植物乳杆菌CQPC02及其在制备改善便秘的食品中的应用制造技术

技术编号:23143913 阅读:18 留言:0更新日期:2020-01-18 11:32
本发明专利技术公开了保藏编号为CGMCC NO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02及其在制备改善便秘的食品中的应用,不仅扩大了植物乳杆菌CQPC02的应用范围,提高了其应用价值,而且给便秘的改善带来了新的希望。

Lactobacillus plantarum cqpc02 and its application in the preparation of food for improving constipation

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌CQPC02及其在制备改善便秘的食品中的应用
本专利技术属于微生物
,涉及一种植物乳杆菌及其在制备食品中的应用。
技术介绍
四川泡菜的生产过程是将新鲜的泡菜洗净,将泡菜密封在坛内,在盐水中厌氧发酵浸泡的泡菜。泡菜水中含有丰富的天然乳酸菌,对泡菜风味和品质的形成起着关键作用。其使用可溶性成分(主要是糖和含氮物质)进行增殖,产生酸性物质并代谢出风味成分,使泡菜产生了独特的酸脆口味。泡菜水中含有的微生物主要包括植物乳杆菌、L.短杆菌、干酪乳杆菌、发酵酵母菌、嗜酸乳杆菌等。乳酸菌种类的差异可能是由于地域、气候和生产工艺习惯等因素造成的。某些乳酸菌也被用作益生菌,对人体健康有多种益处,包括改善便秘、结肠炎和减肥等。为了更好的利用这些微生物资源,应开展更广泛的分离和鉴定工作,积累丰富的菌种资源,开发出丰富的工业用益生菌种类。
技术实现思路
本专利技术的目的在于对泡菜水中的微生物进行分离鉴定,并对其活性和应用进行研究。经研究,本专利技术提供如下技术方案:1.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CQPC02,保藏编号为CGMCCNO.14491。2.植物乳杆菌CQPC02在制备改善便秘的食品中的应用。进一步,所述食品为发酵饮料。更进一步,所述食品为发酵豆奶。3.由植物乳杆菌CQPC02发酵制成的饮料。进一步,所述饮料为豆奶。4.由植物乳杆菌CQPC02发酵制备豆奶的方法,包括以下步骤:用相当于大豆质量3倍的水浸泡大豆12小时,然后磨浆,过滤,以浓度105CFU/mL接种植物乳杆菌CQPC02,37℃发酵12小时。本专利技术对泡菜水中的微生物进行了分离鉴定,将其中一株植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)命名为CQPC02,于2017年8月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),保藏编号为CGMCCNO.14491。高效液相色谱(HPLC)法测定结果显示,与未发酵豆奶(U-FSM)和保加利亚乳杆菌发酵豆奶(LB-FSM)相比,植物乳杆菌CQPC02发酵豆奶(LP-CQPC02-FSM)中大豆异黄酮总含量最高,且含有更多的游离型糖苷(大豆苷元、黄豆黄素、染料木素)。LP-CQPC02-FSM对活性炭诱导便秘小鼠的实验结果显示:与模型组相比,LP-CQPC02-FSM能促进肠道蠕动,提高小肠推进率,缩短首粒黑便时间,能显著提高便秘小鼠血清MTL(胃动素)、Gas(胃泌素)、ET(内皮素)、AChE(乙酰胆碱酶)、SP(P物质)和VIP(血管活性肠肽)水平,同时显著降低SS(生长抑素)水平,能增加便秘小鼠小肠中c-Kit、SCF、GDNF和AQP9的mRNA表达,同时减少TRPV1和AQP3的mRNA表达,对便秘具有良好的改善效果,显著优于U-FSM和LB-FSM。本专利技术的有益效果在于:本专利技术提供了一种植物乳杆菌CQPC02,可以用于制备改善便秘的食品例如发酵饮料(例如发酵豆奶),可以有效地抑制便秘,且效果优于常用的保加利亚乳杆菌,不仅扩大了植物乳杆菌CQPC02的应用范围,提高了其应用价值,而且给便秘的改善带来了新的希望。附图说明图1为植物乳杆菌CQPC02的菌落形态。图2为植物乳杆菌CQPC02的革兰氏染色结果。图3为植物乳杆菌CQPC02的16SrDNAPCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图,其中M为DNA分子量标准,0为阴性对照,1为植物乳杆菌CQPC02。