一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒及其应用。本发明专利技术的两种试剂盒采用的是“双抗体夹心一步法”的反应模式，可以同时对病人血清及鼻分泌物样本中的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶分子进行非常专一的定量及定性检测。它既有效地利用了化学发光技术原理，又在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物，提高了检测的灵敏度，同时也具有稳定性高、特异性好、准确性佳、操作简单及无放射性污染的优点，可为支气管哮喘、鼻窦炎、鼻炎等炎症疾病的临床诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。

A test kit for human eosinophil cationic protein and myeloperoxidase and its application

【技术实现步骤摘要】
一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒及其应用。
技术介绍
变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)和慢性鼻窦炎(chronicrhinosinusitis,CRS)同为耳鼻喉头颈外科最常见的疾病。其诊断常常依靠患者的症状和体征。鼻分泌物细胞学检查作为重要的辅助诊断方法，有助于鼻炎患者的精确诊断和个体化治疗，因为操作繁琐且缺乏统一标准，在临床上虽有开展但应用并不广泛。在我们此前鼻分泌物细胞学研究中，可以确定嗜酸性粒细胞和中性粒细胞在鼻分泌物中占绝对多数(>98％)，AR患者鼻分泌物多以嗜酸性粒细胞为主要特征表现，CRS患者鼻分泌物则以中性粒细胞为主。由于鼻细胞学检查的取样过程有一定的不稳定性，且可受到患者就诊时状况的影响和制约(如分泌物量过少、患者不配合等)，导致结果的准确性受到影响。相比之下鼻分泌物的获取更为简便稳定。嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)是一种碱性蛋白质，是反映嗜酸性粒细胞活化量的重要指标，是过敏性患者临床检验的标志之一。髓过氧化物酶(MPO)是含血红素辅基的血红素蛋白酶，也是中性粒细胞中储存最丰富的促炎酶，能反映中性粒细胞的活化情况。目前在临床上没有对鼻腔炎症性质进行判断的产品，没有竞品，甚至是没有产品。医生对鼻腔炎症的判断及治疗的调整，完全依靠经验进行。ECP及MPO在临床上具有广泛而重要的应用价值；对鼻腔局部炎症进行精确判断，从而指导鼻炎的精准治疗，并对治疗效果进行客观评价。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，目的在于提供一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒及其应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案为：一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒，包括以下两种类型：A)人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的化学发光免疫检测试剂盒(CLIA)和化学显色免疫检测试剂盒(ELISA)，其组分包括：①人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶标准品；②包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的载体；③标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体；③中所述标记抗体与②中所述包被抗体为配对抗体，分别与人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶形成双抗-夹心结构；人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白配对抗体和人髓过氧化物酶配对抗体之间无交叉反应；④用于显色的底物；B)人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的免疫层析检测试剂盒(胶体金)，包括：①粘贴在底板一端的上样垫；②与上样垫紧密压接的含有标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的胶体金垫；③与胶体金垫一端紧密压接的硝酸纤维素NC膜，硝酸纤维素NC膜上包被有相互分离的检测线T和质控线C，所述检测线T上包被有与②所述标记抗体配对的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体，所述质控线C上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测线T上的包被抗体和②中所述标记抗体为配对抗体，分别与人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶形成双抗-夹心结构；人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白配对抗体和人髓过氧化物酶配对抗体之间无交叉反应④与硝酸纤维素NC膜紧密压接的吸样垫。上述方案中，A)中所述包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的载体的制备方法为：以碳酸盐缓冲液为溶剂，将人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体与溶剂混合均匀后，负载于载体上，将载体清洗干净后，采用封闭液封闭载体，干燥后，得到包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的载体。上述方案中，所述载体为微孔板、磁性颗粒、塑料管或塑料珠。上述方案中，A)中所述用于标记的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。上述方案中，A)中所述化学发光免疫检测试剂盒中的显色底物为鲁米诺、异鲁米诺、(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2’-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3’-磷酰氧基)苯基-1、2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star；所述化学显色免疫检测试剂盒中显色底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、或二氨基联苯胺。上述方案中，B)中所述胶体金垫的制备过程为：以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，在胶体金溶液中加入标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体，室温搅拌2小时，加入终浓度为1％牛血清白蛋白，1％聚乙二醇20000封闭20min，离心，弃上清，用胶体金工作液复溶，将溶液均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上制成胶体金垫。上述嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒在同步检测嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶产品中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术的两种试剂盒采用的是“双抗体夹心一步法”的反应模式，可以同时对病人血清及鼻分泌物样本中的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶分子进行非常专一的定量及定性检测。人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的化学发光免疫检测试剂盒(CLIA)和化学显色免疫检测试剂盒(ELISA)既有效地利用了化学发光技术原理，又在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物，提高了检测的灵敏度，同时也具有稳定性高、特异性好、准确性佳、操作简单及无放射性污染的优点。人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的免疫层析检测试剂盒(胶体金)测定结果准确、稳定和可靠；特别适用于基层和农村广大人民群众的健康需求，可为支气管哮喘、鼻窦炎、鼻炎等炎症疾病的临床诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。附图说明图1为实施例2所述人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的免疫层析检测试剂盒(胶体金)的检测结果示例图。图2为实施例3所制备的试剂盒中标准品线性图。图3为本专利技术的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的化学发光免疫检测试剂盒(CLIA)和美国ThermoFisherScientific公司ECP免疫荧光测定试剂盒检测结果相关性结果，结果显示，检测30例样本中ECP的含量，结果相关性达到r＝0.9757(P<0.0001)。具体实施方式为了更好地理解本专利技术，下面结合实施例进一步阐明本专利技术的内容，但本专利技术的内容不仅仅局限于下面的实施例。实施例1一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶化学发光免疫检测试剂盒(CLIA)和化学显色免疫检测试剂盒(ELISA)，包括以下组份：1)人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶蛋白标准品；2)包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白的单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板；3)辣根过氧化物酶标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和髓过氧化物酶的单克隆抗体；4)上述酶所作用的化学发光底物AMPPD；其中：<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒，其特征在于，包括以下两种类型：/nA）人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的化学发光免疫检测试剂盒（CLIA）和化学显色免疫检测试剂盒（ELISA），其组分包括：/n①人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶标准品；/n②包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的载体；/n③标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体；③中所述标记抗体与②中所述包被抗体为配对抗体，分别与人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶形成双抗-夹心结构；人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白配对抗体和人髓过氧化物酶配对抗体之间无交叉反应；/n④用于显色的底物；/nB）人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的免疫层析检测试剂盒（胶体金），包括：/n①粘贴在底板一端的上样垫；/n②与上样垫紧密压接的含有标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的胶体金垫；/n③与胶体金垫一端紧密压接的硝酸纤维素NC膜，硝酸纤维素NC 膜上包被有相互分离的检测线T和质控线C，所述检测线T上包被有与②所述标记抗体配对的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体，所述质控线C上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测线T上的包被抗体和②中所述标记抗体为配对抗体，分别与人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶形成双抗-夹心结构；人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白配对抗体和人髓过氧化物酶配对抗体之间无交叉反应/n④与硝酸纤维素NC膜紧密压接的吸样垫。/n...

