【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】评估细胞表面糖基化的方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年4月14日提交的标题为“评估细胞表面糖基化的方法(METHODSFORASSESSINGCELLSURFACEGLYCOSYLATION)”的美国临时专利申请62/485,897和2017年6月5日提交的标题为“评估细胞表面糖基化的方法(METHODSFORASSESSINGCELLSURFACEGLYCOSYLATION)”的美国临时申请号62/515,515的优先权权益，将每个美国临时专利申请的内容通过引用以其整体并入。通过引用并入序列表本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以2018年4月13日创建的名为735042008540SeqList.TXT的文件提供，其大小为37,188字节。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
本文提供了通过评估释放的表面聚糖的样品并确定样品中聚糖的存在、不存在或水平来评估细胞表面聚糖例如N-聚糖的方法。还提供了通过评估细胞组合物的细胞表面聚糖谱并将所述谱与参考样品进行比较来测定和/或评价所述细胞组合...
【技术保护点】
1.一种评估细胞表面聚糖的方法，所述方法包括：/n(a)将包含多种细胞的测试组合物在从所述测试组合物中的细胞表面释放一种或多种聚糖的条件下孵育，其中产生了包含一种或多种细胞表面聚糖的样品；并且/n(b)确定所述样品中聚糖的存在、不存在、存在的聚糖的身份和/或水平，从而评估所述样品的细胞表面聚糖谱。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170414 US 62/485,897;20170605 US 62/515,5151.一种评估细胞表面聚糖的方法，所述方法包括：
(a)将包含多种细胞的测试组合物在从所述测试组合物中的细胞表面释放一种或多种聚糖的条件下孵育，其中产生了包含一种或多种细胞表面聚糖的样品；并且
(b)确定所述样品中聚糖的存在、不存在、存在的聚糖的身份和/或水平，从而评估所述样品的细胞表面聚糖谱。
2.一种评估细胞表面聚糖的方法，所述方法包括确定样品中聚糖的存在、不存在、存在的聚糖的身份和/或水平，从而评估所述样品的细胞表面聚糖谱，其中所述样品包含在释放一种或多种聚糖的条件下孵育包含多种细胞的测试组合物之后从所述测试组合物中存在的细胞表面释放的所述一种或多种聚糖。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述聚糖是N-聚糖。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物中的细胞包含整个或完整细胞。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述细胞是活细胞。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中：
在所述孵育之前不对所述测试细胞组合物进行均质化或声处理；和/或
在所述孵育之前不将所述测试细胞组合物与蛋白酶一起孵育，任选地其中所述蛋白酶是胰蛋白酶；和/或
在所述孵育之前或期间不将在所述测试细胞组合物中的细胞与提取一种或多种细胞表面蛋白或膜蛋白的药剂接触，任选地其中所述药剂是洗涤剂或蛋白酶，任选胰蛋白酶；和/或
在所述孵育期间少于10％的所述细胞被裂解和/或破裂。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物包含不超过5x106个细胞。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物包含在1x106个与5x106个之间的细胞，包含端值。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物具有不超过1x108个细胞/mL的浓度。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物具有以下的浓度：在1x105个细胞/mL与1x108个细胞/mL之间，包含端值；在1x106个细胞/mL与5x107个细胞/mL之间，包含端值；或在5x106个细胞/mL与2.5x107个细胞/mL之间，包含端值。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述孵育是在N-糖苷酶的存在下进行。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述N-糖苷酶是肽N-糖苷酶(PNGase)F。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述PNGaseF是重组的。
14.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述一种或多种聚糖是一种或多种N-聚糖，并且其中所述方法包括：
(i)将来自所述测试组合物的1x106个与5x106个之间的细胞在从所述测试组合物的所述细胞表面释放所述一种或多种N-聚糖的条件下与重组PNGaseF一起孵育；
(ii)将所述一种或多种N-聚糖用可检测标记、任选地荧光标记进行标记；并且
(iii)确定经标记的N-聚糖的存在、不存在或水平，从而评估所述样品的细胞表面聚糖谱。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述测试细胞组合物包含约1x106个至2.5x106个细胞。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的方法，其中所述测试细胞组合物具有在1x106个细胞/ml与5x107个细胞/ml之间的浓度。
