【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开文本提供了一种细胞或蛋白质治疗剂，其包含蛋白酶3(pr3)抗体结合结构域，如野生型pr3或突变型pr3蛋白。本公开文本还提供了包含细胞外pr3抗体结合结构域的嵌合自身抗体受体(caar)。本公开文本提供的caar包括这样的caar，其中细胞外pr3抗体结合结构域是能够被抗pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(anca)特异性结合的野生型或突变型pr3蛋白或其片段。本公开文本还提供了编码所提供的caar的多核苷酸、含有所提供的caar的基因工程化细胞如t细胞、以及相关方法及其在过继细胞疗法中的用途。
技术介绍
1、抗嗜中性粒细胞胞质抗体相关血管炎(aav)是一种以炎症和小血管损伤为特征的罕见的自身免疫性疾病。在嗜中性粒细胞的初级颗粒中发现的嗜中性粒细胞丝氨酸蛋白酶蛋白酶3(pr3)是aav中的主要自身抗原。由自身反应性b细胞产生的针对pr3的自身抗体(anca)通过激活损伤血管的引发的嗜中性粒细胞在aav的发展中至关重要。需要改进的方法来靶向和杀伤引起疾病的b细胞。提供了满足此类需求的实施方案。
技术实现思路
1、本文提供了一种嵌合自身抗体受体(caar)，所述嵌合自身抗体受体包含：(a)细胞外蛋白酶3(pr3)抗体结合结构域；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区。在一些实施方案中，所述caar进一步包含所述细胞外pr3抗体结合结构域与所述跨膜结构域之间的间隔子。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域来自人pr3蛋白或是其突变体。在任何实施方案的一些实施方案中，所述
2、在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域是突变型pr3蛋白，所述突变型pr3蛋白包含在选自以下的位置处的氨基酸取代：参考seq id no:1所示的位置的g4、h44、d91、d175和s176。在一些实施方案中，所述氨基酸取代选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c，或是其保守取代。在一些实施方案中，所述氨基酸取代选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c的氨基酸取代的保守氨基酸取代。
3、在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域是与野生型pr3蛋白(例如，seq id no:1所示的pr3蛋白)相比酶活性降低的突变型pr3蛋白。
4、所提供的实施方案包括嵌合自身抗体受体(caar)，所述嵌合自身抗体受体包含：(a)细胞外蛋白酶3(pr3)抗体结合结构域，其中所述pr3抗体结合结构域是与具有seq idno:1所示的序列的野生型pr3蛋白相比酶活性降低的突变型pr3蛋白；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区。
5、在一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在催化三联体中或附近的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述氨基酸取代在选自以下的活性位点残基中：参考seq id no:1所示的编号的h44、d91和s176。在一些实施方案中，所述氨基酸取代选自h44a、d91n、s176a和s176c。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在参考seq id no:1中的位置编号的位置h44处的氨基酸取代。
6、在一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在干扰底物结合口袋形成的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述位置是g4。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在参考seq id no:1中的位置编号的位置g4处的氨基酸取代。在任何实施方案的一些实施方案中，与seq id no:1所示的野生型pr3相比，所述突变型pr3蛋白包含1、2、3、4或5个氨基酸取代。在任何实施方案的一些实施方案中，与seq id no:1相比，所述突变型pr3蛋白包含单个氨基酸取代。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代g4p。
7、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)pr3抗体结合结构域；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区，其中所述pr3抗体结合结构域是包含所述氨基酸取代g4p的突变型pr3蛋白。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:9所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含与seq id no:9展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq idno:9中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代h44a。
8、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)pr3抗体结合结构域；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区，其中所述pr3抗体结合结构域是包含所述氨基酸取代h44a的突变型pr3蛋白。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:10所示的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含与seq idno:10展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:10所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域的氨基酸序列由seq id no:10所示的序列组成。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代d91n。在任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体结合结构域包含seq id no:4所示的氨基酸序列或与seq id no:4展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq idno:4中。
