植物根结线虫生防菌、其制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物根结线虫生防菌、其制剂及其应用。本发明专利技术研究筛选出淡紫紫孢菌CCTCC NO.M2016682对植物根结线虫具有强致病力，可作为植物根结线虫生防菌；并以其可制备出含有该淡紫紫孢菌、其分生孢子、其代谢产物或其固体发酵物的植物根结线虫生防制剂；将该植物根结线虫生防制剂以拌土的形式施入土壤中，可有效防治植物根结线虫；以淡紫紫孢菌还可以提取或制备高产量及质量的白灰制菌素。本发明专利技术生防菌及生物制剂的生产成本低，易于制备，且具有高效低毒、绿色环保、无污染、不易产生抗药性；可达到环保安全、低成本的高效防治植物根结线虫效果。

Biocontrol of plant root knot nematode, its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
植物根结线虫生防菌、其制剂及其应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种植物根结线虫生防菌、其制剂及其应用。
技术介绍
根结线虫属于侧尾腺纲、垫刃目、异皮总科、根结线虫科中的根结线虫属，是一类严重危害经济农作物并广泛分布于世界各地的重要的植物病原线虫；它可以侵染经济性的粮食作物、蔬菜以及观赏性的花卉树木，甚至杂草都可以侵染。在我国，随着农业经济的高速发展、产业结构的不断改革调整、种植制度的不断合理优化以及温室和大棚栽培面积的迅速发展，加上农民的管理意识淡薄，致使根结线虫病害发病程度逐年呈上升趋势，如我国南方根结线虫造成寄主作物常年减产15～20%，严重时达到70%以上；根结线虫还可诱发寄主产生其它的病害如根腐、青枯病、枯萎病和烟草黑胫病。由根结线虫引起的病害已严重制约着我国保护地作物的发展和稳产，影响着全国经济持续快速健康的发展。目前，对线虫病害的防治方法主要采用化学农药防治、农业轮作防治以及利用抗病品种等多种方法来防治和控制根结线虫病害。化学防治具有高效、速效的优势，是采用控制植物根结线虫病的常用防治方法。但是，许多化学农药如二溴氯丙烷（DBCP）和甲基溴等，容易诱导非靶标生物产生抗性、潜在毒性，具有高毒性，残留量高，对食品安全、环境污染、臭氧层有较大的隐患。农业防治是通过轮作的方法改良土壤环境以减少虫源、靠增施有机肥料，提高土壤肥力、靠通过施加碱性肥料，调节土壤pH值等方法防治。但受限于有限的种植面积和温室建设的高成本投资，农户受环境和利益的影响，很难接受土地空闲，或者与经济价值和收益不高的作物轮作，因此靠农业防治根结线虫病害尚未很好地实施。抗性品种的栽种理论上曾一度被认为是防治根结线虫病害比较有效而且广泛使用的防治措施，然而实际的农业生产中有效的抗性品种资源有限。而生物农药以其高效、低毒、低残留、无污染、不易产生抗药性和原料易得等特性被人们认为是未来化学农药的理想替代药剂。因此，利用生物农药防治根结线虫也逐渐引起人们的重视。因此，当前亟待在农业生产中对根结线虫提供一种环保安全、低成本的防治制剂及方法，并达到绿色有效的防治根结线虫的目的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种生防菌株Pt362在防治植物根结线虫病害中的应用，以达到环保安全、低成本的高效防治效果。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术思路：已有的研究结果表明，许多土壤、叶围、根围及内生微生物甚至包括一些植物病原物对根结线虫均有一定程度的抑制作用。用生物防治方法防治线虫病害，不仅可以防治线虫病害和增加作物产量，而且还能克服施用化学农药带来的农药残留、人畜健康和生态失衡等一系列环境灾害。专利技术人在长期的实践研究中，发现并筛选出了一株对植物根结线虫具有强致病力的植物根结线虫生防菌——淡紫紫孢菌菌株CCTCCNO.M2016682。研究制备出植物根结线虫生防制剂，为含淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682、其分生孢子、其代谢产物、其固体发酵物中的至少一种。上述固体发酵物的优选制备方法为：将淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682孢子悬浮液浇灌由质量比为1：0.8～1.2的土和沙组成的土壤基质，即得。优选的，所述淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682的孢子在土壤介质中的终浓度控制为1×105～107个/g。设计一种植物根结线虫的防治方法，将所述的植物根结线虫生防制剂以拌土的形式施入土壤中。