一种海洋发光细菌冻干制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种海洋发光细菌冻干制剂及其制备方法，属于微生物冻干制剂范畴。该冻干制剂包含菌泥和冻干保护剂，且经菌液制备、菌泥制备、混合、预冻和冻干等步骤制备而成。使用该保护剂制得的海洋发光细菌冻干粉中，于2~8℃下保存18个月后，菌种恢复发光率及菌种发光性能均维持稳定，能极大提高海洋发光细菌菌种的保存效果和质量，便于环境毒性检测中对菌种的使用。

A lyophilized preparation of Marine luminous bacteria and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种海洋发光细菌冻干制剂及其制备方法
本专利技术设计一种专门针对海洋发光细菌冻干制剂及其制备方法，属于微生物冻干制剂范畴。
技术介绍
随着我国工农业的高速发展，各种生态环境污染问题严峻，对生态环境和人体健康带来很大威胁。目前，生物毒性检测实验主要有鱼类急、慢性、蚤类毒性、藻类毒性及微生物毒性实验（如发光细菌对污染物毒性的发光抑制）等。而基于发光细菌为指示物的生物毒性检测法已广泛应用于农药残留、重金属毒性与生物毒素等方面的检测。发光细菌在外界毒物干扰下发光生理过程会受到干扰，从而引起发光强度的变化，且发光值降低程度与外界毒性物质的在一定程度里面呈比例关系，从而通过发光亮度变化反应环境毒性强弱。发光细菌法因其检测速度快、简便、灵敏程可靠、成本低等特点而备受关注。发光细菌用于环境毒性检测过程中，菌种是重要的影响因素。目前，市场上常用的发光细菌菌种包括两类海水细菌（明亮发光杆菌和费氏弧菌）和一类淡水细菌（青海弧菌）。其中以明亮发光杆菌在《水质急性毒性的测定发光细菌法》（GB/T15441-1995）中所使用；费氏弧菌在欧盟的标准中所使用。...

【技术保护点】
1.一种海洋发光细菌冻干制剂，其特征在于：包括以下步骤：/n（1）菌液制备：将菌种接种于斜面，20℃恒温培养24~48h，反复活化2~3次；取活化好的纯菌种以1%接种量接种于100mL液体培养基中扩大培养，20℃恒温，140~160rpm/min震荡10~17小时，通过OD

【技术特征摘要】
1.一种海洋发光细菌冻干制剂，其特征在于：包括以下步骤：
（1）菌液制备：将菌种接种于斜面，20℃恒温培养24~48h，反复活化2~3次；取活化好的纯菌种以1%接种量接种于100mL液体培养基中扩大培养，20℃恒温，140~160rpm/min震荡10~17小时，通过OD600nm判断菌液浓度，控制菌液浓度初始OD600为0.8~1.0，获得的新鲜菌液备用；
（2）菌泥制备：分装菌液，离心，弃去上清液后获得菌泥；
（3）冻干保护剂的制备：冻干保护剂由以下原料组成：脱脂乳的含量为15wt%，蔗糖的含量为6wt%，壳聚糖的含量为0.6wt%，谷氨酸钠的含量为1wt%，四氢嘧啶的含量为0.4wt%，余量为蒸馏水；
其制备方法包括以下步骤：
a配液：以蒸馏水分别溶解脱脂乳、蔗糖、壳聚糖、谷氨酸钠和四氢嘧啶，配制成各原料的母液，且母液浓度配制成5倍于配方量的浓度；
b灭菌：脱脂乳母液、蔗糖母液在115℃下高温高压灭菌15min，快速冷却后，4℃冷藏待用；壳聚糖母液、四氢嘧啶母液以0.22μm无菌微孔过滤器进行除菌；谷氨酸钠母液于121℃下高温高压灭菌21min，快速冷却后，4℃冷藏待用；
c混...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨毅红，何怀文，
申请(专利权)人：电子科技大学中山学院，
类型：发明
国别省市：广东;44