一种杀线虫真菌的复壮方法技术

本发明专利技术公开了一种杀线虫真菌的复壮方法，将退化的杀线虫真菌培养和线虫放入培养皿中进行培养。其按照以下步骤进行，步骤一、对退化的杀线虫真菌进行培养；步骤二、培养线虫；步骤三、收取线虫；步骤四、对线虫进行处理和清洗；步骤五、将培养好的退化杀线虫真菌培养皿倒置，将处理好的线虫入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤六、在步骤五后进行培养得到复壮的杀线虫真菌。本发明专利技术优点：与纯种分离法、宿主体内复壮法、遗传育种法等常规菌种复壮方法相比，本发明专利技术方法简单快速，成本低，可操作性强，复壮效果强。

A rejuvenation method of Nematicidal fungi

【技术实现步骤摘要】
一种杀线虫真菌的复壮方法
本专利技术涉及一种杀线虫真菌的复壮方法，属于真菌复壮

技术介绍
真菌有着超过10亿年的进化历史，其种类超过150万种，其中约十万物种已知。真菌在自然界和经济中发挥重要作用。能够作为食物、药物和酶的重要来源，同时还可以引起人类疾病，威胁农业和损害建筑物，也可以有效地分解死体中的有机物质和循环营养物质，作为共生菌增强植物的生长或作为病原体攻击其他生物体。真菌是存在各个生态位的异养真核生物。从生物技术的重要性和对人类健康威胁等方面，真菌对整个人类社会都是非常重要的。线虫动物门是动物界中最大的门之一，为假体腔动物，有超过28,000个已被记录的物种，尚有大量种尚未命名。绝大多数体小呈圆柱形，又称圆虫(roun天worms)。它们在淡水、海水、陆地上随处可见，不论是个体数或物种数都往往超越其他动物，并在极端的环境如南极和海沟都可发现。此外，有许多种的线虫是寄生性的(超过16,000种)，包括许多植物及人类在内的动物的病原体。被寄生者生命力与寿命都会下降。营动物寄生者几乎见于寄主所有器官，惟最常寄生于消化、循环与呼吸系统。部分种类以钩虫、后圆线虫、蛲虫、粪类圆线虫、鞭虫与小线虫等俗称为人所熟知。线虫且为丝虫病、蛔虫病与旋毛虫病等种种疾病的根源。由于化学农药对人类和其他非目标生物的健康产生危害，因此开发更安全、环境可行的杀线虫替代品已成为当务之急。在这方面，生物防治已成为农业和林业的一个迫切需要。线虫的真菌拮抗者包括捕获网真菌、内寄生真菌、卵寄生真菌、孢囊寄生真菌和产生线虫毒性代谢物的真菌。一些食线虫真菌产生不同的结构来捕获线虫，另一些食线虫真菌通过抗生素和蛋白酶的组合简单地毒杀线虫。木霉属定殖卵和第二阶段幼虫，有时也入侵卵块，菌种经常会出现衰退的问题，因此对衰退菌种进行复壮成为迫切需要研究的课题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种复壮方法简单快速，复壮效果强的杀线虫真菌的复壮方法，本专利技术通过下述方案实现：一种杀线虫真菌的复壮方法，将退化的杀线虫真菌培养和线虫放入培养皿中进行培养。一种杀线虫真菌的复壮方法，其按照以下步骤进行，步骤一、对退化的杀线虫真菌进行培养；步骤二、用培养养线虫；步骤三、收取线虫；步骤四、对线虫进行处理和清洗；步骤五、将培养好的退化杀线虫真菌培养皿倒置，将处理好的线虫入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤六、在步骤五后进行培养得到复壮的杀线虫真菌。一种杀线虫真菌的复壮方法，其按照以下步骤进行，步骤一、将退化的杀线虫真菌培养；步骤二、用多毛孢培养线虫；步骤三、用漏斗漏线虫，收取线虫；步骤四、将线虫用硫酸链霉素和青霉素钠处理；步骤五、用PBS清洗抗生素处理过的线虫；步骤六、调整线虫的浓度；步骤七、将培养好的退化真菌培养皿倒置，将处理好的线虫放入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤八、再将退化的杀线虫真菌进行培养，即可得到复壮的真菌。一种杀线虫真菌的复壮方法，其按照以下步骤进行，步骤一、将退化的杀线虫真菌培养3-7天；步骤二、用多毛孢培养线虫7-10天；步骤三、用漏斗漏线虫3-6h，收取线虫；步骤四、线虫用硫酸链霉素和青霉素钠4℃处理24h；步骤五、PBS清洗步骤四处理过的线虫；步骤六、调整线虫的浓度；步骤七、将培养好的退化真菌培养皿倒置，将处理好的线虫放入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤八、再将退化的杀线虫真菌培养3-7天，即可得到复壮的真菌。所述步骤四中采用的硫酸链霉素和青霉素钠的浓度均为0.2-0.4μg/mL。所述步骤五中用PBS清洗步骤四处理过的线虫3次。所述步骤六中线虫的浓度调整为103-105/mL。所述步骤七中放入倒置的培养皿中的线虫为200μL。本专利技术的有益效果为：复壮方法简单快速，复壮效果强。附图说明图1为实验组和对照组在第0天的照片。图2为实验组和对照组在第3天的照片。图3为实验组和对照组在第6天的照片。图4为实验组和对照组在第9天的照片。具体实施方式下面对本专利技术进一步说明，但本专利技术保护范围不局限所述内容。为了清楚，不描述实际实施例的全部特征，在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本专利技术由于不必要的细节而混乱，应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标，例如按照有关系统或有关商业的限制，由一个实施例改变为另一个实施例，另外，应当认为这种开发工作可能是复杂和耗费时间的，但是对于本领域技术人员来说仅仅是常规工作。实施例1：一种杀线虫真菌的复壮方法，其按照以下步骤进行，步骤一、将退化的杀线虫真菌培养3天；步骤二、用多毛孢培养线虫7天；步骤三、用漏斗漏线虫3h，收取线虫；步骤四、线虫用浓度为0.2μg/mL硫酸链霉素和青霉素钠4℃处理24h；步骤五、PBS清洗3次步骤四处理过的线虫；步骤六、线虫调整浓度为103/mL；步骤七、将培养好的退化真菌培养皿倒置，将处理好的线虫吸取200μL放入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤八、再将退化的杀线虫真菌培养3天，即可得到复壮的真菌。实施例2：一种杀线虫真菌的复壮方法，其按照以下步骤进行，步骤一、将退化的杀线虫真菌培养7天；步骤二、用多毛孢培养线虫10天；步骤三、用漏斗漏线虫6h，收取线虫；步骤四、线虫用浓度为0.4μg/mL硫酸链霉素和青霉素钠4℃处理24h；步骤五、PBS清洗3次步骤四处理过的线虫；步骤六、线虫调整浓度为105/mL；步骤七、将培养好的退化真菌培养皿倒置，将处理好的线虫吸取200μL放入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤八、再将退化的杀线虫真菌培养7天，即可得到复壮的真菌。实施例3：一种杀线虫真菌的复壮方法，其按照以下步骤进行，步骤一、将退化的杀线虫真菌培养5天；步骤二、用多毛孢培养线虫8天；步骤三、用漏斗漏线虫4h，收取线虫；步骤四、线虫用浓度为0.3μg/mL硫酸链霉素和青霉素钠4℃处理24h；步骤五、PBS清洗3次步骤四处理过的线虫；步骤六、线虫调整浓度为104/mL；步骤七、将培养好的退化真菌培养皿倒置，将处理好的线虫吸取200μL放入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；步骤八、再将退化的杀线虫真菌培养3-7天，即可得到复壮的真菌。对比实验：实验培制备PDA培养基，取200g/L土豆浸出液，20g/L葡萄糖，2％琼脂条的比例，加去离子水至1000mL并调节pH至7，在1×105Pa条件下灭菌15—20min，无菌状态下将约20mL培养基倒人灭菌培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杀线虫真菌的复壮方法，其特征在于：将退化的杀线虫真菌培养和线虫放入培养皿中进行培养。/n

