一种类尿布皮炎的体外重组表皮模型的构建方法技术

本发明专利技术具体涉及一种类尿布皮炎的体外重组表皮模型的构建方法，该构建方法包括如下步骤，步骤（1）：表皮细胞的准备；步骤（2）：表皮细胞的液下培养；步骤（3）：表皮细胞增殖与分化调控；步骤（4）：类尿布皮炎体外重组表皮模型的构建；通过在各阶段的细胞培养液中添加特异性物质，调控角质形成细胞的增值与分化，得到屏障弱化的体外重组表皮模型，然后通过添加刺激物构建类尿布皮炎的体外重组表皮模型。采用本发明专利技术提供的方法构建的类尿布皮炎的体外重组表皮模型具有与正常病理状态下的组织切片相似的结构及相似的生化指标的变化，减少了种属差异及个体差异，大大提高了模型的真实有效性。

Construction of a recombinant skin model of diaper dermatitis in vitro

【技术实现步骤摘要】
一种类尿布皮炎的体外重组表皮模型的构建方法
本专利技术属于组织工程
，具体涉及一种类尿布皮炎的体外重组表皮模型的构建方法。
技术介绍
婴儿期皮肤是皮肤器官从子宫羊水环境过渡到成熟状态的一个重要阶段，其生理状态与成人存在着显著的差异。研究表明，与成人皮肤相比，新生儿皮肤具有如下特点：（1）角质层、表皮很薄、细胞较小，胶原纤维细小、稀疏、细胞密度相对较大，进而导致皮肤渗透性较高且容易因摩擦受损，尤其是皮肤褶皱处，更容易因摩擦增加，而导致皮肤破溃及尿布疹等问题；（2）天然保湿因子含量较低，经皮失水较多、吸收率较高，皮肤更易干燥；（3）出生时pH值较高、易受细菌侵袭，导致局部红肿破溃；（4）体表面积/体重较高，应用化学品有较高的易损性，对过敏物质或毒性物的反应也更加强烈；（5）新生儿汗腺与皮脂腺发育不成熟，皮肤温度调节能力较弱，当皮肤环境温度增高时更容易产生热扉与瘙痒，加之新生儿会本能地抓挠，极易引起皮肤破溃；（6）免疫系统还处于不断发展过程中，皮肤抵抗力较弱易激惹、易被感染，出现皮肤过敏等症状。相对于其他部位皮肤，新生儿臀部皮肤由于天天本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类尿布皮炎的体外重组表皮模型的构建方法，其特征在于，该构建方法包括如下步骤：/n步骤（1）：表皮细胞的准备/n取原代角质形成细胞，复苏扩增后，使用P3~P7代细胞，用胰酶消化液消化，用MCDB153培养基制成单细胞悬液，按照1.0×10

【技术特征摘要】
1.一种类尿布皮炎的体外重组表皮模型的构建方法，其特征在于，该构建方法包括如下步骤：
步骤（1）：表皮细胞的准备
取原代角质形成细胞，复苏扩增后，使用P3~P7代细胞，用胰酶消化液消化，用MCDB153培养基制成单细胞悬液，按照1.0×105～5×105个/mL的细胞密度，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2条件下培养；
步骤（2）：表皮细胞的液下培养
取对数生长期的表皮细胞，以细胞培养液Ⅰ制成细胞密度为1.25×106~2.5×106个/mL的表皮细胞悬浮液，取适量接种到含有聚碳酸酯滤膜的细胞培养小室中，置于37℃、5%CO2条件下培养0.5～2小时；然后将细胞培养小室置于表皮模型培养皿，每只培养皿添加60～80mL细胞培养液Ⅰ，37℃、5%CO2条件下继续培养1～3天，每天换液，实现表皮细胞的液下培养；
所述细胞培养液Ⅰ是以MCDB153为基础培养基，添加胰岛素、异丙肾上腺素、氢化可的松、表皮生长因子、腺嘌呤、转铁蛋白、L-肉碱和氯化钙配制的；
步骤（3）：表皮细胞增殖与分化调控
将上述步骤（2）中的细胞培养小室内的培养液弃掉，表皮模型培养皿内的培养液更换为细胞培养液Ⅱ，添加量为每只培养皿添加50~70mL细胞培养液Ⅱ，使液面与细胞培养小室内细胞上表面位于同一水平线，进行气液面培养，37℃、5%CO2条件下培养，培养时间为8~10天，培养期间每天换液，可得屏障弱化的体外重组表皮模型；
所述细胞培养液II是以MCDB153为基础培养基，添加胰岛素、异丙肾上腺素、氢化可的松、表皮生长因子、腺嘌呤、转铁蛋白、L-肉碱、L-丝氨酸、棕榈酸、油酸、精氨琥珀酸、氯化钙、角质细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子配制的；
步骤（4）：类尿布皮炎重组表皮模型的构建
将步骤（3）所得到的屏障弱化的体外重组表皮模型转移至多孔板中，每孔内预先添加适量培养液Ⅱ，在每孔的表皮模型表面添加质量体积浓度为0.15%的十二烷基硫酸钠，均匀涂抹后，置于37℃，5%CO2孵箱中后孵育2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴迪，张勇杰，胡成虎，何小宁，卢永波，
申请(专利权)人：广东博溪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44