【技术实现步骤摘要】
一种胞内外分泌4-α-糖基转移酶的基因工程菌及其发酵方法和应用
本专利技术属于酶基因工程和酶工程领域，涉及一种胞内外分泌4-α-糖基转移酶的基因工程菌及其发酵方法和应用。
技术介绍
来自嗜热栖热菌HB8(ThermusthermophilusHB8，ATTC27634)的4-α-糖基转移酶(4-α-glycosyltransferase，简称4GT，EC2.4.1.25)作用于淀粉，可断裂其α-1,4糖苷键，形成新的α-1,4糖苷键，致直链淀粉或支链淀粉的主链被分解，而支链淀粉的侧链长度将延长。与普通淀粉相比，这种被4GT改性过的淀粉，其回生特性改善，抗消化性提高，溶解性也增加，并且具有热可逆凝胶特性。这些性质提示4GT在食品、化妆品和医药等领域有较大的应用前景。目前应用的4GT主要来源于细菌，已发现嗜热放线菌，牛链球菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、栖热水生菌、海栖热袍菌、超嗜热古菌和嗜热栖热菌等多种细菌可产4GT。其中，源自嗜热栖热菌HB8的耐热4-α-糖基转移酶制剂4GT由于拥有催化效率高、酶促反应温度高...
【技术保护点】
1.一种胞内外分泌4-α-糖基转移酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通过将来源于嗜热栖热菌HB8的编码4GT的基因通过质粒pET-32a(+)导入大肠杆菌中得到；所述基因工程菌的胞内与胞外均能分泌4GT。/n
【技术特征摘要】
1.一种胞内外分泌4-α-糖基转移酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通过将来源于嗜热栖热菌HB8的编码4GT的基因通过质粒pET-32a(+)导入大肠杆菌中得到；所述基因工程菌的胞内与胞外均能分泌4GT。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码4GT的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
3.一种胞内外分泌4-α-糖基转移酶的基因工程菌的制备方法，其特征在于，将来源于嗜热栖热菌HB8的编码4GT基因导入质粒pET-32a(+)中，构建得到pET32a-4GT，然后转入感受态细胞BL21(DE3)中，通过选择培养基挑选得到包含该质粒的基因工程菌。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
1)扩增SEQIDNO.1所示的目的基因，连接到质粒pET-32a(+)上，转化至感受态的大肠杆菌DH5α，涂布于具有100μg/mL氨苄抗生素的固体培养基上，获取重组质粒pET32a-4GT；
2)将步骤(1)所述的重组质粒pET32a-4GT通过CaCl2转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中，涂布于具有100μg/mL氨苄抗生素的固体培养基上，获得包含该重组质粒pET32a-4GT的基因工程菌pET32a-4GT/BL21(DE3)。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述固体培养基为LB、TB、SOB和SOC；
其中，所述LB固体培养基的组成及含量为：胰蛋白胨/胰酪胨：10g/L，酵母提取物：5g/L，NaCl：10g/L，琼脂粉：1g/L-2g/L；最后用蒸馏水补充体系至1L，调节pH至7.0，121℃高温高压灭菌20min；
其中，所述TB固体培养基的组成及含量为：胰蛋白胨：2g/L；酵母提取物：24g/L；甘油：4mL/L；KH2PO4：2.2g/L：K2HPO4：9.4g/L；琼脂粉：1g/L-2g/L；调节pH至7.0，115℃高温高压灭菌20min；
其中，所述SOB固体培养基的组成及含量为：胰蛋白胨：20g/L；酵母提取物：5g/L；NaCl：0.5g/mL；KCl：2.5mM；MgCl2：2.5mM；琼脂粉：1g/L-2g/L；调节pH至7.0，115℃高温高压灭菌20min；
其中，所述SOC固体培养基的组成及含量为：胰蛋白胨：20g/L；酵母提取物：5g/L；NaCl：0.5g/mL；KCl：2.5mM；MgCl2：2.5mM；葡萄糖：20mM；琼脂粉：1g/L-2g/L；调节pH至7.0，115℃高温高压灭菌20min。
6.根据权利要求3-5之任一项方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄静，欧阳小英，万惠惠，施瑞，杨婷，朱锐，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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