17.根据权利要求12-16中任一项所述的方法，其中所述PNGaseF包含脑膜炎脓毒性黄杆菌(Flavobacteriummeningosepticum)的PGNaseF或其具有酶促活性的部分或突变体。
18.根据权利要求12-17中任一项所述的方法，其中所述PNGaseF包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或其具有酶促活性的部分或突变体，或展现与SEQIDNO:1至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列或是其具有酶促活性的部分。
19.根据权利要求12-18中任一项所述的方法，其中所述PNGaseF包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求12-19中任一项所述的方法，其中所述PNGaseF包含标签，任选地亲和标签。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述标签是聚组氨酸(His标签)。
22.根据权利要求12-21中任一项所述的方法，其中：
所述PNGaseF是大于或大于约90％、大于或大于约92％、大于或大于约95％、或大于或大于约98％纯的；和/或
所述PNGaseF包含少于或少于约10％、少于或少于约8％、少于或少于约5％、少于或少于约2％的非PNGaseF蛋白质污染物；和/或
所述PNGaseF是大于或大于约90％、大于或大于约92％、大于或大于约95％、或大于或大于约98％同质的，任选地如通过SDS-PAGE和蛋白质染色、任选地考马斯蓝染色所确定。
23.根据权利要求11-22中任一项所述的方法，其中所述N-糖苷酶、任选地PNGaseF是处于在35℃与39℃之间、任选地约37℃的温度下孵育不超过12小时之后从一种或多种天然或非变性糖蛋白和/或从所述细胞组合物的所述细胞释放所述一种或多种N-聚糖的酶促有效量。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述酶促有效量是在如下的温度下孵育不超过15分钟至3小时或30分钟至2小时之后用以释放所述一种或多种N-聚糖的量：在25℃与39℃之间或在35℃与39℃之间，每个都包含端值，任选地约37℃。
25.根据权利要求23或权利要求24所述的方法，其中所述酶促有效量的PNGaseF释放大于50％、大于55％、大于60％、大于65％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％、大于95％、大于99％的存在于所述一种或多种糖蛋白上和/或存在于所述细胞组合物的表面上的N-聚糖。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述孵育的条件足以实现释放大于50％、大于55％、大于60％、大于65％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％、大于95％、大于99％的存在于所述测试细胞组合物的表面上的N-聚糖。
27.根据权利要求11-26中任一项所述的方法，其中N-糖苷酶、任选地PNGaseF的量为1单位至5000单位、1单位至1000单位、1单位至500单位、1单位至250单位、1单位至100单位、1单位至50单位、1单位至25单位、25单位至5000单位、25单位至1000单位、25单位至500单位、25单位至250单位、25单位至100单位、25单位至50单位、50单位至5000单位、50单位至1000单位、50单位至500单位、50单位至250单位、50单位至100单位、100单位至5000单位、100单位至1000单位、100单位至500单位、100单位至250单位、250单位至5000单位、250单位至1000单位、250单位至500单位、500单位至5000单位、500单位至1000单位、或1000单位至5000单位，每个都包含端值。
28.根据权利要求11-27中任一项所述的方法，其中N-糖苷酶、任选地PNGaseF的量为大于或大于约或者为或为约1单位、5单位、10单位、15单位、20单位、25单位、50单位、100单位、250单位、500单位、1000单位、2500单位或5000单位。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的方法，其中一个单位是N-糖苷酶、任选地PNGaseF足以在37℃下在30分钟内催化1纳摩尔变性核糖核酸酶B(RNaseB)的去糖基化的量。
30.根据权利要求27或权利要求28所述的方法，其中500单位是N-糖苷酶、任选地PNGaseF足以在37℃或室温下催化在1XPBS中孵育5-10分钟的10μg核糖核酸酶B(RNaseB)的去糖基化的量。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中对所述测试组合物的孵育是持续如下的时间量：在或在约5分钟与12小时之间、30分钟与6小时之间或1小时与3小时之间，每个都包含端值。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其中对所述测试组合物的孵育是持续至少或至少约或者为或为约5分钟、约10分钟、约15分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时或6小时。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中对所述测试组合物的孵育是持续约30分钟。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中对所述测试组合物的孵育是在25℃与39℃之间或在35℃与39℃之间的温度下。
