高含量4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用制造技术

本发明专利技术涉及食品检测领域，具体涉及高含量4‑羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用，同时，本发明专利技术提出了一种检测枣花蜂蜜的溯源识别方法，以4‑羟基喹啉为特征化合物，其在蜂蜜中含量介于3.5‑5.5 mg/kg时，可将其判断为枣花蜂蜜；否之，则将其判定为其它蜂蜜或掺假枣花蜂蜜。本发明专利技术提供的方法具有简单、高效等优点，便于操作和推广，对保护蜂蜜消费者的合法权益和维护蜂蜜消费行业健的康发展具有重要现实意义。

Application of high content 4-hydroxyquinoline as the characteristic marker of jujube honey

【技术实现步骤摘要】
高含量4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用
本专利技术涉及食品检测领域，具体涉及高含量4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用。
技术介绍
蜂蜜是由蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。由于蜂蜜具有丰富的营养价值，深受消费者青睐，其销售量也呈逐年上升趋势。我国疆域辽阔，地形复杂，气候多样，资源丰富，蜜源植物丰富多彩。我国的主要蜜源有：油菜、洋槐、枣花、荆条、椴树、紫云英、荔枝、枇杷等。其中枣花蜂蜜源植物在全国大部分省市均有栽培，尤其是在华北平原种植面积较大。2018年全国范围内枣花种植面积高达325万公顷，其中以山东、河北、山西、陕西和新疆最为集中。主产区的枣树开花为5月下旬或6月上旬，花期长25~30天，为高温型泌蜜植物。当前，蜂蜜的供需存在巨大的缺口使不法分子在利益的诱使下生产掺假蜂蜜。虽然我过蜂蜜行业标准规定，不得在蜂蜜中添加任何当前明确或不明确的添加物。而事实上，蜂蜜掺假现象长期存在，每年都会有质量抽查曝光相关问题产品，这严重损害了消费者和正规蜂蜜生产企业的利益，影响了蜂蜜产品的市场秩序。蜂蜜掺假有多种形式，在蜂蜜中掺入高纯度的果葡糖浆是蜂蜜掺假的主要形式之一，如大米糖浆、玉米糖浆、淀粉糖浆等。另一种蜂蜜掺假方式是向价值较高的单花蜜中掺入廉价的单花蜜或杂花蜜。当前现行的蜂蜜国家标准中仅仅对蜂蜜的理化性质和安全性指标做了严格限定，并未指出蜂蜜真实性评价的指标和方法。而且蜂蜜真实性评价指标的缺失为当前蜂蜜市场掺假售假的乱象提供了可能。枣花蜂蜜作为我国主要的单花蜜品种，因具有独特的养生美容保健等功效，深受人们喜爱。由于枣花蜂蜜产量有限，生产成本较高，导致枣花蜂蜜售价显著高于常见的其它单花蜜。不良企业为了追逐高额利润，往往会采用其它廉价蜂蜜冒充枣花蜂蜜，或者在枣花蜂蜜中勾兑其它廉价蜂蜜，更有甚者，在枣花蜂蜜中勾兑果葡糖浆。当前我国尚未制定有关枣花蜂蜜的标准，如何有效的评价和鉴定枣花蜂蜜成为当前蜂产品行业的亟需解决的问题之一。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术首先提出高含量4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用，所述高含量为3.5-5.5mg/kg。本专利技术发现4-羟基喹啉在枣花蜂蜜中含量高且相对稳定，显著高于常见的二十余种单花蜜，因此可以将高含量的4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜的特征标志物，用于评价枣花蜂蜜中是否掺入果葡糖浆，或者混入其它廉价蜂蜜。本专利技术进一步提出一种枣花蜂蜜的溯源识别方法，以4-羟基喹啉为特征标志物；若蜂蜜样本中4-羟基喹啉的含量介于3.5-5.5mg/kg时，判断所述蜂蜜样本为枣花蜂蜜；反之，则判定所述蜂蜜样本为其它蜂蜜或者掺假枣花蜂蜜。作为优选，通过加入4-羟基喹啉的空白蜂蜜确认4-羟基喹啉的含量与峰面积间的线性关系，根据蜂蜜样本中4-羟基喹啉的峰面积推算其含量。作为优选，采用UHPLC-Q-Orbitrap（超高液相色谱-高分辨质谱）或LC-MS/MS检测蜂蜜样本。作为优选，4-羟基喹啉在UHPLC-Q-Orbitrap的精确提取离子流色谱图中含有m/z146.06004（[M+H]+）准分子离子峰，其精确质量数的误差应当小于5ppm；优选4-羟基喹啉色谱峰的保留时间为4.71min，保留时间允许的偏差应小于0.3min。此外，为了提高对枣花蜂蜜的鉴别能力，4-羟基喹啉的精确质量数和保留时间除了满足上述条件之外，该物质的MS/MS图谱（子离子图谱）中应该含有m/z77.03859、m/z91.05423（C7H7+）、m/z94.06513、95.04914（C6H7O+）、m/z104.04948（C7H6N+）、m/z117.05730、m/z118.06513（C8H8N+）和m/z128.04948（C9H6N+）中的一个或多个碎片离子。上述碎片离子m/z值的偏差应小于10ppm。基于上述MS/MS图谱中提供的主要碎片离子，即便是在无4-羟基喹啉对照品的情况，依然可以通过判定蜂蜜样本中含有枣花蜂蜜，并可积分母离子峰面积用于枣花蜂蜜含量的计算。作为优选，4-羟基喹啉在LC-MS/MS检测中提取离子流色谱图中含有m/z146.10（[M+H]+）准分子离子峰；和/或，MS/MS谱图含有m/z51.00、m/z65.10、m/z77.00、m/z91.00、m/z94.20、m/z104.10、m/z117.10和m/z118.10中的一个或多个碎片离子。作为优选，采用UHPLC-Q-Orbitrap对蜂蜜样本进行检测时，液相条件如下：采用C18色谱柱，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为流动相B，采用梯度洗脱程序分离：0-2.0min，5%的流动相B；2.0-7.0min，5-30%的流动相B；7.0-14min，30-95%的流动相B；14-18min，95%的流动相B；18.0-18.1min，95-5%的流动相B；18.1-20.0min，5%的流动相B。优选液相的流速为0.30mL/min。优选进样量为5.0µL。作为优选，采用UHPLC-HRMS对蜂蜜样本进行检测时，质谱条件如下：离子源参数：鞘气的流速45；辅助气的流速10；挡锥气的流速0；电喷雾电压3.5kV；离子导管的温度320℃；S-lensRFlevel设为60；离子源的温度350℃；优选采集的模式为正离子模式下的FullMS-ddMS2：其中FullMS的具体参数设置如下：分辨率：70000；AGCTarget：3e6；MaximumIT：100ms；Scanrange：100-800Da；Spectrumdata：Centroid；其中dd-MS2的具体参数设置如下：分辨率：17500；AGCTarget：1.6e5；MaximumIT：50ms；Loopcount：1；Isolationwindow：2.0Da；NCE：90；Spectrumdata：Centroid；而ddsettings中，MinimumAGC：8.0e3；Apextrigger：2-6s；Excludeisotope：on；Dynamicexclusion：8.0s。采用LC-MS/MS对蜂蜜样本进行检测时，由于检测仪器的不同，LC-MS/MS的液相和质谱设置条件与UHPLC-Q-Orbitrap差异较大，优选液相条件如下：采用C18色谱柱（优选采用较短的C18色谱柱），柱温为25℃，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为流动相B；采用较短的梯度洗脱程序分离：0-0.5min，5%的流动相B；0.5-1.2min，5-20%的流动相B；1.2-1.5min，20-50%的流动相B；1.5-1.7min，50-95%的流动相B；1.7-2.3min，95%的流动相B；2.3-2.5min，95-5%的流动相B；2.5-3.0min，5%的流动相B。优选液相的流速为0.30mL/min。优选进样量为3.0µL。为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高含量4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用，所述高含量为3.5-5.5 mg/kg。/n

