或，所述单克隆抗体的重链可变区如SEQIDNO:4第23-146位氨基酸序列所示。


4.如权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为单链抗体；优选地，所述单链抗体的重链可变区和轻链可变区由含有G和S的接头连接，优选的接头为(GGGGS)n，其中n为1-10的整数；更优选地，n＝3；
更优选地，所述单链抗体的氨基酸序列如SEQIDNO:4第23-272位所示。


5.多核苷酸序列，选自：
(1)编码权利要求1-4中任一项所述的单克隆抗体的多核苷酸序列；和
(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列；
优选地，所述编码序列如SEQIDNO:9第79-828位碱基序列所示。


6.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体从N端到C端依次含有任选的信号肽序列、权利要求4所述的单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内共刺激区和胞内信号域。


7.如权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于，
所述信号肽为CD8信号肽、CD28信号肽或CD4信号肽；优选地为CD8信号肽；优选地，所述CD8信号肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1第1-22位氨基酸残基所示；和/或
所述铰链区选自CD8的胞外铰链区、IgG1FcCH2CH3铰链区、IgD铰链区、CD28胞外铰链区、IgG4FcCH2CH3铰链区和CD4的胞外铰链区；优选为IgG4CH2CH3铰链区；优选地，所述IgG4CH2CH3铰链区的氨基酸序列如SEQIDNO:1第273-500位氨基酸残基所示；和/或
所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：金华君，王超，江芏青，黄晨，刘祥箴，何周，何江川，崔连振，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗集团有限公司，上海细胞治疗研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31