35.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中对所述测试组合物的孵育是在约37℃的温度下。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中对所述测试组合物的孵育是在约37℃的温度下持续约30分钟。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的方法，其中，在对样品中聚糖的存在、不存在、存在的聚糖的身份和/或水平的所述确定之前，所述方法还包括用可检测标记、任选地荧光标记对来自所述样品的聚糖进行标记。
38.根据权利要求14-37中任一项所述的方法，其中所述标记是荧光标记，并且所述荧光标记是或包括2-氨基苯甲酰胺(2-AB)、2-氨基苯甲酸(2-AA)、2-氨基吡啶(PA)、2-氨基吖啶酮(AMAC)、2-氨基萘三磺酸(ANTS)、和1-氨基芘-3,6,8-三磺酸(APTS)、3-(乙酰氨基)-6-氨基吖啶(AA-Ac)、6-氨基喹啉(6-AQ)、7-氨基甲基-香豆素(AMC)、2-氨基(6-酰胺基-生物素基)吡啶(BAP)、9-芴基甲氧基羰基(FMOC)-酰肼、1,2-二氨基-4,5-亚甲基二氧基-苯(DMB)、或邻苯二胺(OPD)。
39.根据权利要求14-38中任一项所述的方法，其中所述荧光标记包括喹啉基荧光团。
40.根据权利要求14-39中任一项所述的方法，其中所述荧光标记包括氨基甲酸酯标记基团。
41.根据权利要求14-40中任一项所述的方法，其中所述荧光标记包括碱性叔胺。
42.根据权利要求14-37和39-41中任一项所述的方法，其中所述荧光标记包括氨基甲酸酯标记基团、喹诺酮荧光团和叔胺。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中，在确定所述一种或多种聚糖的存在、不存在、身份和/或水平之前，对所述样品进行聚糖纯化或富集。
44.根据权利要求43所述的方法，其中聚糖纯化或富集通过固相萃取(SPE)进行。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的方法，其中确定所述一种或多种聚糖的存在、不存在、身份/或水平包括对所述样品进行质谱。
46.根据权利要求45所述的方法，所述质谱是电喷雾电离质谱(ESI-MS)、涡轮喷雾电离质谱、纳喷雾电离质谱、热喷雾电离质谱、声波喷雾电离质谱、表面增强激光解吸电离质谱(SELDI-MS)和基质辅助激光解吸/电离质谱(MALDI-MS)。
47.根据权利要求45或46所述的方法，其中所述质谱是MALDI-MS。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的方法，其中确定聚糖的存在、不存在、身份和/或水平包括对所述样品进行液相色谱(LC)，随后进行质谱。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述液相色谱是高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱(UHPLC)或超效液相色谱(UPLC)。
50.根据权利要求48或权利要求49所述的方法，其中所述液相色谱是超效液相色谱(UPLC)。
51.根据权利要求48-50中任一项所述的方法，其中所述液相色谱和质谱是联机进行的。
52.根据权利要求48-51中任一项所述的方法，其中所述液相色谱选自正相(NP-)、反相(RP)和亲水性相互作用色谱(HILIC)。
53.根据权利要求48-52中任一项所述的方法，其中所述液相色谱是亲水性相互作用色谱(HILIC)。
54.根据权利要求45-53中任一项所述的方法，其中所述质谱包括电喷雾电离质谱(ESI-MS)、涡轮喷雾电离质谱、纳喷雾电离质谱、热喷雾电离质谱或声波喷雾电离质谱。
55.根据权利要求45-54中任一项所述的方法，其中所述质谱包括ESI-MS。
56.根据权利要求45-55中任一项所述的方法，其中所述质谱包括串联质谱(MS/MS)。
57.根据权利要求45-56中任一项所述的方法，其中所述质谱包括串联ESI-质谱(ESI-MS/MS)。
58.根据权利要求45-57中任一项所述的方法，其中执行所述质谱的质谱仪包含四极杆、离子阱、飞行时间(TOF)或傅里叶变换离子回旋共振质量分析器中的一个或多个。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述质谱仪包含离子阱质量分析器，所述离子阱质量分析器是三维四极杆离子阱、圆柱形离子阱、线性四极杆离子阱或轨道阱质量分析器。
60.根据权利要求45-59中任一项所述的方法，其中所述质谱仪是四极杆轨道阱质谱仪。
61.根据权利要求1-60中任一项所述的方法，其中对所述一种或多种聚糖的存在、不存在、身份和/或水平的确定包括针对分支、单糖之间的连接和/或单糖的位置分析一种或多种聚糖结构。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的方法，其中所述一种或多种聚糖包括高甘露糖N-聚糖、平分型和唾液酸化路易斯XN-聚糖和/或含有N-乙酰乳糖胺的N-聚糖。
