本发明专利技术提供了一种抗MG7‑Ag的单克隆抗体及其用途。所述单克隆抗体为抗MG7‑Ag的单克隆抗体MGd1‑Ab。本发明专利技术还提供了分泌所述抗MG7‑Ag的单克隆抗体MGd1‑Ab的杂交瘤细胞株。本发明专利技术还提供了包含所述抗MG7‑Ag的单克隆抗体MGd1‑Ab的试剂盒，以及所述试剂盒用于检测胃癌抗原MG7‑Ag的用途；和用于在临床组织样本中检测胃癌抗原MG7‑Ag表达水平的用途。本发明专利技术提供的抗MG7‑Ag的单克隆抗体质地均一、特异性强。本发明专利技术的检测试剂盒可根据用途进行灵敏度和检测范围调控，从而高度敏感地检测胃癌抗原MG7‑Ag表达水平。
【技术实现步骤摘要】
抗MG7-Ag的单克隆抗体及其用途
本专利技术属于免疫学领域，涉及抗MG7-Ag的单克隆抗体及其用途，更具体地涉及包含所述抗体的试剂盒在检测样品中MG7-Ag水平的用途，以及包含所述抗体的试剂盒在辅助诊断肿瘤、监测肿瘤和肿瘤患者预后判断中的用途。
技术介绍
肿瘤蛋白标识物是肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、蛋白或肽类激素等代谢产物的形式存在于病人肿瘤细胞组织内或宿主体液、排出物中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤蛋白标识物在临床上主要用于对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断、肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。近年来，新的肿瘤标记物不断发现、检查手段不断完善和改进，使得其灵敏性和准确性不断提高，为肿瘤患者的早期诊断和早期治疗提供更确切充足的依据。恶性肿瘤的发病率近年来在全球范围内继续呈上升之势。胃癌在全世界范围内是发病率最高的癌症之一，目前中国每年胃癌新发病例居全球首位，患病率和死亡率均是世界平均水平的2倍多，约每2～3分钟就有1名中国人死于胃癌。现在胃癌在中国的死亡率已经仅次于肺癌，是第二大癌症杀手。由于胃癌的发病大多较为隐匿，早期没有明显症状，病人就诊时往往已经到了晚期，并且许多在临床传统病理及TNM分期表现相近的病人，其预后也有较大的差异，反映出胃癌发生、发展的复杂性。目前尚缺乏能用于诊断或预后判断的理想胃癌肿瘤标志物。如几十年来作为消化道肿瘤的标志物癌胚抗原(CEA)在一些非肿瘤性疾病如胃炎、肝硬化、溃疡性结肠炎中也可有升高，其特异性并不理想。因此，寻找与胃癌发生、发展相关的肿瘤标志物和/或肿瘤抗原，对胃癌的临床诊断、监视病情发展及判断预后均有重要意义，同时对肿瘤发生的分子机制研究也有重要意义。MG7-Ag是通过将低分化胃癌细胞株作为免疫原成功制备的胃癌单克隆抗体所识别的抗原，研究表明：从正常胃粘膜到慢性胃炎再到上皮内瘤变的演变过程中，MG7-Ag的表达阳性率明显增加(P<0.001)。同时发现MG7-Ag的阳性表达与胃癌的侵润深度呈正相关(P<0.001)，进而对MG7-Ag进行生存分层分析发现它与临床晚期患者(III和IV期)的预后相关(P＝0.033)，与CEA、CA199、CA125和CA72-4等传统肿瘤抗原相比，MG7-Ag的阳性率明显较高(P<0.05)。以上研究表明MG7-Ag在癌前病变中已有显著的表达升高，说明它可能是胃癌发生过程的一个关键调控分子；MG7-Ag在胃癌诊断方面拥有更好的敏感性；另外MG7-Ag可能是判断临床晚期患者预后好坏的独立指标。上述研究表明MG7-Ag与细胞的增殖、转化、恶变密切相关，并且在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要的功能。然而，现有技术中用于检测MG7-Ag的定量方法主要有采用多克隆抗体的竞争性放射免疫分析方法(RIA)和双抗体夹心分析模式的酶联免疫吸附方法(ELISA)。ELISA方法灵敏度高，特异性强，标记试剂稳定，无RIA方法的放射污染和危害，因此用途广泛。但现有试剂盒大都受限于关键试剂如检测抗体不能自己生产，不仅价格昂贵，且质量和稳定性难以长期保障；有的试剂盒还受限于使用多克隆抗体，多抗供量有限且批间差异大，这样的试剂盒难以适应大批量长时期开展前瞻性临床研究的需要。基于此，当前迫切需要特异性强、敏感性高的抗MG7-Ag单克隆抗体，以便有助于胃癌的临床诊断、预后判断，并指导临床治疗。
技术实现思路
