一种提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗、其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种提高动物繁殖力的AMH‑INH‑GNIH三表达基因疫苗及其工程菌的制作方法。该工程菌于2018年8月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2018544。将该工程菌直接免疫动物或与DNA疫苗佐剂混合后免疫动物，可有效提高动物的繁殖力。其三表达基因为抗穆勒氏管激素、抑制素和促性腺激素释放抑制激素的三表达非抗性DNA质粒，可以直接免疫动物，通过喷鼻、口服、拌饲等方式，经黏膜免疫产生抗体。由于不含抗性基因，不须引入外源抗生素进行筛选，所以不产生抗生素残留。相对于其它基因疫苗需要质粒提取、纯化，生产成本较高，肌肉注射麻烦，并使动物产生应激反应，该疫苗生产成本低，使用方便，而且无抗性和注射应激反应。

Amh-inh-gnih gene vaccine for improving animal fecundity, its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗、其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗及其制备方法与应用。
技术介绍
卵泡发育是一个周期性的过程，受多种激素的综合调控，即有促进卵泡发育的激素，如促性腺激素、促性腺激素释放激素，也有抑制卵泡发育的激素，如抗苗勒管素(Anti-Müllerianhormone，AMH)、卵泡抑制素(inhibin，INH)和促性腺激素释放抑制激素(Gonadotropininhibitinghormone,GnIH)等。AMH是参与调节生长和分化的糖蛋白转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员，对卵泡发育有抑制作用。敲除AMH能够解除其对原始卵泡的募集作用，使有腔卵泡数量增加。AMH能削弱生长因子Kit配体(KL)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和角化细胞生长因子(KGF)对原始卵泡发育的刺激作用，提示AMH能减少原始卵泡向初级卵泡的转变，抑制原始卵泡的基础性和刺激性发育。对山羊卵巢进行免疫组化分析，发现AMH本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗的工程菌，其特征在于，该工程菌于2018年8月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2018544。/n

【技术特征摘要】
1.一种含有提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗的工程菌，其特征在于，该工程菌于2018年8月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO：M2018544。


2.由权利要求1所述工程菌株制备方法制备的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗，可以用于提高动物繁殖力。


3.一种提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗，其特征在于，其依次包括tPA-SAMH基因、tPA-SINH基因和tPA-SRFRP基因。


4.根据权利要求3所述的三表达基因疫苗，其特征在于，所述tPA-SINH的基因序列如SEQIDNO.1所示，所述tPA-SRFRP的基因序列如SEQIDNO.2所示，所述tPA-SAMH的基因序列如SEQIDNO.3所示。


5.根据权利要求3所述的三表达基因疫苗，其特征在于，所述tPA-SAMH基因和tPA-SINH基因之间均连接有2A肽，所述tPA-SINH基因和tPA-SRFRP基因之间连接有2A'肽，所述2A肽的基因序列如SEQIDNO.4所示；2A'肽的基因序列如SEQIDNO.5所示。


6.一种'提高动物繁殖力的AMH-INH-GNIH三表达基因疫苗的制备方法，其特征在于如下操作步骤：
S1、构建双表达PVAX-tPA-SAMH-2A-tPA-SRFRP-asd和PVAX-tPA-SINH-2A'-tPA-SRFRP-asd质粒；
S2、将步骤S1中获得的质粒分别进行HindIII和BamHI酶切，之后连接，获得PVAX-tPA-SAMH-2A-tPA-SINH-2A'-tPA-SRFRP-asd三表达质粒。


7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述PVAX-tPA-SINH-2A'-tPA-SRFRP-asd质粒的构建采用如下方法：
S1101、以PVAX-tPA-SINH-asd为模板扩增tPA-SINH基因片段；所述tPA-SINHPCR的基因序列如SEQIDNO.1所示，
以PVAX-tPA-SRFRP-a...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨利国，唐姣美，周群莉，梁爱心，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42