【技术特征摘要】
1.高含量4-羟基喹啉作为枣花蜂蜜特征标志物的应用，所述高含量为3.5-5.5mg/kg。


2.一种枣花蜂蜜的溯源识别方法，其特征在于，以4-羟基喹啉为特征标志物；若蜂蜜样本中4-羟基喹啉的含量介于3.5-5.5mg/kg时，判断所述蜂蜜样本为枣花蜂蜜；反之，则判定所述蜂蜜样本为其它蜂蜜或者掺假枣花蜂蜜。


3.根据权利要求2所述的溯源识别方法，其特征在于，采用UHPLC-Q-Orbitrap或LC-MS/MS检测蜂蜜样本。


4.根据权利要求3所述的溯源识别方法，其特征在于，4-羟基喹啉在UHPLC-Q-Orbitrap的精确提取离子流色谱图中含有m/z146.06004（[M+H]+）准分子离子峰，其精确质量数的误差应当小于5ppm；4-羟基喹啉色谱峰的保留时间为4.71min，保留时间允许的偏差应小于0.3min；
和/或，4-羟基喹啉的MS/MS图谱中应含有m/z77.03859、m/z91.05423、m/z94.06513、m/z95.04914、m/z104.04948、m/z117.05730、m/z118.06513和m/z128.04948中的一个或多个碎片离子，其精确质量数的误差应当小于10ppm。


5.根据权利要求3所述的溯源识别方法，其特征在于，4-羟基喹啉在LC-MS/MS检测中提取离子流色谱图中含有m/z146.10（[M+H]+）准分子离子峰；
和/或，MS/MS谱图含有m/z51.00、m/z65.10、m/z77.00、m/z91.00、m/z94.20、m/z104.10、m/z117.10和m/z118.10中的一个或多个碎片离子。


6.根据权利要求3或4所述的溯源识别方法，其特征在于，采用UHPLC-Q-Orbitrap对蜂蜜样本进行检测时，液相条件如下：
采用C18色谱柱，以0.1%的甲酸水为流动相A，0.1%的甲酸乙腈为流动相B，采用梯度洗脱程序分离：0-2.0min，5%的流动相B；2.0-7.0min，5-30%的流动相B；7.0-14min，30-95%的流动相B；14-18min，95%的流动相B；18.0-18.1min，95-5%的流动相B；18.1-20.0min，5%的流动相B。


7.根据权利要求3或4所述的溯源识别方法，其特征在于，采用UHPLC-HRMS对蜂蜜样本进行检测时，质谱条件如...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨术鹏，李熠，谭海广，周金慧，张金震，金钥，杨宇辉，黄京平，袁媛，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11