因此，为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种抗MG7-Ag单克隆抗体，该抗MG7-Ag单克隆抗体质地均一、稳定性好、可长期大批量生产；本专利技术还提供了一种操作简便、灵敏度高、成本低、可适用于大批量生产的抗MG7-Ag检测的试剂盒。此外，本专利技术的抗MG7-Ag单克隆抗体还可以用于免疫印迹法、免疫沉淀法、免疫组化法、酶联免疫吸附法或免疫化学发光法，以及用于制备治疗MG7-Ag阳性的肿瘤的药物。一方面，本专利技术提供了一种抗MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab，其中，所述单克隆抗体MGd1-Ab由保藏号为CCTCCNO:C2016130的杂交瘤细胞株MGd1分泌。另一方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株MGd1，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO:C2016130。其中，杂交瘤细胞株MGd1的保藏号为CCTCCNO:C2016130(保藏日期：2016年6月23日，保藏号为CCTCCNO:C201613，保藏地：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学第一附小对面)，武汉大学保藏中心邮编：430072)；根据本专利技术所述的抗MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab，其中所述单克隆抗体的亚型鉴定为IgG1。再一方面，本专利技术提供了一种用于检测样品中MG7-Ag的存在和/或其水平的装置，所述装置包括本专利技术所述的抗MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab。优选地，所述样品为受试个体的组织、血液或体液；优选地，所述体液为腹水；优选地，所述受试个体为恶性肿瘤病人或罹患恶性肿瘤的高危人群；更优选地，所述恶性肿瘤为胃癌、结肠癌或食道癌。优选地，所述装置为试剂盒；更优选地，所述装置为用于辅助诊断肿瘤、监测肿瘤和/或肿瘤患者预后判断的试剂盒。本专利技术提供了上述单克隆抗体MGd1-Ab在制备用于检测样品中MG7-Ag的存在和/或其水平的试剂或试剂盒中的用途。所述检测方法使用免疫方法；更优选地，所述免疫方法选自免疫印迹法、免疫沉淀法、免疫组化法、酶联免疫吸附法或免疫化学发光法等。再另一方面，本专利技术提供一种检测试剂，所述检测试剂含有本专利技术所述的单克隆抗体。所述检测试剂的制备方法可以是本领域技术人员熟知的任何方法，例如将本专利技术的单克隆抗体与适当的载体，如水、盐水、缓冲剂等混和。本专利技术的检测试剂可用于临床样本中MG7-Ag蛋白表达水平的检测，预测早期肿瘤的转移趋势及患者的预后；亦可用于早期肿瘤患者血清MG7-Ag蛋白表达的检测，同时可动态检测肿瘤进展过程中MG7-Ag蛋白水平的变化，给临床医生制定个体化的治疗方案提供参考依据。在本专利技术的一个实施方式中，申请人使用真核表达纯化的CEACAM5蛋白免疫Balb/c小鼠，获得分泌抗胃癌单克隆抗体的杂交瘤株MGd1-Ab。分别用胃癌组织/癌旁组织的免疫组化对比法或/和ELISA方法筛选阳性细胞克隆。本专利技术人经过多次试验，获得了多株阳性细胞克隆。对这些阳性克隆所分泌的单克隆抗体进行分析鉴定，发现CCTCCNO:C2016130其分泌的MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab具有较高的灵敏度和特异性，可识别胃癌抗原MG7-Ag蛋白并可用于并不限于免疫组织化学、免疫印迹、免疫沉淀、酶联免疫吸附实验和免疫化学发光等免疫学检测，可用于临床样本中MG7-Ag蛋白表达水平的检测。与现有技术相比，本专利技术的杂交瘤细胞系具有较强的分泌单克隆抗体的能力，能稳定、大量分泌本专利技术的单克隆抗体。本专利技术人发现，虽然现有技术已已证实MG7-Ag(本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab，其中，所述单克隆抗体MGd1-Ab由保藏号为CCTCCNO:C2016130的杂交瘤细胞株MGd1分泌。/n
【技术特征摘要】
1.一种抗MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab，其中，所述单克隆抗体MGd1-Ab由保藏号为CCTCCNO:C2016130的杂交瘤细胞株MGd1分泌。
2.一种杂交瘤细胞株MGd1，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO:C2016130。
3.一种用于检测样品中MG7-Ag的存在和/或其水平的装置，所述装置包括如权利要求1所述的抗MG7-Ag单克隆抗体MGd1-Ab。
4.如权利要求3所述的装置，其中所述样品为受试个体的组织、血液或体液；优选地，所述体液为腹水。
5.如权利要求4所述的装置，其中，所述受试个...
【专利技术属性】
技术研发人员：聂勇战，吴开春，樊代明，赵青川，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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