发展研究出一种白灰制菌素的提取方法，包括如下步骤：（1）取淡紫紫孢菌株CCTCCNO.M2016682接种于PDA平板上，于28℃下黑暗中培养9天，用无菌水清洗孢子制成孢子悬浮液；（2）取上述孢子悬浮液接种于培养基中，28℃下、200rpm/min培养15天得发酵液；（3）再向发酵液中加入1mol/LHCl溶液，调节pH值到3.0，然后加入同体积的乙酸乙酯进行萃取；（4）萃取液用5%NaHCO3溶液洗涤两次，然后真空旋转干燥，粗提物即为白灰制菌素。将淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682在防治植物根结线虫中应用。与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果在于：（1）本专利技术研究发现淡紫紫孢菌菌株Pt362对植物根结线虫具备很强的致病力或杀灭作用，可用于制备番茄等的植物根结线虫的生物防治的生防菌制剂，与目前的根结线虫的防治化学药剂相比，具有高效、低毒、低残留、绿色环保、无污染、不易产生抗药性的良好特性。（2）本专利技术筛选出的根结线虫生防菌—淡紫紫孢菌菌株Pt362繁殖力强，培养速度快，产孢量大，孢子萌发率高，生产成本低，易于制备。（3）本专利技术筛选出的淡紫紫孢菌菌株Pt362的孢子悬浮液和代谢产物均对植物根结线虫虫卵和幼虫均具有很强的致病力或杀灭效果。（4）本专利技术筛选出的淡紫紫孢菌菌株Pt362代谢产生的白灰制菌素的浓度高、量大，为开发高效生防制剂提供基础。附图说明图1为淡紫紫孢菌菌株Pt362寄生根结线虫卵对比图；其中，a为未侵染的卵，b为菌丝侵染的卵；图2为淡紫紫孢菌菌株Pt362在土壤中的存活动态图；图3为淡紫紫孢菌菌株及突变菌株对比图；图4为淡紫紫孢菌菌株Pt362白灰制菌素组分图。具体实施方式下面结合附图和实施例来说明本专利技术的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本专利技术，并不以任何方式限制本专利技术的范围。在以下实施例中所涉及的仪器设备，如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的生化试剂，如无特别说明，均为市售常规试剂；所涉及的检测方法或试验方法，如无特别说明，均为常规方法。实施例1：淡紫紫孢菌菌株Pt362的培养、驯化淡紫紫孢菌原始菌株Pl36-1在1991年由王明祖在湖北省从根结线虫体内分离得到，保存于华中农业大学植物病理线虫研究室。1991年在植物病理学报发表文章为《根结线虫卵寄生真菌的研究初报》。Pt362是通过根癌农杆菌介导的T-DNA插入遗传转化而获得的突变菌株，于2016年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO：M2016682（参见专利文献CN106967613A）。实施例2：淡紫紫孢菌菌株Pt362对根结线虫卵寄生及幼虫致死率测定将根结线虫卵从番茄发病植株根部分离，用1%次氯酸钠进行表面消毒3min，水洗3次，将表面消毒的卵置于已在水琼脂（WA）平板上生长2天的菌丝上方，每皿50个卵囊，封口于28℃温箱中暗培养9天，于显微镜下观察卵被寄生情况。卵粒的寄生观察采用乳酸甘油液处理，处理约2min后被淡紫紫孢菌侵染的卵边缘透明，未被侵染的仍为深色，重复四次，只接卵的为空白对照。淡紫紫孢菌菌株Pt362寄生根结线虫卵如图1所示。具体检测结果见表1。表1淡紫紫孢菌对根结线虫卵寄生率变化。淡紫紫孢菌株对根结线虫卵寄生率测定表明：菌株Pt362对番茄根结线虫寄生率达98.3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物根结线虫生防菌，为淡紫紫孢菌CCTCC NO. M2016682。/n

【技术特征摘要】
1.一种植物根结线虫生防菌，为淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682。


2.一种植物根结线虫生防制剂，含淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682、其分生孢子、其代谢产物、其固体发酵物中的至少一种。


3.根据权利要求2所述的植物根结线虫生防制剂，其特征在于，所述固体发酵物的制备方法为：将淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682孢子悬浮液浇灌由质量比为1：0.8～1.2的土和沙组成的土壤基质，即得。


4.根据权利要求3所述的植物根结线虫生防制剂，其特征在于，所述淡紫紫孢菌CCTCCNO.M2016682的孢子在土壤介质中的终浓度控制为1×105～107个/g。


5.一种植物根结线虫的防治方...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜俊，李艳，杨凡，赵红星，王勇，贺建峰，
申请(专利权)人：驻马店市农业科学院，河南省农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41