9、在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代d175n。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:7所示的氨基酸序列或与seq id no:7展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq id no:7中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代s176a或s176c。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:2所示的氨基酸序列或与seq id no:2展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq idno:2中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嵌合自身抗体受体(CAAR)，所述嵌合自身抗体受体包含：
2.根据权利要求1所述的CAAR，所述CAAR进一步包含所述细胞外PR3抗体结合结构域与所述跨膜结构域之间的间隔子。
3.根据权利要求1或2所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含在选自以下的位置处的氨基酸取代：参考SEQ ID NO:1中的位置编号的G4、H44、D91、D175和S176。
4.根据权利要求3所述的CAAR，其中所述氨基酸取代选自G4P、H44A、D91N、D175N、S176A和S176C。
5.根据权利要求3所述的CAAR，其中所述氨基酸取代是选自G4P、H44A、D91N、D175N、S176A和S176C的氨基酸取代的保守取代。
6.根据权利要求1或2所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含在催化三联体中或附近的氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自以下的活性位点残基中：参考SEQ ID NO:1所示的编号的H44、D91和S176。
7.根据权利要求6所述的CAAR，其中所述氨基酸取代选自H44A、D91N、
8.根据权利要求1-7中任一项所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含在参考SEQ IDNO:1中的位置编号的位置H44处的氨基酸取代。
9.根据权利要求1或2所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含在干扰底物结合口袋形成的位置处的氨基酸取代。
10.根据权利要求1-3和9中任一项所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含在参考SEQ ID NO:1中的位置编号的位置G4处的氨基酸取代。
11.根据权利要求3-10中任一项所述的CAAR，其中与SEQ ID NO:1所示的野生型PR3相比，所述突变型PR3蛋白包含1、2、3、4或5个氨基酸取代。
12.根据权利要求3-11中任一项所述的CAAR，其中与SEQ ID NO:1相比，所述突变型PR3蛋白包含单个氨基酸取代。
13.根据权利要求3-12中任一项所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含所述氨基酸取代G4P。
14.一种CAAR，所述CAAR包含：
15.根据权利要求1-5和7-14中任一项所述的CAAR，其中所述PR3抗体结合结构域包含与SEQ ID NO:9展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-5和7-15中任一项所述的CAAR，其中所述PR3抗体结合结构域包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求1-5和7-16中任一项所述的CAAR，其中所述PR3抗体结合结构域的氨基酸序列由SEQ ID NO:9所示的序列组成。
18.根据权利要求3-7中任一项所述的CAAR，其中所述突变型PR3蛋白包含所述氨基酸取代H44A。
19.一种CAAR，所述CAAR包含：
20.根据权利要求1-6、11和19中任一项所述的CAAR，其中所述PR3抗体结合结构域包含与SEQ ID NO:10展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。
21.根据权利要求1-6、11、19和20中任一项所述的CAAR，其中所述PR3抗体结合结构域包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1-6、11或19-21中任一项所述的CAAR，其中所述PR3抗体结合结构域的氨基酸序列由SEQ ID NO:10所示的序列组成。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜区是或包含来自CD4、CD28或CD8的跨膜结构域。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜区是或包含来自CD28、任选人CD28的跨膜结构域。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜区是或包含SEQ ID NO:26或与SEQ ID NO:26具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜区示于SEQ ID NO:26中。
27.根据权利要求1-22中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜区是或包含来自CD8a、任选人CD8a的跨膜结构域。
28.根据权利要求1-22和27中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜区是或包含SEQ IDNO:98或与SEQ ID NO:98具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种嵌合自身抗体受体(caar)，所述嵌合自身抗体受体包含：
2.根据权利要求1所述的caar，所述caar进一步包含所述细胞外pr3抗体结合结构域与所述跨膜结构域之间的间隔子。
3.根据权利要求1或2所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含在选自以下的位置处的氨基酸取代：参考seq id no:1中的位置编号的g4、h44、d91、d175和s176。
4.根据权利要求3所述的caar，其中所述氨基酸取代选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c。
5.根据权利要求3所述的caar，其中所述氨基酸取代是选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c的氨基酸取代的保守取代。
6.根据权利要求1或2所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含在催化三联体中或附近的氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自以下的活性位点残基中：参考seq id no:1所示的编号的h44、d91和s176。
7.根据权利要求6所述的caar，其中所述氨基酸取代选自h44a、d91n、s176a和s176c。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含在参考seq idno:1中的位置编号的位置h44处的氨基酸取代。
