一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法技术

本发明专利技术公开了一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法，具体涉及小反刍兽疫病毒(PPRV)检测技术领域，具体方法如下：S1、获得山羊SLAM基因和氨基酸序列，设计特异性引物，通过RT‑PCR方法获得SLAM基因片段；S2、将扩增的SLAM基因片段克隆到PET SUMO载体中，构建阳性重组质粒PET SUMO‑SLAM；S3、将阳性重组质粒PET SUMO‑SLAM转化到感受态Rosetta细胞中；S4、将转化的细胞在LB培养基平板中培养；S5、将含有构建的质粒的新转化的大肠杆菌的单菌落在LB液体培养基中培养；S6、IPTG诱导融合蛋白的表达，然后通过SDS PAGE分析。本发明专利技术为PPRV抗原检测提供一种捕获蛋白，用于开发PPRV抗原检测试剂盒，从而用于检测PPRV病毒，使得检测方法具有更好的特异性和灵敏性。

Cloning and prokaryotic expression of goat slam gene

【技术实现步骤摘要】
一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法
本专利技术涉及PPRV病毒检测
，更具体地说，本专利技术涉及一种山羊、绵羊SLAM基因的克隆与原核表达方法。
技术介绍
小反刍兽疫(PestedesPetitsRuminant，PPR)是由PPR病毒(PPRV)引起的一种急性、热性和高度传染性的跨境动物疫病，临床上以发热、口腔炎、结膜炎、肠胃炎和肺炎为特征。PPRV为副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)的成员，其基因组是不分节段的单股负链RNA，长度约16KB，RNA链从3′至5′依次是N-P-M-F-H-L6个基因，在结构和遗传上，PPRV与牛和水牛的牛瘟病毒(RPV)、人类的麻疹病毒(MeV)、狗瘟热病毒和一些野生食肉动物以及水生哺乳动物的麻线病毒密切相关。虽然这种病毒的主要宿主是山羊和绵羊，但山羊似乎比绵羊更容易受到感染。据报道，牛，水牛，骆驼和猪也会发生亚临床感染，但在该病的传播方面不发挥任何作用。此外，PPRV对其他不寻常的宿主如骆驼、瞪羚、北山羊、大羚羊、鹿、羚羊、野山羊和猪的感染已经给本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法，其特征在于：具体方法如下：/nS1、通过GenBank获得山羊SLAM基因和氨基酸序列，根据编码细胞外结构域的SLAM基因片段设计特异性引物，并通过RT-PCR方法获得SLAM基因片段；/nS2、SDS-PAGE电泳检测PCR产物，将扩增的山羊SLAM基因片段克隆到PET SUMO载体中，并通过DNA测定序列，构建阳性重组质粒PET SUMO-SLAM；/nS3、将阳性重组质粒PET SUMO-SLAM转化到感受态Rosetta细胞中；/nS4、将转化的细胞在含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基平板中于37℃培养；/nS5、将含有构建的质粒的新转...

【技术特征摘要】
1.一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法，其特征在于：具体方法如下：
S1、通过GenBank获得山羊SLAM基因和氨基酸序列，根据编码细胞外结构域的SLAM基因片段设计特异性引物，并通过RT-PCR方法获得SLAM基因片段；
S2、SDS-PAGE电泳检测PCR产物，将扩增的山羊SLAM基因片段克隆到PETSUMO载体中，并通过DNA测定序列，构建阳性重组质粒PETSUMO-SLAM；
S3、将阳性重组质粒PETSUMO-SLAM转化到感受态Rosetta细胞中；
S4、将转化的细胞在含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基平板中于37℃培养；
S5、将含有构建的质粒的新转化的大肠杆菌的单菌落在含有50μg/mL卡那霉素的3mlLB液体培养基中培养，并在37℃温育直至600nm处的OD值达到0.6；
S6、IPTG诱导融合蛋白的表达，然后通过Ni亲和层析纯化得到SLAM重组蛋白，纯化后，用滴定法对包合蛋白进行复性，然后通过SDSPAGE分析。


2.根据权利要求1所述的一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法，其特征在于：在步骤S1中SLAM基因序列为：CTGACCAGCAGCACCAAAACCATTCGTGGTCAGCTGGGTAGCAGCGTTCTGCTGCCGCTGGCAAGCGAAGAAATTAGCCGTAGCATGAATAAAAGCATCCATATTCTGGTTACCATGGCAGAAAGTCCGCGTGATACCGTTAAAAAGAAAATTGTTAGCCTGGATCTGCGCAAAGGTGATAGTCCGCGTCTGGAAGATGGTTATGAATTTCATCTGGAAAATCTGAGCCTGCGCATTCTGAAAAGCCGTAAAGAAGATGAAGGCTGGTATTTCATTTCCCTGGAAGAAAATGTGTCCGTGCAGCATTTTAGCCTGCAGCTGAAACTGTATGAACAGGTTAGCACACCGCAGATTAAAGTTCTGAATAGCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彦敏，普拉贾帕蒂·米拉，窦永喜，朱学亮，张志东，赵帅阳，秦晓东，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62