63.根据权利要求1-62中任一项所述的方法，其中所述一种或多种聚糖包含不具有还原端末端半乳糖残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有一个还原端末端半乳糖残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有两个还原端末端半乳糖残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、不具有还原端末端半乳糖残基的双触角复合型聚糖、具有一个还原端末端半乳糖残基的双触角复合型聚糖、具有两个还原端末端半乳糖残基的双触角复合型聚糖、具有两个半乳糖残基和一个N-乙酰神经氨酸残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有两个半乳糖残基和两个N-乙酰神经氨酸残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有两个半乳糖残基和两个N-乙酰神经氨酸残基的双触角复合型聚糖、具有五个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、具有六个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、具有七个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、具有八个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、和/或具有九个甘露糖残基的高甘露糖聚糖。
64.根据权利要求1-63中任一项所述的方法，其中对所述样品中聚糖的存在、不存在、存在的聚糖的身份和/或水平的所述确定包括确定至少25个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、或至少200个不同种类的聚糖的存在、不存在、身份和/或水平。
65.根据权利要求1-64中任一项所述的方法，其中将所述样品中聚糖种类的存在或存在的聚糖种类的水平确定为是否至少100amol、至少500amol、至少1fmol、至少5fmol、或至少10fmol的所述聚糖种类存在于所述样品中。
66.根据权利要求1-65中任一项所述的方法，其中将所述样品中聚糖种类的存在或存在的聚糖种类的水平确定为聚糖种类是否构成所述样品中的总聚糖的至少0.00001％、0.00005％、0.0001％、0.0005％、0.001％、0.005％、或0.01％。
67.根据权利要求62-66中任一项所述的方法，其中聚糖的所述种类是N-聚糖的种类。
68.根据权利要求1-67中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物是或包含至少一部分的源细胞组合物，所述至少一部分的源细胞组合物包含所述多种细胞。
69.根据权利要求1-68中任一项所述的方法，其中所述细胞包含哺乳动物细胞或者所述测试细胞组合物包含哺乳动物细胞。
70.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，其中所述细胞包含人细胞或者所述测试细胞组合物包含人细胞。
71.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述细胞包含干细胞或者所述测试细胞组合物包含干细胞。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述干细胞是诱导多能干细胞(iPSC)。
73.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物包含在单采术产物或白细胞分离术产物中存在的细胞或由其衍生的细胞。
74.根据权利要求1-70和73中任一项所述的方法，其中：
所述细胞包含免疫细胞、白细胞、外周血单核细胞(PBMC)、淋巴细胞或未分级的T细胞；或者
所述测试细胞组合物包含免疫细胞、白细胞、外周血单核细胞(PBMC)、淋巴细胞或未分级的T细胞。
75.根据权利要求1-74中任一项所述的方法，其中所述细胞包含免疫细胞，或者所述测试细胞组合物包含免疫细胞。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞或树突细胞。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的方法，其中所述细胞包含为CD4+和/或CD8+T细胞的T细胞，或者所述测试细胞组合物包含为CD4+和/或CD8+T细胞的T细胞。
78.根据权利要求1-77中任一项所述的方法，其中所述测试细胞组合物包含:
通过基于免疫亲和力的方法从生物样品中分离的细胞；和/或
用编码重组蛋白的病毒载体转导的细胞；和/或
在一种或多种测试剂、任选地一种或多种肽、蛋白质、多肽、核酸、小分子的存在下孵育的细胞；和/或
在一种或多种刺激条件的存在下激活和/或扩增的细胞；和/或
冷冻保存的细胞和/或包含冷冻保护剂的细胞；和/或
任选地在药学上可接受的赋形剂的存在下配制用于给予至受试者的细胞。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述测试剂是用于调节所述测试细胞组合物中的一种或多种细胞的生长、增殖、活力、分化、细胞内信号传导、激活和/或扩增的候选物。
80.根据权利要求78或权利要求79所述的方法，其中所述刺激条件包括与刺激试剂一起孵育，所述刺激试剂能够激活TCR复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域。
81.根据权利要求80所述的方法，其中所述刺激试剂包含与TCR复合物的成员特异性地结合的一级药剂和与T细胞共刺激分子特异性地结合的二级药剂。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述一级药剂特异性地结合CD3，和/或所述共刺激分子选自CD28、CD137(4-1-BB)、OX40或ICOS。
83.根据权利要求80-82中任一项所述的方法，其中刺激试剂包含抗CD3抗体或其抗原结合片段以及抗CD28抗体或其抗原结合片段。
84.根据权利要求80-83中任一项所述的方法，其中所述一级药剂和所述二级药剂包含抗体和/或存在于固体支持物的表面上。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述固体支持物是或包含珠。