9.根据权利要求1或2所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含在干扰底物结合口袋形成的位置处的氨基酸取代。
10.根据权利要求1-3和9中任一项所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含在参考seq id no:1中的位置编号的位置g4处的氨基酸取代。
11.根据权利要求3-10中任一项所述的caar，其中与seq id no:1所示的野生型pr3相比，所述突变型pr3蛋白包含1、2、3、4或5个氨基酸取代。
12.根据权利要求3-11中任一项所述的caar，其中与seq id no:1相比，所述突变型pr3蛋白包含单个氨基酸取代。
13.根据权利要求3-12中任一项所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代g4p。
14.一种caar，所述caar包含：
15.根据权利要求1-5和7-14中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域包含与seq id no:9展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-5和7-15中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:9所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求1-5和7-16中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域的氨基酸序列由seq id no:9所示的序列组成。
18.根据权利要求3-7中任一项所述的caar，其中所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代h44a。
19.一种caar，所述caar包含：
20.根据权利要求1-6、11和19中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域包含与seq id no:10展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。
21.根据权利要求1-6、11、19和20中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:10所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1-6、11或19-21中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域的氨基酸序列由seq id no:10所示的序列组成。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的caar，其中所述跨膜区是或包含来自cd4、cd28或cd8的跨膜结构域。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的caar，其中所述跨膜区是或包含来自cd28、任选人cd28的跨膜结构域。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的caar，其中所述跨膜区是或包含seq id no:26或与seq id no:26具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的caar，其中所述跨膜区示于seq id no:26中。
27.根据权利要求1-22中任一项所述的caar，其中所述跨膜区是或包含来自cd8a、任选人cd8a的跨膜结构域。
28.根据权利要求1-22和27中任一项所述的caar，其中所述跨膜区是或包含seq idno:98或与seq id no:98具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
29.根据权利要求1-22、27和28中任一项所述的caar，其中所述跨膜区示于seq id no:98中。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的caar，其中所述细胞内信号传导区包含能够在t细胞中诱导初级激活信号的细胞内信号传导结构域。
31.根据权利要求30所述的caar，其中所述细胞内信号传导结构域是来自t细胞受体(tcr)组分的结构域和/或包含免疫受体酪氨酸激活基序(itam)。
32.根据权利要求30或权利要求31所述的caar，其中所述细胞内信号传导结构域是cd3-ζ(cd3ζ)链、任选人cd3ζ链的胞质信号传导结构域。
33.根据权利要求30-32中任一项所述的caar，其中所述细胞内信号传导结构域包含seq id no:28所示的序列或与seq id no:28具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
34.根据权利要求30-33中任一项所述的caar，其中所述细胞内信号传导结构域由seqid no:28所示的序列组成。
35.根据权利要求30-34中任一项所述的caar，其中所述细胞内信号传导区进一步包含共刺激信号传导区。
36.根据权利要求35所述的caar，其中所述共刺激信号传导区在所述跨膜区与所述细胞内信号传导结构域之间。
37.根据权利要求35或权利要求36所述的caar，其中所述共刺激信号传导区包含t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
38.根据权利要求35-37中任一项所述的caar，其中所述共刺激信号传导区包含cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域。
39.根据权利要求35-38中任一项所述的caar，其中所述共刺激信号传导区包含4-1bb、任选人4-1bb的细胞内信号传导结构域。
40.根据权利要求35-39中任一项所述的caar，其中所述共刺激信号传导区包含seq idno:27所示的序列或与seq id no:27具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
41.根据权利要求35-40中任一项所述的caar，其中所述共刺激信号传导区示于seq idno:27中。
42.根据权利要求2-41中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含免疫球蛋白的至少一部分或其变体。
43.根据权利要求2-42中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含免疫球蛋白的铰链区或其变体。
44.根据权利要求43所述的caar，其中免疫球蛋白的所述铰链区是igg4铰链区、任选人igg4铰链区或其变体。
45.根据权利要求42-44中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含与野生型igg4铰链区相比含有氨基酸cpsc至cppc的取代的变体igg4铰链区。
46.根据权利要求2-45中任一项所述的caar，其中所述间隔子的长度小于15个氨基酸。
47.根据权利要求2-45中任一项所述的caar，其中所述间隔子的长度在12与15个氨基酸之间。