图4为HPLC法测定豆奶中大豆异黄酮的含量,其中A为混合标准液,B为-FSM),C为LB-FSM,D为LP-CQPC02-FSM;1—6号色谱峰依次为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素。图5为小鼠首粒黑便时间,a-e表示各组之间存在显著差异(p<0.05)。图6为小鼠小肠组织病理学切片观察。图7为小鼠小肠中c-Kit和SCFmRNA表达水平,a-e表示各组之间存在显著差异(p<0.05)。图8为小鼠小肠中TRPV1和GDNFmRNA表达水平,a-e表示各组之间存在显著差异(p<0.05)。图9为小鼠小肠中AQP3和AQP9mRNA表达水平,a-e表示各组之间存在显著差异(p<0.05)。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。一、植物乳杆菌CQPC02的分离与鉴定1、实验材料采自重庆市南岸区农家自然发酵泡菜水6份,分别吸取40mL泡菜水放入无菌离心管中,置于食品采样箱内,放于实验室4℃冰箱保存备用。2、乳酸菌的分离纯化分别取1mL泡菜水样品,用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6,然后取10-4、10-5、10-63个梯度的菌液100μL进行平板涂布,37℃培养24-48h,观察并记录菌落形态。挑取平板上不同形态的菌落进行划线分离,经37℃培养48h后,再次挑取平板上不同形态的单菌落进行划线分离,如此重复2至3次,直至得到形态一致的纯的单菌落。编号为CQPC02的菌株菌落形态如图1所示,菌落颜色多为白色或乳白色,形状为圆形,边缘整齐,表面湿润光滑。3、乳酸菌的初步鉴定挑取平板上的纯菌落接种于5mLMRS液体培养基中,37℃培养24h。取上述含菌培养基1mL于无菌离心管中,4000r/min离心10min后弃去上层培养基,菌体沉淀重悬于无菌生理盐水并进行革兰氏染色镜检,革兰氏染色镜检为阳性的初步鉴定为乳酸菌。编号为CQPC02的菌株革兰氏染色呈现阳性,在100倍油镜下,菌株细胞形态如图2所示,细胞形态有长杆、短杆,且不存在出芽生殖。4、乳酸菌DNA提取将已纯化的疑似目标菌株接种于MRS肉汤中,37℃培养18-24h后,采用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。提取的DNA放于-20℃冰柜保藏备用。5、基因组DNAPCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测取提取的DNA,PCR扩增16SrDNA,其中上游引物27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3',SEQIDNo.1)1μL、下游引物1495R(5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3',SEQIDNo.2)1μL,2×TaqplusBuffer12.5μL、模板DNA1μL,用无菌ddH2O将体系补足至25μL。并以无菌超纯水替代模板DNA作为阴性对照。扩增条件为:94℃5min;94℃30s,55℃30s,72℃1min,共29个循环;最后72℃延伸5min。然后取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,琼脂糖浓度为1.5%,电泳条件为110V,45min。编号为CQPC02的菌株16SrDNA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果如图3所示,阴性对照组的泳道无条带,表明PCR扩增过程中未受到污本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02,保藏编号为CGMCC NO.14491。/n

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CQPC02,保藏编号为CGMCCNO.14491。


2.权利要求1所述的植物乳杆菌CQPC02在制备改善便秘的食品中的应用。


3.如权利要求2所述的植物乳杆菌CQPC02在制备改善便秘的食品中的应用,其特征在于,所述食品为发酵饮料。


4.如权利要求3所述的植物乳杆菌CQPC02在制备改善便秘的食品中的应用,其特征在于,所述食...

【专利技术属性】
技术研发人员:赵欣杜木英周先容
申请(专利权)人:重庆第二师范学院
类型:发明
国别省市:重庆;50

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