86.根据权利要求1-85中任一项所述的方法，其中所述细胞表达重组受体或者所述测试组合物包含表达重组受体的细胞。
87.根据权利要求86所述的方法，其中所述重组受体是或包含嵌合受体和/或重组抗原受体。
88.根据权利要求86或权利要求87所述的方法，其中所述重组受体能够结合靶抗原，所述靶抗原与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关，对疾病、障碍或病症的细胞或组织是特异的，和/或在疾病、障碍或病症的细胞或组织上表达。
89.根据权利要求88所述的方法，其中所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫性疾病、炎性疾病、或肿瘤或癌症。
90.根据权利要求88或权利要求89所述的方法，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。
91.根据权利要求88-90中任一项所述的方法，其中所述靶抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CC基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、截短的表皮生长因子蛋白(tEGFR)、III型表皮生长因子受体突变(EGFRvIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、路易斯Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wilms肿瘤1(WT-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。
92.根据权利要求88-91中任一项所述的方法，其中所述重组受体是或包含功能性非TCR抗原受体或TCR或其抗原结合片段。
93.根据权利要求88-92中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
94.一种测定细胞组合物的方法，所述方法包括：
(a)根据权利要求1-93中任一项所述的方法，评估来自包含多种细胞的测试细胞组合物的样品中的细胞表面聚糖谱；并且
(b)将所述样品的细胞表面聚糖谱与参考样品的细胞表面聚糖谱进行比较。
95.一种测定细胞组合物的方法，所述方法包括将样品的细胞表面聚糖谱与参考样品的细胞表面谱进行比较，其中所述样品的细胞表面聚糖谱是或已经根据权利要求1-93中任一项所述的方法从包含多种细胞的测试细胞组合物确定。
96.根据权利要求94或权利要求95所述的方法，其中所述细胞表面聚糖谱包含至少25个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、或至少200个不同种类的聚糖，任选地不同种类的N-聚糖。
97.根据权利要求94-96中任一项所述的方法，其中所述细胞表面聚糖谱包含高甘露糖N-聚糖、平分型和唾液酸化路易斯XN-聚糖和/或含有N-乙酰乳糖胺的N-聚糖。
98.根据权利要求94-97中任一项所述的方法，其中所述细胞表面聚糖谱包含不具有还原端末端半乳糖残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有一个还原端末端半乳糖残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有两个还原端末端半乳糖残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、不具有还原端末端半乳糖残基的双触角复合型聚糖、具有一个还原端末端半乳糖残基的双触角复合型聚糖、具有两个还原端末端半乳糖残基的双触角复合型聚糖、具有两个半乳糖残基和一个N-乙酰神经氨酸残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有两个半乳糖残基和两个N-乙酰神经氨酸残基的岩藻糖基化双触角复合型聚糖、具有两个半乳糖残基和两个N-乙酰神经氨酸残基的双触角复合型聚糖、具有五个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、具有六个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、具有七个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、具有八个甘露糖残基的高甘露糖聚糖、和/或具有九个甘露糖残基的高甘露糖聚糖。
99.根据权利要求94-98中任一项所述的方法，其中所述细胞表面聚糖谱包括表E1中的聚糖或其亚组。
100.根据权利要求94-99中任一项所述的方法，其中所述参考样品是包含释放规范、标记要求或汇编规范的参考标准品。
101.根据权利要求94-100中任一项所述的方法，其中只有当所述组合物的细胞表面聚糖谱与所述参考样品基本上相同和/或只有当所述样品中存在的靶聚糖或多种靶聚糖中的每一种占总聚糖的百分比跟所述参考样品中存在的所述靶聚糖或所述多种靶聚糖中的每一种占总聚糖的百分比相差不超过25％、不超过20％或不超过10％的时候，才将所述细胞组合物释放用于治疗受试者。
102.根据权利要求101所述的方法，其中所述靶聚糖包含至少25个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、或至少2...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·K·柯达马，T·考斯基，M·穆贾西奇，K·M·普伦蒂斯，
申请(专利权)人：朱诺治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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