【技术特征摘要】
1.一种人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒，其特征在于，包括以下两种类型：
A）人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的化学发光免疫检测试剂盒（CLIA）和化学显色免疫检测试剂盒（ELISA），其组分包括：
①人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶标准品；
②包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的载体；
③标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体；③中所述标记抗体与②中所述包被抗体为配对抗体，分别与人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶形成双抗-夹心结构；人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白配对抗体和人髓过氧化物酶配对抗体之间无交叉反应；
④用于显色的底物；
B）人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶的免疫层析检测试剂盒（胶体金），包括：
①粘贴在底板一端的上样垫；
②与上样垫紧密压接的含有标记的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的胶体金垫；
③与胶体金垫一端紧密压接的硝酸纤维素NC膜，硝酸纤维素NC膜上包被有相互分离的检测线T和质控线C，所述检测线T上包被有与②所述标记抗体配对的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体，所述质控线C上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测线T上的包被抗体和②中所述标记抗体为配对抗体，分别与人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和人髓过氧化物酶形成双抗-夹心结构；人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白配对抗体和人髓过氧化物酶配对抗体之间无交叉反应
④与硝酸纤维素NC膜紧密压接的吸样垫。


2.根据权利要求1所述的人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶检测试剂盒，其特征在于，A）中所述包被有人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白单克隆抗体和人髓过氧化物酶单克隆抗体的载体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷丽，
申请(专利权)人：殷丽，
类型：发明
国别省市：湖北;42