48.根据权利要求2-47中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含seq id no:22或seqid no:23所示的序列。
49.根据权利要求2-48中任一项所述的caar，其中所述间隔子示于seq id no:22中。
50.根据权利要求2-45和48中任一项所述的caar，其中所述间隔子的长度在100与150个氨基酸之间，任选地长度在110与130个氨基酸之间。
51.根据权利要求2-45、48和50中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含免疫球蛋白的铰链区和免疫球蛋白的ch3区。
52.根据权利要求51所述的caar，其中所述间隔子包含igg4铰链区或其变体和igg4ch3区。
53.根据权利要求2-45、48和50-52中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含seq idno:24或seq id no:96所示的序列。
54.根据权利要求2-45、48和50-53中任一项所述的caar，其中所述间隔子示于seq idno:24中。
55.根据权利要求2-45和48中任一项所述的caar，其中所述间隔子的长度在200与250个氨基酸之间，任选地长度在220与240个氨基酸之间。
56.根据权利要求2-45、48和55中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含免疫球蛋白的铰链区、免疫球蛋白的ch2区或两种不同免疫球蛋白的嵌合ch2区以及免疫球蛋白的ch3区。
57.根据权利要求56所述的caar，其中所述间隔子包含igg4铰链区或其变体、含有igg4ch2的一部分和igg2 ch2的一部分的嵌合ch2区(igg2/4ch2区)以及igg4 ch3区。
58.根据权利要求2-45、48和55-57中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含seq idno:25或seq id no:97所示的序列。
59.根据权利要求2-45、48和55-58中任一项所述的caar，其中所述间隔子示于seq idno:25中。
60.根据权利要求2-41、46和47中任一项所述的caar，其中所述间隔子包含氨基酸ggggs(seq id no:99)。
61.根据权利要求2-41、46、47和60中任一项所述的caar，其中所述间隔子示于seq idno:99中。
62.根据权利要求2-41、46、47和60中任一项所述的caar，其中所述间隔子示于seq idno:100中。
63.根据权利要求1-58中任一项所述的caar，其中所述caar包含与seq id no:29、30、31、38、39、40、53、54、55、56、57、58、104、110或111中任一个所示的序列展现出至少85％序列同一性的氨基酸序列，任选地其中所述caar包含seq id no:29、30、31、38、39、40、54、55、56、57、58、59、104、110或111中任一个所示的序列。
64.一种caar，所述caar包含：
65.一种caar，所述caar包含与seq id no:55展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。
66.根据权利要求65所述的caar，其中所述caar包含seq id no:55所示的氨基酸序列。
67.一种caar，所述caar包含：
68.一种caar，所述caar包含与seq id no:57展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的h44a突变。
69.根据权利要求68所述的caar，其中所述caar包含seq id no:57所示的氨基酸序列。
70.一种caar，所述caar包含：
71.一种caar，所述caar包含与seq id no:104展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。
72.根据权利要求71所述的caar，其中所述caar包含seq id no:104所示的氨基酸序列。
73.一种caar，所述caar包含：
74.一种caar，所述caar包含与seq id no:110展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。
75.根据权利要求74所述的caar，其中所述caar包含seq id no:110所示的氨基酸序列。
76.一种caar，所述caar包含：
77.一种caar，所述caar包含与seq id no:111或119展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的h44a突变。
78.根据权利要求77所述的caar，其中所述caar包含seq id no:111或119所示的氨基酸序列。
79.根据权利要求1-78中任一项所述的caar，其中所述caar能够被抗pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(pr3-anca)特异性结合。
80.根据权利要求1-79中任一项所述的caar，其中所述pr3抗体结合结构域包含由抗pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(pr3-anca)识别的至少2、3、4、5、6或7个表位。
81.根据权利要求80所述的caar，其中所述表位选自anca2(aqphsrpymas，seq id no:90)、anca3(pgshfcgg，seq id no:91)、anca4(vvlgahnvrtq，seq id no:92)、anca5(flnnydae，seq id no:93)、anca6(pvphgtqc，seq id no:94)和anca7(cfgdsggp，seq idno:95)。
82.根据权利要求1-81中任一项所述的caar，其中所述caar对pr3反应性b细胞具有特异性。
83.根据权利要求1-82中任一项所述的caar，其中在内源性nur77基因座处敲入了td-tomato并且用所述caar转导的jurkat报告细胞展现出小于或小于约25％、小于或小于约20％、小于或小于约15％、小于或小于约10％、小于或小于约9％、小于或小于约8％、小于或小于约7％、小于或小于约5％、小于或小于约4％、小于或小于约3％、小于或小于约2％或者小于或小于约1％强直信号传导，如通过流式细胞术通过td-tomato的荧光所测量的，并且被测定为在所转导的jurkat报告细胞中表达td-tomato的细胞的总百分比。
84.根据权利要求1-83中任一项所述的caar...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·A·门萨，D·M·扎勒，S·A·萨恩斯，金希，W·A·约翰逊，G·C·瑞克斯兆，J·R·帕奎特，R·普伦格，S·J·戈尔费莱斯，J·L·丹茨勒，C·W·豪斯金斯，C·C·C·德伊穆斯，K·T·霍曼，S·杜塔，
申请(专利权)人：朱诺治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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