【技术特征摘要】
1.一种杀线虫真菌的复壮方法，其特征在于：将退化的杀线虫真菌培养和线虫放入培养皿中进行培养。


2.根据权利要求1所述的一种杀线虫真菌的复壮方法，其特征在于：其按照以下步骤进行，
步骤一、对退化的杀线虫真菌进行培养；
步骤二、用培养养线虫；
步骤三、收取线虫；
步骤四、对线虫进行处理和清洗；
步骤五、将培养好的退化杀线虫真菌培养皿倒置，将处理好的线虫入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；
步骤六、在步骤五后进行培养得到复壮的杀线虫真菌。


3.根据权利要求2所述的一种杀线虫真菌的复壮方法，其特征在于：其按照以下步骤进行，
步骤一、将退化的杀线虫真菌培养；
步骤二、用多毛孢培养线虫；
步骤三、用漏斗漏线虫，收取线虫；
步骤四、将线虫用硫酸链霉素和青霉素钠处理；
步骤五、用PBS清洗抗生素处理过的线虫；
步骤六、调整线虫的浓度；
步骤七、将培养好的退化真菌培养皿倒置，将处理好的线虫放入倒置的培养皿，用封口膜封住培养皿；
步骤八、再将退化的杀线虫真菌进行培养，即可得到复壮的真菌。


4.根据权利要求3所述的一种杀...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞珍，贺然，崔夏，
申请(专利权)人：北京市植物园，
类型：发明
国别省市：北京;11